| 公開(公告)號(hào) | CN101092618A |
| 公開(公告)日 | 2007.12.26 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200710068724.X |
| 申請(qǐng)日期 | 2007.05.22 |
| 專利名稱 | 溶葡萄球菌酶的制備方法和其衍生物及衍生物的制備方法 |
| 主分類號(hào) | C12N15/09(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/09(2006.01)I;C12N9/36(2006.01)I;C12N15/56(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 杭州北斗生物技術(shù)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 劉國(guó)安;劉沐榮;康經(jīng)武 |
| 地址 | 310011浙江省杭州市祥園路39號(hào)5號(hào)樓5樓 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 杭州豐禾專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 王鵬舉 |
| 國(guó)省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 溶葡萄球菌酶的制備方法，其特征在于包括以下的步驟： (1)、溶葡萄球菌酶基因的設(shè)計(jì)與合成； (2)、表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化大腸桿菌工程菌：將溶葡萄球菌酶基因片段插入到表達(dá)載體質(zhì)粒的酶切位點(diǎn)，然后直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌宿主菌，其中所述的表達(dá)載體質(zhì)粒是pET系列載體質(zhì)粒； (3)、陽(yáng)性克隆的篩選、培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達(dá)：篩選出陽(yáng)性克隆在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)誘導(dǎo)使目標(biāo)蛋白表達(dá)； (4)、表達(dá)產(chǎn)物的分離、純化：將大腸桿菌工程菌菌體收集、破菌，經(jīng)離心得到破菌液上清，然后對(duì)破菌液上清用層析技術(shù)純化。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及溶葡萄球菌酶的制備方法和其衍生物及衍生物的制備方法。溶葡萄球菌酶的制備方法主要包括：設(shè)計(jì)并合成優(yōu)化的溶葡萄球菌酶基因，構(gòu)建表達(dá)載體后轉(zhuǎn)化大腸桿菌工程菌，篩選高表達(dá)菌株，發(fā)酵培養(yǎng)工程菌，表達(dá)產(chǎn)物分離純化。其中所述的表達(dá)載體質(zhì)粒是pET系列載體質(zhì)粒。本發(fā)明的方法，表達(dá)方案簡(jiǎn)單，表達(dá)量高，純化工藝簡(jiǎn)單，收率高，表達(dá)產(chǎn)物可溶，不需要復(fù)性，直接用層析方法進(jìn)行純化，純化收率大大提高，適合大規(guī)模制備。本發(fā)明公開的溶葡萄球菌酶衍生物由PEG修飾后免疫原性降低，半衰期延長(zhǎng)，適合臨床應(yīng)用于葡萄球菌感染的治療。 |
| 國(guó)際公布 |
