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【摘要】 目的 觀察奧曲肽對急性壞死性胰腺炎(acute necrotizc pancreatitis,ANP)大鼠肺損傷的治療作用，并探討其機制。方法 選用大鼠63只,在胰膽管內(nèi)注射5%�；悄懰徕c溶液誘導(dǎo)大鼠ANP模型。觀察奧曲肽對ANP大鼠肺組織形態(tài)及細胞因子變化的影響。結(jié)果 奧曲肽治療組較ANP+NS組肺濕/干重顯著降低，PaO2明顯提高，肺泡灌洗液中蛋白質(zhì)含量［奧曲肽組為(339.9±72.5)mg/L］和白細胞計數(shù)明顯下降或呈下降趨勢。同時，血漿內(nèi)毒素、血清TNFα和NO2-/NO3-水平及肺組織NOS活性顯著降低，肺組織血管內(nèi)皮細胞和導(dǎo)管上皮細胞一氧化氮合酶(NOS)表達下調(diào)，肺組織病理學(xué)改變減輕。結(jié)論 奧曲肽對ANP大鼠并發(fā)肺損傷有一定的治療作用，其機制與其對內(nèi)毒素、腫瘤壞死因子-α和一氧化氮等炎癥介質(zhì)的調(diào)節(jié)作用有關(guān)。
Beneficial effects of octreotide on the lung injury following experimental acute necrotic pancreatitis in rats
【Abstract】 Objective To investigate the possible beneficial effects of octreotide on the lung injury following acute necrotizing pancreatitis (ANP) and the mechanisms.Methods The ANP model of rat was established by injection of 5 % sodium taurocholate into the choledochus.Results Octreotide could decrease Wet/dry lung ratio significantly at all indicated time-point. At 12th h after induction of ANP, PaO2, protein content in BALF, plasma endotoxin level, serum NO2-/NO2-, and NOS activity were much lower in octreotide-treated rats than those in untreated group (P＜0.05). Leukocyte count in BALF was also decreased with some exte nt but without statistical significant (P＞0.05). Serum concentration of TNFα was lower dramatically in octreotide-treated group than in ANP+NS group. Pathological studies showed that inflammatory cell infiltration and pulmonary interstitial edema were improved, and type II epithelial cells were well preserved in octreotide-treated group.Conclusion Octreotide showed its beneficial effects on lung injury in both functional and morphologic alterations during the course of ANP. Regulatory roles of octreotide on pro-inflammatory factors, such as endotoxin, TNFα, and NO could be considered as one of the major mechanisms under this situation.
【Key words】 Acute pancreatitis； Somatostatin； Acute respiratory distress syndrome； Cytokine
我們以�；悄懰徕c誘導(dǎo)大鼠，觀察奧曲肽對急性壞死性胰腺炎(acute necrotic pancreatitis,ANP)大鼠肺臟形態(tài)和功能變化的影響以及對炎癥介質(zhì)的調(diào)節(jié)作用，現(xiàn)報道如下。
材料和方法
1.實驗動物與主要試劑：雄性Spraque-Dawley大鼠63只，體重300～350 g。TNFα測試盒為Endogen公司產(chǎn)品。
2.方法：(1)ANP模型制備：大鼠實驗前禁食12 h，自由飲水。ANP模型制備參照文獻［1］。假手術(shù)組(sham operation,SO)大鼠僅作剖腹術(shù)。(2)實驗分組：大鼠隨機分3組：ANP+NS組(n=21)、ANP+奧曲肽組(n=21)和SO組(n=21)。ANP奧曲肽治療組術(shù)后2、5、8、11 h分次于后肢根部皮下注射奧曲肽(Novartis公司產(chǎn)品)生理鹽水溶液(1 mg/L)，劑量為(15 μg/kg體重)；ANP+NS組注射等容積生理鹽水。(3)觀察項目：術(shù)后3、6、12 h分別處死大鼠，取材觀察下列指標(biāo)：①肺濕/干重；②動脈血氧分壓(PaO2,mm Hg)；③肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)白細胞計數(shù)、蛋白質(zhì)測定；④血漿內(nèi)毒素含量，采用偶氮顯色法測定；⑤血清TNFα含量，采用ELISA測定；⑥血清NO含量(μmol/L)，采用硝酸還原酶法測定血清NO2-/NO3-的含量間接反映NO的生成量；
3.統(tǒng)計學(xué)方法：Student t檢驗。
結(jié)果
1.肺濕/干重比變化：ANP制備后3 h始肺濕/干重(4.25±0.52)較SO組顯著增高［(4.02±0.50),P＜0.05］,至12 h達峰值(5.92±0.64)；奧曲肽治療組術(shù)后3、6、12 h分別為4.04±0.48、4.16±0.49、4.98±0.36，顯著低于ANP+NS組各相應(yīng)時點值(P＜0.05)。
2.PaO2變化：術(shù)后12 h, ANP+NS組PaO2(76.1±7.6) mm Hg較SO組顯著降低［(99.6±1.1)mm Hg，P＜0.05(1 mm Hg=0.133 kPa)］。奧曲肽治療組PaO2［(92.9±11.0)mm Hg］顯著增高，與SO組 ［(99.6±1.1) mm Hg］相比差異無顯著性(P＞0.05)。
3.BALF中白細胞計數(shù)、蛋白質(zhì)含量變化：ANP制備后BALF中白細胞計數(shù)呈遞增趨勢，于術(shù)后12 h達(1 628.6±453.6)×109 個/L，顯著高于SO組［(414.3±106.9)×109 個/L，P＜0.05］。奧曲肽治療組BALF中白細胞計數(shù)較ANP+NS組下降，但差異無顯著性(P＞0.05)。術(shù)后12 h，ANP+NS組BALF中蛋白質(zhì)含量［(467.2±60.1) mg/L］較SO組顯著增加［(158.1±27.9) mg/L,P＜0.05］；奧曲肽組BALF中蛋白質(zhì)含量為(339.9±72.5) mg/L,較ANP+NS組顯著降低(P＜0.05)。
4.血漿內(nèi)毒素變化：ANP制備后3、6 h各組間血漿內(nèi)毒素水平變化差異無顯著性(P＞0.05)；術(shù)后12 h，ANP+NS組血漿內(nèi)毒素達(0.300±0.063) EU/ml，明顯高于SO組［(0.045±0.012) EU/ml,P＜0.05］;奧曲肽治療組為(0.116±0.025) EU/ml，顯著低于ANP+NS組(P＜0.05)。
5.血清TNFα含量變化：術(shù)后3、6、12 h，ANP組血清TNFα分別為(249.1±90.3) ng/L、(55.9±16.4) ng/L、和(623.5±100.4) ng/L,顯著高于SO組［(2.0±2.7) ng/L,P＜0.05］。奧曲肽治療組分別為(44.6±19.5) ng/L、(4.4±3.2) ng/L和(143.1±38.2) ng/L,明顯低于ANP+NS組(P＜0.05)。
6.血清NO2-/NO3-含量、肺組織NOS活性、及組織化學(xué)染色結(jié)果：術(shù)后12 h，ANP+NS組血清NO2-/NO3-含量為(99.87±28.76) μmol/L,較SO組［(39.16±6.19) μmol/L］顯著增加，奧曲肽治療組血清NO2-/NO3-含量為(59.20±6.20) μmol/L，較ANP+NS組明顯下降(P＜0.05)。ANP+NS組肺組織NOS活性為(3.79±0.32) U/mg 蛋白,高于SO組［(1.74±0.31) U/mg 蛋白，P＜0.05］；奧曲肽治療組為(2.61±0.29) U/mg 蛋白，較ANP+NS組顯著降低(P＜0.05)。組織化學(xué)研究結(jié)果顯示，SO組支氣管上皮、肺血管內(nèi)皮及神經(jīng)纖維NOS表達弱陽性；ANP+NS組表達強陽性；奧曲肽治療組NOS表達較ANP+NS組減弱。
7.病理學(xué)變化：ANP光鏡下表現(xiàn)為肺泡壁增厚，間質(zhì)充血水腫，大量中性白細胞浸潤。奧曲肽治療組上述病變減輕。電鏡下，ANP組見Ⅱ型上皮細胞變形，板層小體排空至間質(zhì)；微血管內(nèi)皮細胞腫脹，可見微血栓形成；肺泡腔內(nèi)大量炎癥細胞和紅細胞滲出，肺泡萎陷。奧曲肽治療組病理改變減輕。
討論
我們的實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)BALF中白細胞數(shù)增加，肺泡間隔大量中性粒細胞浸潤；超微結(jié)構(gòu)進一步顯示大量中性粒細胞、單核細胞貼壁并游出血管外，提示活化的中性粒細胞或單核細胞可能參與了ANP肺損傷。本研究結(jié)果提示，ANP大鼠血液中TNFα、內(nèi)毒素及NO的水平均顯著增高，肺組織中NOS活性增加，進一步說明了中性粒細胞相關(guān)性細胞因子參與了ANP肺組織損傷。本研究結(jié)果表明，奧曲肽可抑制ANP大鼠循環(huán)中的內(nèi)毒素和TNFα的升高，抑制肺組織中NOS的活性，降低血液中NO水平，提示奧曲肽治療ANP并發(fā)肺損傷的作用機制可能是部分通過抑制內(nèi)毒素、TNFα和NO介導(dǎo)。
參考文獻
�。�1］張明鈞，王興鵬，袁耀宗，等.一種大鼠急性胰腺炎模型制備方法的改良.上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1995，15：244-245.
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