本品系由無癥狀HBsAg攜帶者血漿提取的HBsAg，經純化、滅活及加佐劑吸附后制成。用于預防乙型肝炎。
1 血源
1.1 對獻血員的要求
1.1.1 獻血員應為20～50歲無癥狀HBsAg攜帶者，其肝功能應無顯著異常，并穩(wěn)定。對獻血員的其他要求按《原料血漿采集（單采血漿術)規(guī)程》執(zhí)行。
1.1.2個月接種過活疫苗，1年內接種過狂犬病疫苗者，均不采血。
1.1.3 必要時以免疫擴散法（ID)測定HBsAg亞型。血源應以ad亞型為主，可有少量ay亞型。
1.2 單份血漿檢查
1.2.1 無菌試驗
按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。
1.2.2HbsAg測定
用對流電泳法測定，HBsAg滴度應≥1∶8，或用反向血凝法（RPHA)測定，滴度應≥1∶1024。
1.3 混合血漿檢查
1.3.1支原體檢查
按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。
1.3.2 取樣接種孔雀綠培養(yǎng)基，35～37℃培養(yǎng)28天，結果應為陰性。
1.352667788.cn/hushi/.3 外源病毒檢查
用Vero細胞和人二倍體細胞各3瓶，每瓶容量為10～15ml，各接種0.2ml樣品，35～37℃培養(yǎng)10天，應無病變出現。用0.2%～0.5%雞與豚鼠紅細胞等量混合后于37℃吸附1小時，測定血吸附反應，應均為陰性。
2 抗原的濃縮和變化
2.1 血漿脫纖維
于血漿中加入氯化鈣溶液，使之脫纖維。
2.2硫酸銨沉淀
于血清中加入硫酸銨飽和溶液，或用固體硫酸銨，使最后達到適宜的飽和度，沉淀HBsA.
2.3 超離心純化
溴化鉀等密度區(qū)帶離心2～3次，每次離心后分部收樣，根據紫外監(jiān)測峰及密度測定，合并合格的樣品，經超濾去鹽濃縮。蔗糖速率區(qū)帶離心1～2次，分離出HBsAg。
3 滅活
3.1 胃酶處理
將HBsAg懸液加入適量胃酶，置35～37℃處理4～5小時，最后超濾去胃酶。
3.2 尿素處理
于HBsAg懸液中加尿素至4～8mol/L置37℃處理4～5小時，超濾去尿素。亦可不用尿素處理。
3.3福爾馬林滅活
于HBsAg懸液中按1∶4000加入福爾馬林，置37℃72～96小時。不用尿素處理者可用1∶2000福爾馬林滅活。
4 稀釋與吸附
已滅活的疫苗原液經除菌過濾后，根據Lowry法檢測折算的特異性蛋白含量進行稀釋，加入A1（OH)3吸附，并于疫苗內加入防腐劑。
5 半成品檢定
5.1 總蛋白含量測定
用Lowry法測定，使用檢定所提供的標準品。
5.2HBsAg含量測定
按總蛋白含量將樣品稀釋至不同稀釋度，用RIA或火箭電泳法測定，使用檢定所提供的標準品，HBsAg含量應在90%以上。
5.3 電鏡檢查
取每臺離心機每次蔗糖離心后的樣品，制作5個銅網，在60000倍電鏡下，每個銅網觀察6個視野，結果應主要為22nm球形顆粒，未見Dane顆粒為合格。有可疑Dane顆粒者應以加倍視野數檢查。
5.4 殘留雜蛋白檢查
5.4.1 聚丙烯酰胺凝膠電泳法
濃縮膠濃度為4%，分離膠為7.5%，加10μgHBsAg樣品和適量的人血清白蛋白進行電泳，銀染，試驗樣品應不出現明顯雜蛋白帶。
5.4.2SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法
HBsAg樣品經SDS處理后在7.0%濃縮膠和15%分離膠中加入5μg進行電泳，結果在分離膠中應主要存52667788.cn/zhicheng/在22000及28000分子量帶，應不出現明顯的雜蛋白帶。
5.5HBV DNA檢查
用HBv DNA片段制備探針，取200μg除菌后的樣品與探針進行雜交，結果應為陰性。控針的靈敏度應≤1pg。
5.6 無菌試驗
按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。
6 分裝
每支安瓿分裝1.0ml，HBsAg含量分別為10μg和30μg兩種規(guī)程。
7 成品檢定
7.1 無菌試驗
按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。
7.2 安全試驗
每亞批疫苗皮下注射體重14～16g小白鼠，每只0.5ml，注射后第3天和第7天各觀察一次，允許皮下有硬結，但應健存。
7.3 化學檢定
按《生物制品化學規(guī)定規(guī)程》進行。
7.3.1pH值測定
應為5.5～6.8。
7.3.2 游離甲醛測定
應含游離甲醛，但含量應≤0.01%。
7.3.3 氫氧化鋁含量測定
每ml應不超過1.25mg。
7.3.4 氯化鈉含量測定
應為0.8～0.95%。
7.3.5硫柳汞含量測定
不應超過0.01%。
7.4 效力和鑒別試驗
將疫苗4倍遞增稀釋，每個稀釋度接種BALB/cH2d或NIHq型雌性小白鼠20只，每只腹腔注射1.0ml，4～6周后采血，以RIA法測定抗-HBs，計算小白鼠ED50值與參比苗ED50值，結果以檢品ED50值/參比ED50值，其比值≥1為合格。
7.5 抗-HBc檢測
每批用6只體重為300～350g同性豚鼠，每只腹部皮下注射疫苗0.5ml，間隔一個月免疫第2次，之后一個月心臟采血，用RIA法檢測免疫前后血清，結果抗-HBc應陰性，否則應重試。
7.6人體免疫觀察及標準
每年度生產的頭3批疫苗或前、中、后各一批疫苗進行人體免疫觀察，觀察對象為小學生或學齡前兒童，按0、1、2個月程序每批至少接種20人，每人于上臂三角肌肌內注射1.0ml，于3針接種后一個月采血，用RIA法測定三項指標，抗-HBs陽性率（S/N≥10)大于90%，6個月內未出現HBsAg者判為合格，否則需要重試。對免疫后單獨出現高滴度抗-HBc者應分析原因。
8 保存與效期
保存于2～8℃暗處，不得凍結。自檢定合格之日起效期為2年。
