由于骨髓檢查專業(yè)性和技術(shù)性較強(qiáng),不僅需要細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)等實(shí)驗(yàn)室知識(shí)和技術(shù),而且還需要較廣泛的臨床血液病知識(shí),因此交流骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查經(jīng)驗(yàn)十分必要。
1.一般質(zhì)量要求
1.1 載玻片的要求
載玻片的厚薄,清潔光滑和陳舊程度都會(huì)影響檢查的結(jié)果,推薦使用1~1.2 毫米 厚度:25.4×76.2 毫米長(zhǎng)度的載玻片。新玻片表面有游堿質(zhì),必須用1mol/L HCl 浸泡24小時(shí)后再用清水徹底清洗、干燥后備用。舊玻片用含氯消毒劑浸泡24小時(shí)后加入合成洗滌劑煮沸20分鐘,再用熱水將血膜洗去,用清水沖凈干凈,干燥備用。必要時(shí),可將其用95%乙醇浸泡1小時(shí),脫凈載玻片油脂,用蒸餾水洗凈后,干燥備用。
1.2 骨髓涂片的要求
一張良好的骨髓涂片,要求厚薄適宜,體尾分明、邊緣整齊,細(xì)胞分布均勻。髓膜長(zhǎng)度占載玻片的1/3左右,推片厚度應(yīng)適當(dāng)參考外周血計(jì)數(shù),如白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高明顯和外周血分類出現(xiàn)幼稚細(xì)胞者,應(yīng)當(dāng)適當(dāng)推薄片。而三系減少患者應(yīng)當(dāng)適當(dāng)推厚片。每一受檢病例骨髓涂片均應(yīng)該在8~1O張,以便存檔和做組織化學(xué)染色。
1.3 骨髓片的接受和編號(hào)登記
每張涂片中都應(yīng)注明患者的姓名、取材日期、編號(hào),血片以PB、骨髓片用BM表示。每份骨髓標(biāo)本都應(yīng)認(rèn)真核對(duì)申請(qǐng)患者的姓名、性別、年齡、床號(hào)、住院號(hào)等,并做好骨髓編號(hào),登記工作,以便查找和檔案管理。
1.4 染色
染色劑以Wright混合染色為佳。染液以覆蓋骨髓膜為宜,染色時(shí)間長(zhǎng)短與衛(wèi)生招聘網(wǎng)增生程度、髓膜厚度和室內(nèi)溫度有關(guān),增生程度高、髓膜厚、室內(nèi)溫度低染色時(shí)間長(zhǎng)、反之則染色時(shí)間短。染色效果,一般以加入第二液后低倍鏡下觀察到清晰分辨出中性分葉核后,流水沖洗干后鏡檢。
2.細(xì)胞分類要求
選擇體尾交界部或成熟紅細(xì)胞單個(gè)排列處進(jìn)行細(xì)胞分類:計(jì)數(shù)200~400個(gè)有核細(xì)胞。巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)低倍鏡下計(jì)算總數(shù),油鏡下進(jìn)行分類,計(jì)算各類巨核細(xì)胞積分比例。
3.血細(xì)胞化學(xué)染色方法和意義
血細(xì)胞化學(xué)染色是以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ),結(jié)合化學(xué)和生物化學(xué)技術(shù),對(duì)血細(xì)胞各化學(xué)成分,代謝產(chǎn)物作定位、定性、半定量和定量觀察的方法。主要有過(guò)氧化物酶染色、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色、酯酶染色、糖原染色、鐵粒染色。過(guò)氧化物酶染色主要是幫助鑒別急性白血病的類型。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色主要用于:(1)慢性粒細(xì)胞白血病與中性粒細(xì)胞類白血病反應(yīng)的鑒別。(2)陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿(PNH時(shí))與再生障礙性貧血的鑒別。(3)急性白血病類型的鑒別。(4)細(xì)菌與病毒性感染的鑒別。酯酶染色主要用于鑒別急性白血病類型。糖原染色主要用于:(1)鑒別幼稚紅細(xì)胞增生的性質(zhì)。(2)鑒別白血病類型。鐵染色只要用于鑒別缺鐵性貧血與非缺鐵性貧血。以及診斷鐵粒幼細(xì)胞性貧血。
4.報(bào)告的時(shí)間和診斷
報(bào)告時(shí)間:一般常見(jiàn)病骨髓片8 小時(shí)內(nèi)發(fā)出比較恰當(dāng),疑難骨髓片48小時(shí)內(nèi)發(fā)出,臨床急于了解病情可以口頭或電話方式簡(jiǎn)單報(bào)告,但以正式報(bào)告為準(zhǔn)。一般常見(jiàn)病骨髓報(bào)告由一名有經(jīng)驗(yàn)檢驗(yàn)者閱片后即可報(bào)告,疑難片最少需要2名有經(jīng)驗(yàn)檢驗(yàn)者共同閱片,甚至進(jìn)行全科討論或者與患者所在科室臨床醫(yī)生進(jìn)行溝通,結(jié)合臨床骨髓形態(tài)學(xué)和其它相關(guān)檢查,進(jìn)行綜合分析,加以診斷。
5.骨髓細(xì)胞分析儀的使用要求
采集的圖像一定要有代表性,要求細(xì)胞圖像清晰和真實(shí),不能隨意擴(kuò)大或縮小細(xì)胞的大小。
6.參加骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)質(zhì)量控制
建立技術(shù)考核標(biāo)準(zhǔn),定期參加室內(nèi)質(zhì)量控制。通過(guò)參加骨髓檢查室間質(zhì)評(píng),使科室在血液病細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面積累和增加一些經(jīng)驗(yàn)和知識(shí),從而提高日常骨髓報(bào)告的能力。
7.檔案的保存
我室骨髓細(xì)胞形態(tài)檢查檔案保存采用二種方或同時(shí)進(jìn)行。傳統(tǒng)方式:手工編號(hào),填寫相關(guān)資料,保存原始申請(qǐng)單和報(bào)告單。優(yōu)點(diǎn):骨髓涂片和組織化學(xué)染色保存完整,便于今后閱片和帶教,總結(jié)資料。缺點(diǎn):需要較大場(chǎng)地,查找不便。細(xì)胞圖象技術(shù),優(yōu)點(diǎn):報(bào)告圖象直觀,便于保存,查找方便,便于進(jìn)行統(tǒng)計(jì)量。缺點(diǎn):采集圖象存在局限性,帶教不便。