| 公開(公告)號(hào) | CN1238498C |
| 公開(公告)日 | 2006.01.25 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410025862.6 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.02.12 |
| 專利名稱 | 動(dòng)物細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)工藝過程控制參數(shù)的方法 |
| 主分類號(hào) | C12N5/16(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N5/16(2006.01)I;C12P21/00(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 陳志南 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 米 力;馮 強(qiáng);李 玲;王賢輝 |
| 地址 | 710032陜西省西安市長(zhǎng)樂西路17號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 李鄭建 |
| 國(guó)省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種動(dòng)物細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)工藝過程控制參數(shù)的方法，動(dòng)物細(xì)胞包括雜交瘤或CHO或SP2/0或NSO工程細(xì)胞，這些細(xì)胞分泌表達(dá)重組蛋白治療藥物；培養(yǎng)工藝控制流加濃縮的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物的速率，結(jié)合灌流無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基，降低有害毒附產(chǎn)物的濃度；其特征在于，包括以下步驟：1)用機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器無血清懸浮培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞，起始接種細(xì)胞密度為1×105～3×105細(xì)胞/ml；培養(yǎng)環(huán)境維持在溫度36℃-37℃，pH值為6.5-7.4，攪拌速度40-80轉(zhuǎn)/分、溶氧濃度40％～80％；2)培養(yǎng)過程中的參數(shù)主要針對(duì)特定細(xì)胞生長(zhǎng)代謝需求，設(shè)定谷氨酰胺、葡萄糖、氨、乳酸的上/下限濃度指標(biāo)，控制流加濃縮的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物的速率；過程控制的參數(shù)包括：a.無血清培養(yǎng)基起始谷氨酰胺的濃度為2.0～3.5mM；b.無血清培養(yǎng)基起始葡萄糖的濃度為0～5g/L；c.培養(yǎng)過程中，谷氨酰胺的最低下限為0.1～0.3mM；d.培養(yǎng)過程中，葡萄糖的最低下限為0.25～0.5g/L；e.培養(yǎng)過程中，氨離子的最高上限為2～4mM；f.培養(yǎng)過程中，乳酸的最高上限為15～25mM；g.培養(yǎng)過程中，通過氧氣攝入率的變化，即時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)；h.培養(yǎng)過程細(xì)胞的氧氣攝入率在0.10×10-12～0.15×10-12mol/細(xì)胞/h；當(dāng)該值小于0.07×10-12mol/細(xì)胞/h，需改變流加速率或灌流速率，或調(diào)整培養(yǎng)環(huán)境；i.當(dāng)培養(yǎng)液中谷氨酰胺、葡萄糖濃度低于下限時(shí)，開始流加濃縮營(yíng)養(yǎng)物；當(dāng)培養(yǎng)液中氨和乳酸的濃度高于上限時(shí)，開始灌流無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基，灌流速率為0.3-0day1；3)培養(yǎng)過程細(xì)胞由對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)入平穩(wěn)期并維持較長(zhǎng)時(shí)間，其產(chǎn)物濃度逐漸升高，當(dāng)細(xì)胞群體生長(zhǎng)處于衰退期且產(chǎn)物濃度不再持續(xù)增加時(shí)停止培養(yǎng)。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種動(dòng)物細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)重組蛋白治療藥物的工藝過程控制參數(shù)方法，該工藝采用流加濃縮的能源物質(zhì)和氨基酸，結(jié)合灌流基礎(chǔ)培養(yǎng)基的方法。過程控制參數(shù)主要針對(duì)特定細(xì)胞生長(zhǎng)代謝需求，設(shè)定谷氨酰胺、葡萄糖、氨、乳酸的上/下限濃度指標(biāo)，控制流加濃縮的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物的速率，結(jié)合灌流無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基降低代謝產(chǎn)物濃度的方法；采用氧氣攝入率即時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)；用計(jì)算機(jī)程控補(bǔ)料系統(tǒng)精確控制流加速率；該工藝特別適宜雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)治療用抗體，具有穩(wěn)定性好、可控性強(qiáng)、過程控制指標(biāo)明確、可操作性強(qiáng)、批次間結(jié)果差異小，等特點(diǎn)。 |
| 國(guó)際公布 |
