| 公開(公告)號 | CN1200097C |
| 公開(公告)日 | 2005.05.04 |
| 申請(專利)號 | CN00127953.X |
| 申請日期 | 2000.12.19 |
| 專利名稱 | 重組人表皮生長因子、其制備方法和藥物組合物 |
| 主分類號 | C12N1/20 |
| 分類號 | C12N1/20;C12N15/63 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 甘人寶;李載平;錢悅;黃培勇 |
| 地址 | 200031 上海市岳陽路320號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 章鳴玉 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 重組人表皮生長因子的制備方法，包括以下步驟：用大腸桿菌偏愛的密碼子構(gòu)建和克隆合成的hEGF基因；構(gòu)建和克隆堿性磷酸酯酶啟動基因和信號肽序列基因片段phoA-P+sig；構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pAE-8；用表達(dá)質(zhì)粒pAE-8轉(zhuǎn)化宿主菌并篩選得到工程菌株EE-8；將工程菌EE-8在控制無機(jī)磷含量的Lpi培養(yǎng)基中或中試規(guī)模的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)表達(dá)rhEGF；其中所述控制無機(jī)磷含量的Lpi培養(yǎng)基的配方如下：每50ml液體培養(yǎng)基中含：氨芐青霉素鈉最終濃度為100μg/mlPolypepton0.5g酵母提取物0.05g1MTrisCl，pH7.2，2.5ml葡萄糖0.5gMgSO47H2O0.05g飽和酚紅100μl；所述中試規(guī)模的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方如下：Polypepton2％、酵母提取物1％、無水硫酸鎂0.05％、無水葡萄糖3％及Na2HPO4·12H2O0.06％，NaH2PO4·2H2O0.04％重量/體積。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供工程菌株EE-8和用其制備重組人表皮生長因子的方法，包括：用大腸桿菌偏愛的密碼子構(gòu)建和克隆合成的hEGF基因；構(gòu)建和克隆堿性磷酸酯酶啟動基因和信號肽序列基因片段phoA-P+sig；構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pAE-8；用表達(dá)質(zhì)粒pAE-8轉(zhuǎn)化宿主菌并篩選得到工程菌株EE-8；和將工程菌EE-8在控制無機(jī)磷含量的Lpi培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)表達(dá)rhEGF。該方法能高效、穩(wěn)定地分泌表達(dá)rhEGF。本發(fā)明還提供治療消化道潰瘍用的rhEGF藥物組合物，能在胃內(nèi)緩慢持續(xù)釋放藥物，發(fā)揮持久療效。 |
| 國際公布 |
