| 公開(公告)號(hào) | CN1441058A |
| 公開(公告)日 | 2003.09.10 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02111054.9 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.03.15 |
| 專利名稱 | 一種基因重組鮭魚降鈣素的制備工藝 |
| 主分類號(hào) | C12P21/02 |
| 分類號(hào) | C12P21/02;C12N15/31;C12N15/63;C12N15/16;C07K14/575 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 竇鴻;趙東;朱彤 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 竇鴻;趙東;朱彤 |
| 地址 | 200433上海市翔殷路871弄14號(hào)105 |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海正旦專利代理有限公司 |
| 代理人 | 陸飛 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種基因重組鮭魚降鈣素的制備工藝，包括：(1)構(gòu)建含sCT前體cDNA融合表達(dá)載體pGEX-sCT前體的工程菌；(2)sCT工程菌的發(fā)酵；(3)分離、純化sCT前體；(4)sCT前體的酰胺化及復(fù)性成為成熟sCT；(5)sCT活性的測(cè)定；其特征在于構(gòu)建sCT前體基因時(shí)，首先按其氨基酸序列，用大腸桿菌的偏愛密碼編碼成若干DNA片段，并化學(xué)合成DNA片段，再拼接成sCT前體的全長(zhǎng)cDNA，所拼接成的全長(zhǎng)cDNAN端含蛋氨酸密碼子，以便通過CNBr裂解產(chǎn)生與天然sCT完全相同的N端氨基酸序列，C末端為亮氨酸密碼子，以便使由大腸桿菌表達(dá)出的產(chǎn)物，可用羧基肽酶Y進(jìn)行C末端酰胺化。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種基因重組鮭魚降鈣素(sCT)的制備工藝，是對(duì)原工藝作了許多重要改進(jìn)，例如，使大腸桿菌基因表達(dá)的sCT前體C末端為亮氨酸，以便能使用CPD-Y進(jìn)行C末端酰胺化；構(gòu)建的融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)化由Ecoli.B衍生的大腸桿菌宿主，以避免表達(dá)的目的蛋白降解，提高融合蛋白產(chǎn)量等等。本發(fā)明方法工藝簡(jiǎn)單、成本低廉、生產(chǎn)周期短，且不會(huì)造成環(huán)境污染。 |
| 國際公布 |
