一種檢驗方法從建立到臨床應(yīng)用涉及許多因素,關(guān)鍵是臨床需要和質(zhì)量可靠,結(jié)果可信、實用二個方面。隨著對發(fā)病機制研究的不斷深入,在分子水平診斷、治療、預(yù)后疾病已為人們所認(rèn)識。分子生物學(xué)技術(shù)52667788.cn/wsj/一般操作較復(fù)雜,成本較高,質(zhì)控較差,但它在基因分子水平揭示發(fā)病的機制及本質(zhì)、診斷、治療疾病的媚力不可抗拒,人們正在努力改進(jìn)技術(shù)以便符合臨床要求。如PCR技術(shù)的出現(xiàn),立即得到臨床的響應(yīng)。
一、診斷分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用范圍
外源基因侵入致病,如病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體、寄生蟲等的傳統(tǒng)檢驗、分類方法效率低,往往不能滿足臨床要求。而外源致病生物侵入體內(nèi)發(fā)病時,拷貝數(shù)較高,樣品取材、核酸提取相對容易,加之診斷分子生物學(xué)技術(shù)的靈敏度與特異性,使臨床應(yīng)用價值提高。特別是病毒致病日益猖獗,臨床診斷的不斷需要,及應(yīng)用試劑盒的不斷開發(fā),操作手續(xù)的不斷簡化,外源基因的檢驗方法在臨床不斷得到應(yīng)用。該領(lǐng)域的發(fā)展趨勢很可能成為診斷分子生物學(xué)技術(shù)在臨床應(yīng)用的突破口,應(yīng)用前景廣闊。
內(nèi)源性基因診斷目前在遺傳性疾病診斷方面應(yīng)用較多,不斷向腫瘤(癌基因)及其它領(lǐng)域深入,尚在數(shù)據(jù)積累,研究階段。
二、診斷分子生物學(xué)技術(shù)質(zhì)量控制
對檢驗技術(shù)的具體要求首先是檢驗診斷學(xué)的質(zhì)量保證,由完善、合理的實驗設(shè)計來完成。
⒈特異性雜交技術(shù)是通過基因克隆制備探針來完成,PCR是通過引物來完成,RFLP是利用限制內(nèi)切酶來完成等。即探針、引物、限制性內(nèi)切酶在反應(yīng)中都具有特異性。
⒉靈敏度 雜交技術(shù)用同位素或酶標(biāo)記探針,PCR反復(fù)擴增20-30次都是提高靈敏度的手段。二次PCR、PCR與Southern blot合用都是典型的例子。
⒊操作簡單 雜交技術(shù)因操作復(fù)雜且費時(需1-2天以上出結(jié)果),在臨床實驗室難以推廣。而PCR方法相對簡單、快速,故推廣迅速。
⒋實驗成本分子生物學(xué)實驗因試劑多數(shù)依賴進(jìn)口,成本高,給臨床推廣造成一定的困難。試劑國產(chǎn)化是今后的努力方向。
重復(fù)性和穩(wěn)定性也是我們關(guān)心的問題,但報告較少。
本世紀(jì)生命科學(xué)飛躍發(fā)展,尤其是近年來分子生物學(xué)新技術(shù)日新月異,使過去難以想象的實驗正在進(jìn)入常規(guī)實驗室。以基因結(jié)構(gòu)、基因功能研究為基礎(chǔ),已深入到醫(yī)學(xué)研究各領(lǐng)域,在神經(jīng)分子生物學(xué)、腫瘤分子生物學(xué)、基因治療等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域做出了引人注目的成績。分子生物學(xué)技術(shù)、診斷分子生物學(xué)(基因診斷)、基因治療已經(jīng)是醫(yī)學(xué)工作者不可回避的課題。分子生物學(xué)技術(shù)理論深,內(nèi)容多,應(yīng)用廣。本章只介紹一些基本知識的技術(shù)作為入門,更詳盡的內(nèi)容可參考有關(guān)專著和資料。