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【摘 要】 目的 了解抗Ⅱ型膠原抗體在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)中的臨床意義。方法 以改進(jìn)的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)179例RA患者和171例其他風(fēng)濕病患者的血清IgG型抗天然及抗變性Ⅱ型膠原抗體水平。結(jié)果 RA患者抗天然和抗變性Ⅱ型膠原抗體陽性率各為22.3%和36.9%，早期RA患者各為30.0%和36.7%。其他風(fēng)濕病患者中各為3.5%和31.6%，健康人二者均為2.5%�？固烊虎蛐湍z原抗體陽性RA患者類風(fēng)濕因子檢出率、患者對(duì)病情活動(dòng)性評(píng)價(jià)高于陰性組(P0.05)。抗變性Ⅱ型膠原抗體和抗天然Ⅱ型膠原抗體同時(shí)陽性RA患者的CRP平均水平較高。結(jié)論 抗天然Ⅱ型膠原抗體可以作為RA的一個(gè)輔助診斷指標(biāo)�？固烊慌c抗變性Ⅱ型膠原抗體的檢測(cè)有助于判斷RA病情活動(dòng)性。
Anti-type Ⅱ collagen antibodies in rheumatoid arthritis
【Abstract】 Objective To investigate the clinical significance of anti-type-Ⅱ-collagens antibody in rheumatoid arthritis (RA).Method Serum IgG antibodies to native and denatured type Ⅱ collagens (anti-nc Ⅱ and anti-dc Ⅱ) were detected in 179 patients with RA by an improved enzyme linked immunosorbent assay (ELISA),and their clinical significance was analysed with corresponding clinical materials.Results In RA,the positive rates of anti-nc Ⅱ and anti-dc Ⅱ were 22.3% and 36.9%;in early RA were 30.0% and 36.7%,respectively.In other rheumatic diseases the positive rates were 3.5% and 31.6%,respectively and were both 2.5% in healthy controls.Anti-nc Ⅱ positive RA showed higher prevalence rate of RF and higher scores of patient′s global assessment of disease activity (P 0.05).The presence of anti-nc Ⅱ and anti-dc Ⅱ concomitantly was associated with high CRP level in RA patients.Conclusion Anti-nc Ⅱ could serve as a supplemental parameter in diagnosing RA and together with anti-dc Ⅱ may help evaluate the disease activity.
【Key words】 Rheumatoid arthritis; Anti-type Ⅱ collagen antibody; Enzyme-linked immunosorbent assay; C-reactive protein
抗Ⅱ型膠原抗體(antibodies to type Ⅱ collagen)與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)病情活動(dòng)性、嚴(yán)重性的關(guān)系目前仍有爭(zhēng)論。本研究參照Fujii等［1］提出的實(shí)驗(yàn)條件檢測(cè)179例RA患者、171例其他風(fēng)濕病和118名正常人血清的抗Ⅱ型膠原抗體，探討其在RA中的臨床意義。結(jié)果報(bào)告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
1.1.1 病人組：為1994年9月至1999年3月在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕科住院、門診、隨訪的RA患者，共179例，全部符合1987年美國風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ARA)的RA分類標(biāo)準(zhǔn)［2］。其中男性53例，女性126例，年齡17～76歲，平均46.3歲。其中病程1年之內(nèi)，X線未出現(xiàn)明顯骨質(zhì)破壞者(以下簡(jiǎn)稱早期病例)30例。
1.1.2 對(duì)照組：共289例，分為兩組：一組為同期在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕科門診或住院的非RA的其他風(fēng)濕性疾病患者171例；另一組為正常對(duì)照組，共118名。
1.2 抗Ⅱ型膠原抗體的體測(cè)
參照Fujii等［1］的方法。
1.2.1 微量反應(yīng)板的包被及封閉：正常羊血清于62 ℃加熱20 min，加入固體Tris (0.05 mol/L)、NaCl (0.15 mol/L)和2 mol/L HCl，調(diào)pH值至8備用(BNGS)。天然Ⅱ型膠原在46 ℃水浴中加熱20 min，即為變性膠原。
將天然Ⅱ型和變性Ⅱ型膠原分別溶解于0.05 mol/L的醋酸中，濃度為3 mg/ml。0.02 mol/L磷酸緩沖液(PB) pH 7.6稀釋膠原溶液，使?jié)舛葹?0 μg/ml，加入微量反應(yīng)板孔，每孔100 μl，保鮮膜覆蓋，4 ℃過夜。
在與待檢血清標(biāo)本進(jìn)行溫育之前，包被好的微量反應(yīng)板用含0.05%吐溫－20的生理鹽水溶液洗滌3次，然后每孔加入100 μl BNGS，室溫(24～28 ℃)下封閉30 min，洗滌液洗滌3次。
1.2.2 檢測(cè)：BNGS稀釋待檢及陽性對(duì)照、陰性對(duì)照血清，轉(zhuǎn)入微量反應(yīng)板的微孔中，設(shè)二孔平行，每孔100 μl，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照。室溫溫育2 h，生理鹽水-吐溫溶液洗滌3次。含25%BNGS的0.1 mol/L TBS pH 8.0溶液稀釋辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgG，每反應(yīng) 孔加入100 μl，室溫溫育2 h，洗滌。將聯(lián)苯二胺和過氧化氫溶解于檸檬酸-磷酸緩沖液pH 5.0中，使各自濃度分別為0.05%和0.017%，加入反應(yīng)孔，每孔100 μl，37 ℃溫育30 min后每孔加入終止液1.25 mol/L硫酸50 μl終止反應(yīng)，酶標(biāo)分光光度計(jì)492 nm處測(cè)吸光度(A)值。
1.2.3 結(jié)果判斷：以正常血清的平均A值加3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差作為正常值上限，待檢血清A值超過者即被認(rèn)為是陽性。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
計(jì)量資料數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
2.1 ELISA工作濃度的選擇：為便于比較，選擇工作濃度時(shí)以天然Ⅱ型膠原作為包被抗原，測(cè)定血清抗天然Ⅱ型膠原抗體水平。
參照文獻(xiàn)［3］的方法進(jìn)行。結(jié)果表明，Ⅱ型膠原包被液濃度以40 μg/ml，第二抗體辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗人IgG稀釋度以1∶400，血清以1∶40稀釋為最佳。
2.2 RA患者及對(duì)照組血清抗Ⅱ型膠原抗體檢測(cè)結(jié)果：179例RA患者中，抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性者40例，陽性率22.3%，顯著高于健康人和疾病對(duì)照組(3.5%和2.5%)(P＜0.05)；抗變性Ⅱ型膠原抗體陽性者66例，陽性率36.9%，與正常對(duì)照組(2.5%)相比差異有極顯著性(P＜0.000 1)，與其他風(fēng)濕病(31.6%)差異不大。30例早期RA患者抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性9例，陽性率為30.0%。
抗天然Ⅱ型膠原抗體對(duì)RA診斷的敏感性為22.3%，特異性為96.9%，抗變性Ⅱ型膠原抗體對(duì)RA診斷的敏感性為36.9%，特異性為80.3%。
2.3 抗Ⅱ型膠原抗體與RA病情的關(guān)系：抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性患者RF陽性率高于陰性組(79.5%對(duì)61.8%，P＝0.041)，病情活動(dòng)評(píng)分較高(8.5±9.5對(duì)6.6±1.5，P＝0.027)�？棺冃寓蛐湍z原抗體陽性RA患者血清CRP平均水平較陰性組高(24.8%對(duì)19.6%，P＝0.003)。晨僵時(shí)間、壓痛關(guān)節(jié)數(shù)、腫脹關(guān)節(jié)數(shù)、干燥綜合征并發(fā)率、類風(fēng)濕結(jié)節(jié)的發(fā)生率、功能分級(jí)二組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。IgG、IgM、IgA、γ-球蛋白，ESR水平、ANA陽性率及滴度、放射學(xué)病情進(jìn)展及使用SAARDs的比例等方面在陽性組與陰性組無差異�？棺冃寓蛐湍z原抗體陽性的早期RA患者ESR、CRP水平較陰性組增高(P＜0.05)。
27例抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性RA患者抗變性Ⅱ型膠原抗體同時(shí)陽性。本組病人RF檢出率高于其他RA患者(P＜0.05)。CRP水平也較高(19.6±17.5對(duì)16.8±16.0，P＝0.007)。
3 討論
抗Ⅱ型膠原抗體檢測(cè)方法有多種，目前以ELISA法應(yīng)用最為廣泛。Fujii等［1］比較了吐溫－20、牛血清白蛋白和一些動(dòng)物血清(如兔、雞、牛、羊)阻止人血清免疫球蛋白與酶標(biāo)微量反應(yīng)板的吸附作用后認(rèn)為，與其他動(dòng)物血清及吐溫－20相比，兔和羊血清減少非特異性吸附作用效果最好。他用正常新鮮兔血清封閉酶標(biāo)反應(yīng)板，使RA病人與健康對(duì)照者血清的抗Ⅱ型膠原抗體滴度差異明朗化，并進(jìn)一步提出該抗體可作為RA的一早期診斷指標(biāo)［4］。我們雖未做多種動(dòng)物血清封閉酶標(biāo)反應(yīng)板的比較，但通過采用Fujii等改進(jìn)的ELISA檢測(cè)血清抗Ⅱ型膠原抗體水平后我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性率甚低，使其對(duì)RA的診斷特異性達(dá)96.9%，在早期RA中敏感性略高于非早期RA患者，表明該抗體的檢測(cè)可以作為對(duì)RA診斷的一個(gè)補(bǔ)充。
本組RF檢出率在抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性RA患者較陰性組高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與林冰等［5］所觀察到的結(jié)果一致。國外的報(bào)道多認(rèn)為抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性與RF檢出率無關(guān)［6］。是否存在人種差異，有待進(jìn)一步證實(shí)。
CRP為一急性時(shí)相反應(yīng)產(chǎn)物，其水平可作為判斷RA活動(dòng)性的一個(gè)指標(biāo)。Morgan等［7］報(bào)道僅部分RA患者CRP與抗天然及抗變性Ⅱ型膠原抗體 水平相關(guān)。本組179例RA患者抗變性Ⅱ型膠原抗體陽性者血清CRP平均水平明顯高于陰性組，且有高度的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�？固烊虎蛐湍z原抗體陽性組患者CRP水平偏高。早期RA抗變性Ⅱ型膠原抗體陽性患者ESR、CRP水平顯著較陰性者為高，提示這組患者炎癥活動(dòng)似更為顯著。
Charriere等［8］研究認(rèn)為，抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性與患者X線病情進(jìn)展較慢、較輕有關(guān)。但林冰等［5］報(bào)道抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性RA患者關(guān)節(jié)X線分期較高，認(rèn)為該組病人病情更重。我們的研究未發(fā)現(xiàn)抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性組與陰性組在放射學(xué)分期、Sharp評(píng)分上有統(tǒng)計(jì)意義的差別。
在本研究中，RA患者抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性者抗變性Ⅱ型膠原抗體多呈陽性，單純抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性者較少(占全部抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性RA患者的31.7%)。進(jìn)一步分析抗天然和抗變性Ⅱ型膠原抗體與臨床的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，抗天然Ⅱ型膠原抗體陽性與否對(duì)抗變性Ⅱ型膠原抗體與CRP水平的關(guān)系有影響：當(dāng)抗天然Ⅱ型膠原抗體陰性時(shí)，抗變性Ⅱ型膠原抗體與CRP水平即無明顯關(guān)系，表明抗天然Ⅱ型膠原抗體狀況對(duì)活動(dòng)性同樣起著關(guān)鍵作用，檢測(cè)抗Ⅱ型膠原抗體有助于對(duì)RA活動(dòng)性的估計(jì)。
參 考 文 獻(xiàn)
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