| 公開(公告)號 | CN1124351C |
| 公開(公告)日 | 2003.10.15 |
| 申請(專利)號 | CN00133662.2 |
| 申請日期 | 2000.12.01 |
| 專利名稱 | 脫氧核糖核酸分子的通用捕集法 |
| 主分類號 | C12Q1/68 |
| 分類號 | C12Q1/68 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 黃道培 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 黃道培 |
| 地址 | 201206上海市浦東新金橋路1998號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京萬科園知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 張亞軍;李丕達(dá) |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種脫氧核糖核酸分子的通用捕集法，其特征在于：包括下列操作步驟：A)預(yù)雜交：取12.5微升的1.6毫微克/微升接頭分子液加入到盛有100微升雜交液的通用捕集孔中，37℃保溫1小時，進(jìn)行預(yù)雜交反應(yīng)形成通用捕集雜交鏈，然后棄去孔中剩余液；B)雜交：取100微升上述雜交液加入到上述孔中，取待測的生物樣品40微升PCR反應(yīng)液與40微升變性液的混合液25微升加到上述孔中，37℃保溫1小時進(jìn)行雜交鏈反應(yīng)；C)洗板：用洗滌液對孔中反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行洗滌5次，每次用量300微升，然后棄去洗滌液；D)酶聯(lián)：取50毫微克/毫升的酶聯(lián)液100微升加入到上述孔中，37℃保溫15分鐘進(jìn)行酶聯(lián)反應(yīng)：E)洗板：用洗滌液對孔中反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行洗滌5次，每次用量300微升，然后棄去洗滌液；F)顯色：孔中加入顯色液100微升，25℃保持10分鐘后加入停顯液100微升；G)測定：上述樣品移至在波長450毫微米的酶標(biāo)儀上測定光密度數(shù)；其中步驟A)的接頭分子液為a)乙型肝炎病毒接頭分子液；或b)丙型肝炎病毒接頭分子液；或c)丙種球蛋白接頭分子液；或d)愛滋病毒接頭分子液；或e)結(jié)核菌接頭分子液；或f)沙眼衣原體接頭分子液；上述接頭分子的結(jié)構(gòu)為一條單鏈的寡核苷酸，其長度在50至60個堿基對左右，它包括三個組成部分：通用部分：通用部分共長25個堿基，恰好和固定在磁粉或微量板上的通用探針互補(bǔ)，能很快地與通用探針雜交；“空間”：介于通用部分和特異性部分之間，為了留出“空間”給二個分子形成夾心式的雜交鏈，我們的“空間”長度是5到4nm；特異性部分：特異性部分緊接著“空間”，約為22-26個堿基，它的長短是由它本身的G/C％，Tm是否與通用部分配合所決定的，也決定于它自身是否有二級級構(gòu)，它的順序是選用在PCR產(chǎn)物，介于一對引物的中間順序，因而只能和PCR的產(chǎn)物雜交而與生物素標(biāo)記的引物無反應(yīng)，所以保證了該部分雜交的特異性；接頭液的分子結(jié)構(gòu)：1)其中通用部分長25個堿基對，其順序或用人為排列的(dA)25或5′-ACg，Acg，gAA，cgA，AAc，ggA，Acg，Acgg-3′或從pBlue KS--質(zhì)粒順序中選取一段順序；具體順序?yàn)椋?′-CCg，AgA，TAg，ggT，TgA，gTg，TTg，TTCC-5′ |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種脫氧核糖核酸分子的通用捕集法，可應(yīng)用于分子醫(yī)學(xué)的疾病診斷。本方法包括預(yù)雜交、雜交、洗板、酶聯(lián)、洗板、顯色、光密度測定等步驟。利用接頭液分子的特異性部分與病原體核酸分子的雜交及通用部分與共價鍵地固定在通用捕集孔上的通用捕集寡核苷酸分子雜交而應(yīng)用于臨床檢測。該法與直接法相比較，具有雜交特異性強(qiáng)，雜交效率一致、靈敏度高、操作方便、能做定性定量及分型等多種檢測、臨檢效率高、成本費(fèi)用低等特點(diǎn)，適合日益增多的臨檢需要。 |
| 國際公布 |
