D-二聚體測(cè)定是對(duì)DIC、原發(fā)性纖溶癥、肺及靜脈栓塞等疾病診斷、鑒別診斷及療效觀察的重要指標(biāo)。在D-二聚體的測(cè)定過程中必須用室內(nèi)質(zhì)控品控制檢測(cè)質(zhì)量。目前國內(nèi)應(yīng)用的D-二聚體定量測(cè)定室內(nèi)質(zhì)控品均為國外進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格昂貴。我們創(chuàng)造性的利用凝血檢測(cè)后剩余血漿，根據(jù)DIC發(fā)病機(jī)理，在體外試管中使其發(fā)生DIC樣的反應(yīng)，從而產(chǎn)生出大量的D-二聚體，并將其制成D-二聚體定量測(cè)定質(zhì)控品，使成本降低近百倍。
一、材料
1．血漿：收集2004年1月7日-2月5日間本醫(yī)院外科術(shù)前患者進(jìn)行凝血項(xiàng)目檢驗(yàn)后剩余血漿。選取凝血、乙丙肝、艾滋病、梅毒檢測(cè)均為正常的無溶血、無乳糜、無黃疸血漿200毫升，＜-2O℃冰箱保存，備用。
2．試劑：尿激酶(黑龍江迪龍制藥有限公司)，D-二聚體定量測(cè)定試劑盒(ELISA法，上海太陽公司)。
3．儀器：DNL-9602G型酶標(biāo)儀(北京普朗公司)。
二、原理
血漿中加人鈣離子使血漿復(fù)鈣，玻璃試管壁激活內(nèi)源性凝血系統(tǒng)使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白。這一步相當(dāng)于DIC時(shí)廣泛的微血栓形成期。在含有纖維蛋白的血漿中加人尿激酶，促進(jìn)纖溶系統(tǒng)激活從而降解其中的纖維蛋白。纖維蛋白被降解產(chǎn)生纖維蛋白降解產(chǎn)物，其中含有D-二聚體。這一步相當(dāng)于DIC時(shí)的纖溶亢進(jìn)期。將含有D-二聚體的血漿稀釋成合適濃度即制成了D-二聚體質(zhì)控品。
三、方法
1．產(chǎn)生纖維蛋白：取新鮮血漿0.5毫升，加人生理鹽水2毫升，混勻，加人30 mmol/L氯化鈣0.5毫升，混勻，37℃水浴2小時(shí)，此時(shí)取出試管可見到液體中含有白色條索狀的纖維蛋白。
2．產(chǎn)生D二聚體：將形成的纖維蛋白用竹簽挑到另一含有0.5毫升新鮮血漿的試管中，加人尿激酶5000單位，混勻。37℃水浴2小時(shí)。取出時(shí)，血漿中的白色條索狀纖維蛋白消失，即纖維蛋白已被降解，使其中含有了大量D-二聚體。然后將血漿56℃水浴0.5 h，滅活凝血、抗凝血、纖溶等各系統(tǒng)因子、酶類。
3．定值：將含有D二聚體的血漿用已收集的血漿進(jìn)行100倍稀釋，然后再將其稀釋成不同倍數(shù)，應(yīng)用ELISA法進(jìn)行測(cè)定。我們最后選取再稀釋15倍和7.5倍兩個(gè)濃度，作為低、高兩個(gè)濃度的質(zhì)控品，測(cè)定結(jié)果分別是880 μg/L與藥學(xué)招聘2125 μg/L。
四、穩(wěn)定性
1．冷凍保存：將880μg/L質(zhì)控品置于＜-20℃冷凍保存，在一年期間測(cè)定了1O次，結(jié)果無明顯改變(與定值880 μg/L比較，P＞0.05)。
2．冷藏保存：將復(fù)溶的質(zhì)控品置于＜4℃冷藏保存，每天一次，連續(xù)測(cè)定8天，結(jié)果無明顯改變(與定值880μg/L比較，P＞0.05)。由此說明其穩(wěn)定性達(dá)到了室內(nèi)質(zhì)控品的要求。
