公開(公告)號
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CN1198937C
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公開(公告)日
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2005.04.27
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申請(專利)號
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CN99800113.9
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申請日期
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1999.01.29
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專利名稱
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利用輔助肽制造肽的方法
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主分類號
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C12N15/62
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分類號
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C12N15/62;C12P21/02;C12P21/06;A61K38/28;C12N1/21;C12N5/10
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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1998.1.30 JP 32272/1998
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申請(專利權(quán))人
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第一三得利制藥株式會社
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發(fā)明(設(shè)計)人
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大末和廣;田雅之;鈴木雄司
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地址
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日本東京
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頒證日
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國際申請
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PCT/JP1999/000406 1999.1.29
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進入國家日期
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1999.09.30
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專利代理機構(gòu)
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中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務(wù)所
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代理人
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隗永良
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國省代碼
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日本;JP
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主權(quán)項
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具有所需生物學活性的肽的制造方法,該方法包括如下工序:工序(1):利用含有編碼在附加了輔助肽的目的肽基礎(chǔ)上又進一步附加了保護肽的融合蛋白的堿基序列的表達載體轉(zhuǎn)化細胞,然后培養(yǎng)該轉(zhuǎn)化細胞,從該培養(yǎng)物中收集上述融合蛋白;這里,在(a)所述輔助肽與目的肽之間、以及(b)保護肽與構(gòu)成附加了輔助肽的目的肽的該輔助肽或該目的肽之間存在斷裂位點,工序(2):從該融合蛋白中裂解分離附加了輔助肽的目的肽與保護肽,按照要求純化附加了輔助肽的目的肽;工序(3):從工序(1)或工序(2)得到的附加了輔助肽的目的肽中裂解分離輔助肽與目的肽,按照需要純化目的肽,以及工序(4):對在工序(3)中得到的目的肽進行純化。
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摘要
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在通過基因重組制造具有生物學活性的目的肽過程中,其特征是在目的肽上附加了輔助肽后使其表達。通過這樣操作調(diào)整了等電點,可以防止回收和純化工序中的凝集,提高離子交換層析的回收率,提高在使目的肽在以與其它肽形成的融合蛋白形式表達的情況下通過酶裂解使目的肽游離之際酶反應(yīng)時的該融合蛋白的溶解度,提高在目的肽必須通過酶修飾的情況下酶反應(yīng)時的該肽的溶解度,這樣以來可以使目的肽的純化效率以及收率提高。
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國際公布
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WO1999/038984 日 1999.8.5
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