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1.3 細(xì)胞毒性實驗
取對數(shù)生長期細(xì)胞，按8×104/孔接種于96孔板中（200 μL/孔)，每組設(shè)6個重復(fù)孔。SFN孵育結(jié)束前4 h各孔加入MTT溶液20 μL（5 mg/mL)，隨后棄上清，并加入200 μL DMSO，充分混勻，用酶標(biāo)儀測定各孔的吸光度值（OD570)，計算細(xì)胞的相對活性，計算公式為：處理組OD值/對照組OD值×100%。
1.4 ELISA
采用雙抗體夾心ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中的IL-1β和HO-1，按照深圳欣博盛生物技術(shù)有限公司提供的試劑盒操作進(jìn)行。其檢測下限分別為10 pg/mL和5 pg/mL。
1.5 統(tǒng)計學(xué)分析
采用SPSS 15.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s)表示，多組比較采用One-way方差分析并行Student’s t檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 不同濃度SFN對bEnd.3細(xì)胞生長抑制率的影響
為了探索SFN唑最佳的作用濃度，本研究采用（0～30) μg/mL對bEnd.3細(xì)胞的活性進(jìn)行了觀察，結(jié)果顯示，（0～30) μg/mL SFN唑?qū)End.3細(xì)胞增殖活性無明顯影響（圖1)，因此隨后的實驗將用濃度高達(dá)30 μg/mL的SFN進(jìn)行。
2.2 SFN對TNF-α誘導(dǎo)bEnd.3細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β的影響
TNF-α刺激前，bEnd.3細(xì)胞無IL-1β產(chǎn)生。5 ng/mL TNF-α處理后，IL-1β含量明顯升高。而10～30 μg/mL SFN能明顯降低TNF-α誘導(dǎo)的IL-1β產(chǎn)生，見圖2。
2.3 SFN對HO-1表達(dá)的影響
ELISA結(jié)果顯示，bEnd.3細(xì)胞未刺激條件下HO-1表達(dá)水平較低。TNF-α處理后HO-1表達(dá)有所增加；而SFN處理后，與TNF-α相比HO-1表達(dá)進(jìn)一步增高（圖3)。
2.4 HO-1抑制劑與激動劑對TNF-α誘導(dǎo)bEnd.3細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β的影響
HO-1抑制劑ZnPP預(yù)處理后，能減弱SFN對IL-1β的抑制作用。而HO-1激動劑CoPP則能進(jìn)一步協(xié)同SFN降低TNF-α誘導(dǎo)的IL-1β產(chǎn)生（圖4)醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站52667788.cn。
