| 公開(公告)號 | CN1544629A |
| 公開(公告)日 | 2004.11.10 |
| 申請(專利)號 | CN200310108622.8 |
| 申請日期 | 2003.11.11 |
| 專利名稱 | 重組鵝白細胞介素-2蛋白的制備方法及其用途 |
| 主分類號 | C12N15/26 |
| 分類號 | C12N15/26;C12P21/00;C07K14/55;A61K39/39;A61P31/00;A61P31/12;A61P33/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 浙江大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 周繼勇;陳吉剛;王金勇;騰巧泱;吳建祥 |
| 地址 | 310027浙江省杭州市西湖區(qū)浙大路38號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 張法高 |
| 國省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項 | 一種重組鵝白細胞介素-2蛋白的制備方法，其特征在于它的步驟如下：1)自浙東白鵝單核淋巴細胞中克隆出鵝白細胞介素-2(gsIL-2)的DNA片段與含有PBAD啟動子的原核表達載體pBAD/HisB組建成表達載體pBAD/HisB/gsIL-2；或者上述gsIL-2DNA片段與含有PAUG1啟動子的真核表達載體pMETαB組建成分泌型表達載體pMETαB/gsIL-2；或者上述gsIL-2DNA片段與含有PAUG1啟動子的真核表達載體pMETB組建成胞內(nèi)型表達載體pMETB/gsIL-2；2)用RM作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，通過發(fā)酵擴增大腸桿菌工程菌LMG194；3)用BMDY作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，通過發(fā)酵擴增酵母工程菌PMAD11和PMAD16，在表達不同時間加氮源、碳源等營養(yǎng)素；4)大腸桿菌LMG194和酵母菌PMAD16誘導(dǎo)后經(jīng)超聲波裂解、離心去沉淀即為gsIL-2粗制品，PMAD11表達的gsIL-2主要分泌于培養(yǎng)基中，經(jīng)過離心取上清即為gsIL-2粗制品。用Ni-NTAArgarose蛋白純化系統(tǒng)可得到gsIL-2純品；5)粗制品或純品加入甘氨酸等穩(wěn)定劑和助溶劑后，無菌過濾、分裝和凍干后制成成品，保存于-20℃的冷藏環(huán)境中。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種重組鵝白細胞介素-2(gsIL-2)蛋白的制備方法及其用途。RT-PCR擴增的浙東白鵝白細胞介素-2的DNA片段與原核表達載體pBAD/HisB、真核表達載體pMETαB和pMETB構(gòu)建表達質(zhì)粒pBAD/HisB/gsIL-2、pMETαB/gsIL-2和pMETA/gsIL-2，分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌LMG194、酵母菌PMAD11和PMAD16后誘導(dǎo)表達。表達量分別占菌體總蛋白的9～10％、20～25％和10～12％。大腸桿菌和酵母菌PMAD16誘導(dǎo)后經(jīng)超聲波裂解、離心去沉淀即為gsIL-2蛋白粗制品，PMAD11表達的gsIL-2主要分泌于培養(yǎng)基中，離心取上清即為gsIL-2蛋白粗制品。用Ni-NTAArgarose蛋白純化系統(tǒng)可以較快的得到gsIL-2純品，粗制品或純品可以作為免疫佐劑和疾病治療藥物。本發(fā)明應(yīng)用基因工程技術(shù)制備的重組gsIL-2蛋白，具有工藝流程簡單，生產(chǎn)成本低，穩(wěn)定性好，生物學(xué)活性高等特點。 |
| 國際公布 |
