| 公開(公告)號 | CN1250739C |
| 公開(公告)日 | 2006.04.12 |
| 申請(專利)號 | CN01120369.2 |
| 申請日期 | 2001.08.23 |
| 專利名稱 | 低成癮性鎮(zhèn)痛藥物高通量篩選平臺 |
| 主分類號 | C12Q1/04(2006.01)I |
| 分類號 | C12Q1/04(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 段海清;張兆山 |
| 地址 | 100071北京市豐臺區(qū)東大街20號國家生物醫(yī)學(xué)分析中心 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 關(guān) 暢 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種低成癮性鎮(zhèn)痛藥物的高通量篩選方法，包括以下步驟： 1)將無血清微載體培養(yǎng)的CHO衍生工程細(xì)胞株CHO-OPR8CGMCC№0613及CHO衍生工程細(xì)胞株CHO-PCGMCC№0612分別裝入層析柱中，得到CHO-OPR8層析柱及CHO-P層析柱；所述微載體培養(yǎng)是在培養(yǎng)基中加入了2-20mg/ml的大孔徑明膠微載體； 2)將待選擇的5肽庫和15肽庫分別上樣到CHO-OPR8層析柱，洗滌層析柱后采用洗脫液洗脫與CHO-OPR8特異結(jié)合的樣品，將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱，收集穿過峰，得到第一輪篩選出的候選多肽； 3)將第一輪篩選出的候選多肽再上樣到CHO-OPR8層析柱，將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱，收集穿過峰，得到第二輪篩選出的候選多肽； 4)將第二輪篩選出的候選多肽再上樣到CHO-OPR8層析柱，將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱，收集穿過峰，得到第三輪篩選出的候選多肽； 5)將最后一輪篩選的噬菌體全部轉(zhuǎn)染K91Kan，挑選陽性菌株進行接種培養(yǎng)，提取質(zhì)粒，進行序列分析； 6)將復(fù)制型噬菌體質(zhì)粒的序列分析結(jié)果與空載體的序列進行比較，尋找插入片段的核苷酸序列，推導(dǎo)出氨基酸序列，并將序列進行一級結(jié)構(gòu)的比較和二級結(jié)構(gòu)的分析，得到目的多肽。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一個低成癮性鎮(zhèn)痛藥物高通量篩選平臺。低成癮性鎮(zhèn)痛藥物的高通量篩選方法包括以下步驟：1)將細(xì)胞株CHO-OPR8及CHO-PCGMCC分別裝入層析柱中，得到CHO-OPR8層析柱及CHO-P層析柱；2)將待選擇的5肽庫和15肽庫分別上樣到CHO-OPR8層析柱，將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱，收集穿過峰，得到第一輪篩選出的候選多肽；3)第二輪洗滌；4)第三輪洗滌；5)將最后一輪篩選的噬菌體全部轉(zhuǎn)染K91Kan，挑選陽性菌株進行接種培養(yǎng)，提取質(zhì)粒，進行序列分析；6)將復(fù)制型噬菌體質(zhì)粒的序列分析結(jié)果與空載體進行比較，尋找插入片段的核苷酸序列，推導(dǎo)出氨基酸序列，得到目的多肽。 |
| 國際公布 |
