公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1194086C
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公開(kāi)(公告)日
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2005.03.23
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申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)
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CN02100859.0
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申請(qǐng)日期
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2002.02.01
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專(zhuān)利名稱(chēng)
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一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑的制備方法
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主分類(lèi)號(hào)
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C12N5/08
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分類(lèi)號(hào)
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C12N5/08;A61K35/54;A61K35/30;A61P43/00;A61P25/00;A61P21/00
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人
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北京科宇聯(lián)合干細(xì)胞生物技術(shù)有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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沈麗;李凌松;張浣清;李肖霞
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地址
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100083 北京市學(xué)院路38號(hào)北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部會(huì)議中心一層北翼
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu)
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北京元中知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
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代理人
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王明霞;母宗緒
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國(guó)省代碼
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北京;11
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主權(quán)項(xiàng)
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一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑的制備方法,其特征在于人死亡胚胎腦組織用消化液消化后加入培養(yǎng)基中止消化,離心后加入培養(yǎng)基機(jī)械吹打?yàn)閱渭?xì)胞懸液,在CO2、37℃下經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng),篩選出神經(jīng)干細(xì)胞球,得到神經(jīng)干細(xì)胞,在體外傳3-6代,并在傳代過(guò)程中純化神經(jīng)干細(xì)胞,得到神經(jīng)干細(xì)胞制劑;所述的消化液為0.25%胰蛋白酶或0.25%胰蛋白酶和0.01%EDTA;所述的中止消化的培養(yǎng)基為DMEM/F12和10-20V%胎牛血清;所述的體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基為下述組合物:(1)N2添加劑,0-1mlN2/100ml培養(yǎng)基或B27添加劑,0-1mlB27/100ml培養(yǎng)基DMEM/F128-20mg/ml(2)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子bFGF10-20ng/ml(3)表皮生長(zhǎng)因子EGF10-20ng/ml(4)轉(zhuǎn)鐵蛋白transferring0.05-0.5mg/ml(5)硒酸鈉2-10ng/ml(6)腐胺5-10μg/ml(7)胰島素0.01-0.05mg/ml(8)L-谷氨酸胺0.1-0.5mg/ml(9)孕酮5.0-10ng/ml(10)抗生素:慶大霉素800-1300U/ml。
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摘要
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本發(fā)明公開(kāi)了一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑及其制備方法,是采用人胚胎腦組織用消化液消化后加入培養(yǎng)基中止消化,離心后機(jī)械吹打?yàn)閱渭?xì)胞懸液,加入培養(yǎng)基,在CO2、37℃下經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng),篩選出神經(jīng)干細(xì)胞球,即得到神經(jīng)干細(xì)胞。中分離培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞,在體外傳3-6代,并在傳代過(guò)程中純化神經(jīng)干細(xì)胞,得到的神經(jīng)干細(xì)胞制劑。所述神經(jīng)干細(xì)胞制劑植入動(dòng)物體內(nèi),不用免疫抑制劑或在少量免疫抑制劑的輔助治療下,神經(jīng)干細(xì)胞可以在自體生理微環(huán)境下分化形成一種類(lèi)似于schwann細(xì)胞樣的細(xì)胞,使髓鞘再生,脊髓功能獲得重建,可以用于治療人類(lèi)脊髓疾病,特別是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病。
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國(guó)際公布
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