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取雌性SD大鼠85只,除正常對照組10只外,其余75只去除雙側(cè)卵巢,手術(shù)后2周,將手術(shù)成功的大鼠隨機分組,每組10只。各組按下述劑量每日灌胃給予相應(yīng)藥物1次,正常對照組和模型組：等量生理鹽水;陽性對照組：3 g/kg六味地黃丸;工藝A組：11 g/kg;工藝B組：11 g/kg;陰性對照組：11 g/kg。每日灌胃1次,連續(xù)給藥4周。末次給藥30 min后,每鼠陰道內(nèi)緩緩注入新鮮配制的25 mg/mL TTC水溶液0.1 mL,于陰道內(nèi)停留30 min,取血,離心,取血清測E2、FSH、LH水平。立即處死,剪取大鼠陰道,縱行切開,分離陰道,剪碎后置離心試管中,加入無水乙醇和四氯乙烯混合溶液4 mL,浸泡提取2 h, 2 000 r/min離心5 min。吸取上清液,以無水乙醇和四氯乙烯混合液作空白對照,于490 nm處測定A值[2-4]醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站52667788.cn。
結(jié)果表明,工藝A組和工藝B組均可使卵巢摘除大鼠血清E2水平增高,與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。提示工藝A組和工藝B組具有調(diào)節(jié)機體激素水平的作用。工藝A組的OD值與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),提示工藝A組可明顯增加大鼠陰道角化上皮細(xì)胞,具有提高雌激素活性的作用。見表1、表2。表1 對卵巢摘除大鼠血清E2、FSH、LH活性的影響(—(—的)±s)表2 對卵巢摘除大鼠雌激素活性的影響(—(—巢)±s)
2.4 對幼鼠子宮、卵巢發(fā)育的影響
取未成熟ICR健康雌性幼鼠(體重14～18 g)60只,隨機分為空白對照組(灌胃等量生理鹽水)、陽性對照組(4.5 g/kg)、工藝A組(16.5 g/kg)、工藝B組(16.5 g/kg)、陰性對照組(16.5 g/kg)。各組均灌胃給予相應(yīng)藥物,劑量0.2 mL/10 g, 1次/d×10 d。末次給藥后12 h,脫頸椎處死,解剖,取子宮、卵巢、脾、胸腺,分離脂肪,迅速以電子天平稱重。計算脾、胸腺、卵巢、子宮系數(shù) [2]。結(jié)果表明,工藝A組促進(jìn)子宮、卵巢和胸腺生長,與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示工藝A組具有促進(jìn)子宮、卵巢發(fā)育的作用。見表3�！”�3 對幼鼠子宮、卵巢、脾、胸腺發(fā)育的影響(—(—鼠)±s)
3 討論
鞭類中藥飲片的服用方法主要包括研粉吞服、煮食和泡酒內(nèi)服。譚氏等[5]研究結(jié)果表明,狗鞭(黃狗腎)飲片勻漿后的混懸液對腎陽虛型動物有不同程度的壯陽作用;文獻(xiàn)報道其主要含雄性激素、蛋白質(zhì)、維生素E、脂肪和有機纖維等成分[6]。
本試驗結(jié)果表明,烏鱉顆粒中黃狗腎不同乙醇濃度提取工藝(工藝A和工藝B)的提取物均可使卵巢摘除大鼠血清E2水平增高;此外,用95%乙醇提取工藝(工藝A)制備的提取物還具有較好的提高大鼠雌激素活性,促進(jìn)子宮、卵巢生長的作用,這與烏鱉顆粒治療卵巢功能早衰目的一致。綜合上述分析,方中黃狗腎飲片應(yīng)用95%乙醇提取。
提取黃狗腎所用乙醇濃度不同,對藥效的影響也不同,濃度高者藥效明顯好,這是否提示黃狗腎中極性較低的成分是其有效成分,有待進(jìn)一步研究。
【參考文獻(xiàn)】
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[2] 李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)[M].上海：上�？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006.836.
[3] 張軍武.歸腎丸對大鼠卵巢早衰防治作用的實驗研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志,2008,10(6)：79-80.
[4] 戚本明,戚本玲.葛根提取物對正常及去勢大鼠血清雌激素水平影響的研究[J].中國中藥雜志,2002,27(11)：850-851.醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站52667788.cn
[5] 譚興貴,曾 嶸,賀福元.鹿鞭、狗鞭、牛鞭的壯陽作用實驗研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報,2001,29(6)：33-34.
[6] 竇立院.介紹柴狗腎[J].中藥飲片,1993,(1)：32-33.
