葛根芩連微丸—葛根素的測定—高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測定葛根芩連微丸中葛根素的含量。

本方法適用于中成藥葛根芩連微丸。

供試品加甲醇進(jìn)行熱回流，放冷，濾過，濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長250nm處檢測葛根素（C₂₁H₂₀O₉)的吸收值，計(jì)算出其含量。

1. 甲醇（色譜純)

2. 乙腈

1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

ODS柱（250 × 4mm， 5μm)

1.3 紫外－可見二極管陣列檢測器

2 色譜條件

2.1 流動相：甲醇 乙腈 水 ＝12 8 80

2.2 檢測波長：250nm

2.3柱溫：室溫

1. 稱取供試品

精密稱取本品粉末（過五號篩-80目)約0.3g。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取葛根素對照品，加乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。

3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

分別精密量取對照品溶液0.20、0.40、0.60、0.80，1.00mL，置于5mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4. 供試品溶液的制備

將供試品置于三角燒瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定，水浴加熱回流提取1 h，放冷至室溫，精密稱量，用甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，過濾。取續(xù)濾液，用0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液5µL，進(jìn)入高效液相色譜儀，用紫外檢測器測定葛根素的吸收值，以峰面積積分值對標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。

2.供試品的測定

分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各5μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長250nm處測定葛根素（C₂₁H₂₀O₉)的吸收值，計(jì)算出其含量。

吳紹輝、譚曉梅、羅佳波等. 高效液相色譜法測定葛根芩連微丸中葛根素的含量. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，1999，5（6)：9-11.