| 公開(公告)號 | CN1641026A |
| 公開(公告)日 | 2005.07.20 |
| 申請(專利)號 | CN200410025834.4 |
| 申請日期 | 2004.01.17 |
| 專利名稱 | 基因工程重組胸腺素α1的制備工藝 |
| 主分類號 | C12N15/16 |
| 分類號 | C12N15/16 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 黨化寧 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 黨化寧 |
| 地址 | 710118陜西省西安市高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)長安科技園西部大道66號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 西安新思維專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 黃秦芳 |
| 國省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 基因工程重組胸腺素α1的制備工藝，其特征在于：它它依次包括下述步驟，(1)、重組Tα1基因工程菌的構(gòu)建：按照大腸桿菌慣用密碼子將Tα1的28個(gè)氨基酸轉(zhuǎn)化為核苷酸序列，在其基因前依次設(shè)計(jì)上核酸內(nèi)切酶EcoRI、蛋氨酸、內(nèi)切酶BaomHI、天冬酰氨和甘氨酸對應(yīng)的核苷酸序列；在其基因后依次設(shè)計(jì)上甘氨酸、核酸內(nèi)切酶BglII、終止密碼子和核酸內(nèi)切酶PstI對應(yīng)的核苷酸序列，采用克隆載體酶切后實(shí)現(xiàn)基因的串聯(lián)EcoRIMetBamHIAsnGly——GlyBglIIStopPstIGAATTCATGGGATCCAACGGC——GGCAGATCTTGACTGCAG得到Tα1的n(2-8)串體，分別表示為Tα1①、Tα1②、Tα1③……Tα1其表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌得到基因工程菌；(2)對基因工程菌進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)；(3)基因工程菌的培養(yǎng)和高密度發(fā)酵；(4)融合蛋白的粗提、純化和裂解：①所述粗提用高溫驟冷方法；②所述純化是層析方法；③所述裂解是用羥胺法進(jìn)行裂解，裂解出天然Tα1單體。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及基因工程藥物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及基因工程重組胸腺素α1的制備工藝。本發(fā)明要克服現(xiàn)有技術(shù)存在的成本高、價(jià)格昂貴，樣品純化復(fù)雜且污染環(huán)境的問題。它依次包括下述步驟，(1)重組胸腺素α1基因工程菌的構(gòu)建：按照大腸桿菌慣用密碼子將Tα1的28個(gè)氨基酸轉(zhuǎn)化為核苷酸序列，在其基因前依次設(shè)計(jì)上核酸內(nèi)切酶EcoRI、蛋氨酸、內(nèi)切酶BamHI、天冬酰氨和甘氨酸對應(yīng)的核苷酸序列；在其基因后依次設(shè)計(jì)上甘氨酸、核酸內(nèi)切酶BglII、終止密碼子和核酸內(nèi)切酶PstI對應(yīng)的核苷酸序列，采用酶切后實(shí)現(xiàn)基因的串聯(lián)，得到Tα1的n(2-8)串體；(2)對基因工程菌進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)；(3)誘導(dǎo)基因工程菌的培養(yǎng)和高密度發(fā)酵；(4)融合蛋白的粗提、純化和裂解；(5)胸腺素α1的純化。 |
| 國際公布 |
