公開(公告)號 | CN1475576A |
公開(公告)日 | 2004.02.18 |
申請(專利)號 | CN02125767.1 |
申請日期 | 2002.08.16 |
專利名稱 | 一種單鏈DNA快速制備技術(shù)及試劑盒 |
主分類號 | C12P19/34 |
分類號 | C12P19/34;C12Q1/68 |
分案原申請?zhí)? | |
優(yōu)先權(quán) | |
申請(專利權(quán))人 | 趙翀 |
發(fā)明(設(shè)計)人 | 趙翀 |
地址 | 100083北京市海淀區(qū)學(xué)院路丁11號西二樓408室 |
頒證日 | |
國際申請 | |
進入國家日期 | |
專利代理機構(gòu) | |
代理人 | |
國省代碼 | 北京;11 |
主權(quán)項 | 一種單鏈DNA快速制備技術(shù)和試劑盒,至少包括下述步驟:①提供一種生物微粒,在模板的擴增反應(yīng)中作為固相引物;其固相基質(zhì)表面連接的寡核苷酸分子的序列與模板核酸分子互補;②將生物微粒與模板核酸分子,非固相引物、dNTPs與DNA聚合酶等混合,在生物微粒表面,通過固相聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)對模板核酸分子進行擴增;其中非固相引物或dNTPs中有一個可以是同位素、熒光素、生物素、半抗原、糖或多糖等的標記物;擴增反應(yīng)至少完成一個循環(huán),此循環(huán)包括a)加熱變性;b)退火;c)在DNA聚合酶的作用下,寡核苷酸引物延伸,并固定在微粒表面;③離心漂洗數(shù)次去除殘留的模板核酸分子、非固相引物、dNTPs與DNA聚合酶等;④加熱變性,使擴增的DNA互補雙鏈解鏈;⑤用分離器將固/液相分離,獲得不同的分別位于固相和液相的單鏈DNA。 |
摘要 | 本發(fā)明公開了一種單鏈DNA快速制備技術(shù)及試劑盒的制備方法。該技術(shù)快速、靈敏、純度高,制備方法簡便、成本低,適合各種規(guī)模不同核酸樣品的DNA測序和探針制備。主要特征在于將一條引物通過固相合成或化學(xué)偶聯(lián)等方法固定在固相基質(zhì)微粒的表面獲得固相引物,以靶核酸為模板在固相基質(zhì)的表面進行固相PCR擴增,產(chǎn)物經(jīng)加熱變性,使DNA雙鏈解鏈,而由固相引物延伸獲得的DNA單鏈仍然保留在固相基質(zhì)的表面;分離固/液相獲得兩條互補的DNA單鏈。運用本發(fā)明制備的單鏈DNA和RNA可用于核酸的測序,反義寡核苷酸藥物的合成、單鏈探針的制備以及SELEX分子文庫的構(gòu)建等,可廣泛地用于生物學(xué)、醫(yī)藥學(xué)、疾病預(yù)防、農(nóng)牧業(yè)、食品與衛(wèi)生、能源與化工、環(huán)境監(jiān)測以及醫(yī)學(xué)診斷與檢測等領(lǐng)域。 |
國際公布 |