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病例組選自2005年8月-2007年12月期間就診于武漢同濟(jì)醫(yī)院，武漢協(xié)和醫(yī)院和武鋼總醫(yī)院的冠心病患者。CHD診斷依據(jù)WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)或經(jīng)冠脈造影顯示有一支或一支以上冠脈狹窄≥50%者。對(duì)照組來(lái)自2007年夏季武鋼總醫(yī)院體檢人群。正常對(duì)照組均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格病史詢(xún)問(wèn)、體格檢查、心電圖檢查和一般生化指標(biāo)檢查，檢查結(jié)果無(wú)CHD、嚴(yán)重的肝、腎疾病者入選，有周?chē)芗膊』蛑車(chē)芩ㄈ膊≌呔慈脒x。
1.2 DNA 的提取
基因組DNA抽提使用PUREGENE DNA提取試劑盒(德國(guó) Gentra公司)從全血中提取DNA，并于-80 ℃冰箱長(zhǎng)期保存。
1.3 基因型的測(cè)定
擴(kuò)增HSP701基因的上游引物為5′CTTCCCAGAGCGAACCTGTG3′，下游引物為5'GCAGAACACCGTGTTTGACG3′，用25 μL PCR反應(yīng)體系，反應(yīng)條件為94 ℃預(yù)變性5 min后、按94 ℃變性30 s、61 ℃退火45 s、72 ℃延伸1 min，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)，末次循環(huán)后72 ℃延伸10 min;20 μL酶切體系包括10 μL PCR 產(chǎn)物和5U限制性?xún)?nèi)切酶BsrB I，37 ℃酶切4 h。酶切及瓊脂糖凝膠電泳后可見(jiàn)在 351 bp的HSP701 PCR產(chǎn)物中，GG基因型攜帶者為171、116、64 bp共3個(gè)片段，GC基因型為287、171、116、64 bp共4個(gè)片段，CC基因型為287、64 bp的2個(gè)片段。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用SPSS 13.0軟件處理，等位基因頻率采用頻率計(jì)數(shù)法計(jì)算。組間基因型和等位基因頻率及計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)。以α=0.05為差異顯著性水平。
2 結(jié)果
2.1 研究對(duì)象一般人口學(xué)特征
納入本次研究的均為中國(guó)漢族人，冠心病組217例，其中男性133例，女性84 例，平均年齡(61.24±9.34)歲。對(duì)照組217例，其中男性133例，女性84例，平均年齡(62.08±8.17)歲。兩組性別、年齡構(gòu)成差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)醫(yī).學(xué).全.在.線52667788.cn。
2.2 遺傳平衡檢驗(yàn)
將對(duì)照組的HSP701基因各基因型代入HardyWeinberg遺傳平衡定律，進(jìn)行群體代表性檢驗(yàn)。結(jié)果HSP701各基因型頻率與期望值基本吻合(χ2=0.318，P>0.05)，基本符合HardyWeinberg遺傳平衡定律。
2.3 HSP701各基因型在病例組和對(duì)照組的分布
HSP701基因190位點(diǎn)各基因型及等位基因基因頻率在兩組人群的分布差異有顯著性(P<0.05)，見(jiàn)表1。表1 HSP701基因各基因型在病例組
3 討論
熱休克蛋白是生物細(xì)胞受到高溫、感染、炎癥、缺血等應(yīng)激刺激時(shí)產(chǎn)生的一種在進(jìn)化上高度保守的蛋白質(zhì)，具有廣泛的生物學(xué)功能。HSP70是HSP家族中最保守和最主要的一類(lèi)，HSP70具有多種生物學(xué)功能，包括分子伴侶功能，參與免疫反應(yīng)，抗細(xì)胞凋亡功能，抗氧化功能，提高細(xì)胞的應(yīng)激耐受性，促進(jìn)細(xì)胞增殖，參與細(xì)胞骨架的形成和修復(fù)等，廣泛的生物學(xué)功能使其成為當(dāng)今生命科學(xué)研究中的熱點(diǎn)[1]。
