第二章 血液一般檢驗
第三章 血栓與止血一般檢驗
第四章 尿液檢驗
葡萄糖定性檢查"style="color:#FF0000" >實驗五 尿葡萄糖定性檢查
第四章 腦脊液檢驗
第六章 生殖系統(tǒng)分泌物檢驗
一、毛細血管采血法
[目的]掌握毛細胞血管采血法，了解不同部位采血對檢驗結果的影響。
[原理]采血針刺破毛細血管后血液自然流出，用微量吸管吸取一定量的血液。
[器材]一次性消毒采血針、20ul吸管、75%乙醇棉球、無菌干棉球。
[試劑]洗滌液3管、生理鹽水。
[標本]外周血
[操作]
1、準備 取試管1支，加入2ml生理鹽水。取微量吸管和乳膠吸頭相連，檢查連接是否漏氣，或取一次性微量吸管備用。
2、按摩 輕輕按摩左手中指或無名指指尖內側，使局部組織自然充血。
3、消毒 用75%乙醇棉球擦拭采血部位皮膚，待干。
4、針刺 用左手拇指和示指固定采血部位使其皮膚和皮下組織繃緊，左手持一次性消毒采血針自指尖腹內側迅速刺入，深度2～3mm，立即出針。
5、拭血 待血液自然流出后，用無菌干棉球擦去第1滴血。
6、吸血 血液自然流出時，用一次性微量吸管吸血到10ul刻度，然后用無菌干棉球壓住傷口止血。如血流不暢，可以用左手自采血部位遠端向指尖稍施壓使血液流出。
7、稀釋 用無菌干棉球擦凈微量吸管外部后，將吸管伸入裝有生理鹽水的試管底部，慢慢排出吸管內的血液，并用上清液沖洗管內余血2～3次，最后將試管內的液體混勻。
[注意事項]
1、所選擇采血部位的皮膚應完整，無燒傷、凍瘡、發(fā)紺、水腫或炎癥等。除特殊情況外，不要在耳垂采血。半歲以下嬰幼兒由于手指小，可自拇指、腳趾或足跟內、外側緣采血；嚴重燒傷者可選皮膚完整處采血。
2、本試驗具有創(chuàng)傷性，必須嚴格控無菌技術操作，防止采血部位感染；做到一人一針一管，避免交叉感染，最好用一次性采血管。
3、皮膚消毒后，應待乙醇揮發(fā)后采血，否則流出的血液擴散而不成滴。
4、進出針速度要迅速，且傷口要有足夠的深度。
5、因第1滴血混有組織液，應擦去。如血流不暢切勿用力擠壓，以免造成組織液混入，影響結果的準確性。
實驗一 紅細胞計數(shù)
[目的]掌握顯微鏡紅細胞計數(shù)的方法。
[原理]用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，充入計數(shù)池后，在顯微鏡下計數(shù)一定體積內的紅細胞數(shù)量，經(jīng)換算求出每升血液中的紅細胞數(shù)量。
[器材]顯微鏡、改良Neubauer計數(shù)板、試管、微量吸管、玻璃棒。
[試劑]紅細胞稀釋液
[標本]外周血或抗凝血（EDTA抗凝)。
[操作]
1、加稀釋液 取小試管1支，加紅細胞稀釋液2ml。
2、加血 用清潔干燥微量吸管采集末稍血或抗凝血10ul擦去管外余血，輕輕加至紅細胞稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸管2～3次，立即混勻。
3、充池 混勻后用微量吸管或玻璃棒將紅細胞懸液充入計數(shù)池，室溫下平放3～5min，待細胞下沉后于顯微鏡下計數(shù)。
4、計數(shù) 用高倍鏡依次計數(shù)中央大方格內4角和正中5個中方格內的紅細胞數(shù)。
5、計算
25 N
紅細胞/L=N×5×10×106×200=N×1010=100 ×1012
N：表示5個中方格內數(shù)得的紅細數(shù)。
25
× 5 ：將五個中方格紅細胞數(shù)換算成1個大方格紅細胞數(shù)。
×10：將1個大方格紅細胞數(shù)換1ul血液內紅細胞數(shù)。
×106：1L=106ul
200：為血液的稀釋倍數(shù)。
[注意事項]
1、采血時不能過分擠壓采血部位，針刺激深度必須適當。
2、采血應順利、準確，采血部位不得有水腫、發(fā)紺、凍瘡、炎癥等。紅細胞數(shù)量明顯增高時可適當加大稀釋倍數(shù)。
3、大小方格內壓線細胞的計數(shù)遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則，避免多數(shù)或漏數(shù)。
4、將細胞懸液充入計數(shù)池時要一次完成，不能產(chǎn)生滿溢、氣泡或充池不足的現(xiàn)象。
實驗二 血紅蛋白測定
[目的]掌握氰化高鐵血紅蛋白測定方法。
[原理]在血紅蛋白轉化液中，除硫化血紅蛋白外，其余血紅蛋白均可被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白，再與氰離子結合，生成穩(wěn)定的復合物氰化高鐵血紅蛋白。棕紅色的氰化高鐵血紅蛋白在波長540nm處有吸收峰，可用校準的高精度分光光度計進行直接定量測定，或用HiCN參考液進行比色法測定，根據(jù)標本的吸光度即可求出血紅蛋白濃度。
[器材]一次消毒采血針，微量吸管，試管，5ml移液管，75%乙醇棉球，無菌干棉球，分光光度計
[試劑]HiCN轉化液（文齊液)
[標本]外周血
[操作]
1、直接定量測定
（1)加轉化液：試管內加5mlHiCN轉化液。
（2)采血與轉化：取全血20ul，加到盛有轉化液的試管底部，用上清液反復沖洗吸管3次，充分混合，靜置5min。
（3)測定：以符合WHO標準的分光光度計，波長540nm處，光徑1.000cm，HiCN轉化液或蒸餾水調零，測定吸光度。
（4)計算：根據(jù)標本的吸光度直接計算出血紅蛋白濃度（g/L)
64458
血紅蛋白（g/L)=A×44000×251=A×367.7
A：540nm處測定管吸光度
64458：目前國際公認的血紅蛋白平均相對分子質量。
44000：1965年國際血液學標準化委員會（ICSH)公認的血紅蛋白摩爾消化系數(shù)。
251：稀釋倍數(shù)。
2、HiCN標準液比色法測定
（1)標準曲線繪制和K值計算。用HiCN標準液倍比稀釋后（50g/L、100g/L、150g/L、200g/L)，在所用的分光光度計上分別測事實上各稀釋度的吸光度，以標準品血紅蛋白含量為橫坐標、吸光度為縱坐標，繪制標準曲線索。或求出換算常數(shù)K。
（2)標本的血紅蛋白轉化和比色同直接定量測定，得到標本的吸光度（A)
（3)通過標準曲線查出待測樣本的血紅蛋白濃度或用K值來計算血紅蛋白濃度，即Hb（g/L)=K×A。
[注意事項]
1、血紅蛋白測定方法很多。但無論采用何種方法，都必須以HiCN法為標準，繪制標準曲線。標準曲線或K值應定期檢查，并與分光光度計相配。
2、標準微量吸管必須經(jīng)過水銀稱重法校正。加液量必須準確，血液與轉化液充分混勻�？捎醚t蛋白液代替抗凝血進行鑒定。
3、HiCN轉化液不能貯存在塑料瓶中，否則會使CN—丟失，測事實上結果偏低。HiCN轉化液應貯存在棕色有塞玻璃瓶中，4℃冰箱保存一般可用數(shù)月，但不能在0℃以下保存，因為結冰可引起高鐵氰化鉀還原，使轉化液褪色失效。
[目的] 掌握網(wǎng)織紅細胞手工計數(shù)的操作方法
[原理] 網(wǎng)織紅細胞胞質內殘存的少量核蛋白體和核糖核酸等嗜堿性物質，在活體染色時可被煌焦油藍染成藍色網(wǎng)狀或顆粒狀，可與完全成熟的紅細胞區(qū)別。
[器材]顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液、試管、玻片
[試劑]10g/L煌焦油藍生理鹽水溶液
[標本]新鮮全血
[操作]
1、加染液 于小試管中加入10g/L煌焦油藍生理鹽水溶液2滴，再加入新鮮全血2滴，立即混勻，置室溫下15～20min。
2、制備涂片 取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。
3、觀察 在低倍鏡下選擇紅細胞分布均勻的部位進行觀察。
4、計數(shù) 在油鏡下計數(shù)至少1000個紅細胞中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)。
5、計算
計數(shù)的網(wǎng)織紅細胞數(shù)
網(wǎng)織紅細胞分數(shù)數(shù)= 1000
網(wǎng)織紅細胞絕對值（網(wǎng)織紅細胞/L)=紅細胞/L×網(wǎng)織紅細胞分數(shù)數(shù)
[目的]掌握魏氏法紅細胞沉降率測定的原理及操作方法。
[原理]將一定量的枸櫞酸鈉抗凝全血置于特制血沉管中，直立于特制血沉架上1h后讀取紅細胞下沉后血漿的高度。
[器材]Westergren血沉管、血沉架、吸管、試管。
[試劑]109mmol/L枸櫞酸鈉溶液
[標本]新鮮全血
[操作]
1、加抗凝劑 吸取濃度為109mmol/L的枸櫞酸鈉0.4ml于試管中。
2、采靜脈血 取靜脈血1.6ml，加入含抗凝劑的試管中，混勻。
3、裝血沉管 用血沉管吸入混勻全血至刻度“0”處，拭去管外殘留余血。
4、立血沉管 將血沉管直立于血沉架上。
[注意事項]
1、使用分析純枸櫞酸鈉抗凝劑，配制時濃度應準確，配成后液體不渾濁、無沉淀，保存期為2周。
2、嚴格控制采血量，使抗凝劑與血液比例為1︰4。
3、血沉管內徑要標準，放置要垂直，不得傾斜。
[目的]掌握顯微鏡法白細胞計數(shù)的原理及方法。
[原理]用白細胞稀釋液將血液稀釋一定的倍數(shù)，同時破壞溶解紅細胞。將稀釋的血液注入血紅細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計數(shù)一定體積內的白細胞數(shù)，經(jīng)換算即可求出每升血液中的白細胞數(shù)量。
[器材]顯微鏡、改良Neubauer計數(shù)板、試管、吸管、微量吸管、滴棒。
[試劑]白細胞稀釋液
[標本]新鮮全血或末稍血
[操作]
1、加稀釋液 用吸管吸取白細胞稀釋液0.38ml于小試管中。
2、吸取血液 用微量吸管吸取新鮮全血或末稍血20ul， 擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管中白細胞稀釋液的底部，輕輕放出血液，并吸取上層白細胞稀釋液清洗吸管2～3次。
3、混勻 將試管中血液與稀釋液混勻，待細胞懸液完全變?yōu)樽睾稚?/p>
4、充池 再次將小試管中的細胞懸液混勻。用滴棒蘸取細胞懸液1滴，充入改良Neubauer計數(shù)板的計數(shù)池中，室溫靜置2～3min，待白細胞完全下沉。
5、計數(shù) 在低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內的白細胞總數(shù)。
6、計算
4個大方格內白細胞數(shù)（N) N
白細胞= 4 ×10×20×106=20×109/L
[注意事項]
1、稀釋用吸管、微量吸血管、血紅細胞計數(shù)板均為計量工具，使用前需經(jīng)過嚴格的校正，否則將直接影響計數(shù)結果的準確。
2、使用標本可為由靜脈搏穿刺采取的新鮮全血，也可為靜脈末梢血。采集末梢血時，應注意采血部位不得有凍瘡、水腫、發(fā)紺、炎癥等，以免標本失去代表性；同時也應注意不能過度擠壓，以免組織液混入引起血液凝因或造成計數(shù)結果不準確。
3、在充池時，如充液不足、液體外溢、斷續(xù)充液，或產(chǎn)生氣泡、充液后移動蓋玻片等，均會使細胞分布不均勻，造成計數(shù)結果不準確。
4、計數(shù)池內的細胞分布應均勻，一般情況下各大方格間的細胞數(shù)相差不超過10%，若相差太大，應重新充池。
5、計數(shù)大小方格內的壓線細胞時，遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則。
6、白細胞數(shù)量過多時，可采用加大稀釋倍數(shù)的方法。
[目的]掌握顯微鏡外周血白細胞分類計數(shù)的方法及各種白細胞的正常形態(tài)。
[原理]將血液制成細胞分布均勻的血涂片，用瑞氏染液染色，根據(jù)各類細胞的形態(tài)特點和顏色差異將白細胞進行分類并計數(shù)。通常分類100個白細胞，計算得出各種白細胞所占的百分率。
[器材]顯微鏡、分類計數(shù)器、香柏油、拭鏡紙、清潔液。
[試劑]瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液
[標本]制備良好的血涂片
[操作]
1、染色 將血涂片用瑞氏染液染色，沖洗干凈，自然干燥后待用。
2、低倍鏡觀察 低倍鏡下觀察白細胞分布和染色情況。
3、油鏡觀察 選擇血涂片體尾交界處細胞分布均勻、著色良好的區(qū)域，按一定的方向順序對所見的每1個白細胞進行分類，并用白細胞分類計數(shù)器作好記錄，共計數(shù)100個白細胞。
4、計算 求出各類細胞所占的百分率
[注意事項]
1、由于各種白細胞體積大小不等，體積較小的淋巴細胞在血涂片的頭、體部較多，而尾部和兩側以中性粒細胞和單核細胞較多，因此分類最佳區(qū)域為體、尾交界處。
2、分類時要有秩序地、沒一定方向連續(xù)地進行，既不重復亦不遺漏，避免主觀選擇視野。
3、分類計數(shù)結果的記錄也可采用手工畫“正”或“++++”的方法。
[目的]掌握各種白細胞病理形態(tài)學改變。
[原理]用普通光學顯微鏡，直鏡觀察經(jīng)瑞氏染色后血涂片上的白細胞。從細胞大小、細胞核、細胞質等多方面觀察細胞形態(tài)。
[器材]顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液。
[試劑]瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液
[標本]制備良好的血涂片
[操作]
1、染色 將血涂片用瑞氏染液染色，沖洗干凈，自然干燥后待用。
2、低倍鏡觀察 低倍鏡觀察細胞分布、數(shù)量、染色情況。
3、油鏡觀察 滴加香柏油1滴，在油鏡下對白細胞從細胞大小、細胞核、細胞質等多方面做認真仔細地觀察。
4、計算毒性指數(shù) 觀察100或200個中性粒細胞，記錄有病理變化的中性粒細胞數(shù)量，計數(shù)毒性指數(shù)。
有中毒顆粒的中性粒細胞數(shù)
毒性指數(shù)= 計數(shù)的中性粒細胞數(shù)
[注意事項]
1、含中毒顆粒的中性粒細胞應與嗜堿性粒細胞相區(qū)別，其區(qū)別要點是嗜堿性粒細胞核較少分葉，染色較淺，嗜堿性顆粒著色更深，較大且不均勻，細胞邊緣常分布較多，也可覆蓋分布于細胞核上。
2、在血涂片染色偏堿或染色時間過長時，可將中性顆粒誤認為中毒顆粒。應注意全片各種細胞的染色情況。
[目的]掌握嗜酸性粒細胞直接計數(shù)的方法。
[原理]用嗜酸性粒細胞稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，使大部分的紅細胞和其他白細胞被破壞并使嗜酸性粒細胞著色。將稀釋的細胞懸液滴入血細胞計數(shù)板，計數(shù)一定體積內的嗜酸性粒細胞數(shù)量，經(jīng)過換算得出每升血液中的嗜酸性粒細胞數(shù)量。
[器材]顯微鏡、改良Neubauber計數(shù)板、試管、吸管、微量吸管、滴棒。
[試劑]
1、伊紅丙酮稀釋液。
2、Hinkelman稀釋液。
3、乙醇-伊紅稀釋液。
4、皂素-甘油稀釋液。
5、溴甲酚紫稀釋液。
6、固綠稀釋液。
[標本]新鮮全血或末梢血
[操作]
1、加稀釋液 吸取嗜酸性粒細胞稀釋液0.38ml于小試管中。
2、采血 用微量吸管采血20ul，擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管稀釋液的底部，輕輕放出血認，并吸取上層稀釋液清洗吸管2～3次。
3、混勻 將試管中的血液與稀釋液混勻，待細胞完全溶解。
4、充池 再次將小試管中的細胞懸液混勻。用滴棒蘸取細胞懸液1滴，充入改良Neubauer計數(shù)板的2個計數(shù)池中，室溫下靜置3～5min。
5、計數(shù) 低倍鏡下計數(shù)2個計數(shù)池共10個大方格內的嗜酸性粒細胞數(shù)量。
6、計算
10個大方格內的嗜酸性粒細胞
嗜酸性粒細胞/L= 10×10×20×106
[注意事項]
1、凡能引起白細胞計數(shù)誤差的因素，嗜酸性業(yè)細胞計數(shù)時均勻應注意。
2、計數(shù)應在60min內完成，因時間太長，嗜酸性粒細胞會被逐漸溶解，造成結果偏低。
3、血液加入稀釋液后應立即混勻，否則易致血液凝固和細胞聚集。因嗜酸性粒細胞易于破碎，振蕩不宜太猛烈。若使用含甘油的稀釋液，因甘油造成液體粘稠度增加，可增加振蕩次數(shù)、延長振蕩混勻時間。
[目的]掌握血小板的顯微鏡目視計數(shù)方法。
[原理]血液經(jīng)稀釋液按一定比例稀釋和破壞紅細胞后，充入血細胞計數(shù)板內在顯微鏡下計數(shù)一定范圍內的血小板數(shù)量，經(jīng)過換算求出每升血液中血小板的數(shù)量。
[器材]顯微鏡，血細胞計數(shù)板，采血針，血紅蛋白吸管，試管。
[試劑]10g/L草酸銨稀釋液。
[標本]外周血
[操作]
1、吸取稀釋液 準確吸取10g/L 草酸銨稀釋液0.38ml，置于清潔小試管中。
2、采血 常規(guī)消毒無名指，穿刺后，讓血液自然流出，準確采血20ul，置于含有草酸銨的稀釋液中，立即充分混勻。
3、稀釋靜置 待完全溶血后再混勻1min，置室溫10min。
4、充液靜置 取混勻的血小板懸液1滴充入血細胞計數(shù)板內，靜置10～15min，使血小板充分下沉�？諝飧稍锏募竟�(jié)應將血細胞計數(shù)板置濕盒內。
5、計數(shù) 用高倍鏡計數(shù)血細胞計數(shù)板中央大方格內的四角和中央共5個中方格內血小板數(shù)量。
6、計算 每升血小板數(shù)=5個中方格內血小板數(shù)×109/L
[注意事項]
1、草酸銨稀釋液要清潔，無細菌、塵埃等污染。存放時間較長后應過濾后再使用。
2、毛細血管采血時，針刺應達3mm深，使血液流暢。拭去第1滴血后立即采血，以防血小板聚集和破壞。如果同時做白細胞和血小板計數(shù)時，應先采血做血小板計數(shù)。
3、血液加入血小板稀釋液內要充分混勻，但不可過度振蕩，以免導致血小板破壞和聚集。
4、血小板懸液充入血細胞計數(shù)板內需要靜置10～15min，使血小板完全下沉后再計數(shù)。但應注意保持濕度，避免水分蒸發(fā)而影響計數(shù)結果。
5、計數(shù)時光線不可太強，注意微有折光性的血小板與塵埃等的鑒別，附著在血紅細胞旁的血小板也要注意，不要漏數(shù)。
6、應在1h內計數(shù)完畢，否則結果偏低。
7、所用計量器材必須標準化。
8、檢查前，患者應避免服用含有阿司匹林及其他抗血小板藥物。
[目的]掌握尿量的測定方法及注意事項。
[原理]采用有刻度的容器測定24h尿量。
[器材]量杯或量筒、潔凈容器。
[標本]24h尿液。
[操作]清晨將尿液排空后棄去，用潔凈容器留取隨后的24h尿液，混合后準確測定尿量。
[注意事項]每次留取標本必須排空膀胱，尿量測定精確至毫升。氣溫過高時注意防腐。
[參考值]①成年人：1000～2000ml/24h。②1～6歲：300～1000ml/24h。③7～12歲：500～1500ml/24h。
[目的]了解常用干化學試帶測定尿液酸堿度的方法、原理及注意事項。
[原理]干化學試帶的測試模塊區(qū)含有甲基紅和溴麝香草酚藍，兩種酸堿指示劑適量配合可測試尿液酸堿度。
[器材]潔凈試管或尿標。
[試劑]尿多聯(lián)化試帶與標準色板。
[標本]新鮮尿液。
[操作]將試帶用尿液浸濕后與標準色板比色，1min內讀取pH。
[注意事項]
1、試帶應在干燥、避光處保存，注意保質期，定期內標準質控液進行檢測。
2、按說明書操作，1min內讀取結果。
3、標準應新鮮，否則細菌繁殖會使pH增高�；蛞騿适]發(fā)性酸而影響結果的準確性。
4、尿液pH還可作為其他檢查項目的質控指標，若pH＜3或pH＞9均會影響其他檢測結果。
[目的]掌握尿蛋白定性的磺基水楊酸法。
[原理]磺基水楊酸是一種生物堿，在酸性條件下，磺基水楊酸的磺酸根離子與蛋白質氨基酸陽離子結合，形成不溶性的蛋白鹽沉淀，沉淀生成的程度可反映蛋白質含量。
[器材]小試管、滴管、吸管、黑色襯紙及pH廣泛試紙。
[試劑]200g/L磺基水楊酸溶液。
[標本]新鮮尿液或人工蛋白尿標本。
[操作]
1、加尿液 取小試管2支，各加清晰尿液1ml。
2、加試劑 于第1支試管內滴加磺基水楊酸溶液2滴，輕輕混勻；另1支試管不加試劑作空白對照，1min內觀察結果。
3、判斷結果 按表判斷陽性程度及蛋白質的含量
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結果 報告方式 相當?shù)鞍踪|含量（g/L)
清晰透明 — ＜0.05
在黑色背景上可見輕度渾濁 極微量 0.05～0.1
不需黑色背景即見輕度渾濁± 0.1～0.5
白色渾濁，但無顆粒出現(xiàn) + 0.5～1.0
渾濁并出現(xiàn)顆粒 ++ 1.0～2.0
明顯渾濁呈現(xiàn)絮狀 +++ 2.0～5.0
渾濁，有大凝塊++++ ＞5.0
[注意事項]
1、該法靈敏，極輕微反應無意義。判斷結果應及時，否則會使陽性增高。
2、尿內含尿酸或尿酸鹽過多�？沙霈F(xiàn)假陽性，但反應較為緩慢，15s后出現(xiàn)渾濁，由弱漸強；或于加試劑1min后漸呈蛛絲狀渾濁，緩慢擴散，覆蓋于尿液的表面，加熱或加堿可消失。
3、含碘造影劑、大劑量青霉素等也可使反應呈假陽性，但其反應與蛋白尿不同。應仔細觀察并結合用藥情況綜合分析。
[目的]了解尿液蛋白質定量雙縮脲法的反應原理、檢測方法。
[原理]鎢酸可沉淀尿中的蛋白質，后者復溶于雙縮脲試劑中，其堿性的Cu2+與蛋白質的肽鍵形成紫色復合物，呈色深淺與尿蛋白質含量成正比。
[器材]試管、滴管、分光光度計、離心機等
[試劑]
1、200g/L磺基水楊酸溶液。
2、15g/L鎢酸鈉溶液。
3、0.075mol/L硫酸。
4、雙縮脲試劑。
5、蛋白標準液。
6、生理鹽水。
[標本]新鮮尿液
[操作]
1、測定尿量 準確測定患者24h尿量，反復混勻后取10ml離心沉淀留取上清液備用。
2、尿蛋白定性 采用磺基水楊酸法定性尿蛋白，陽性標本進行下列測定。
3、加標本處理
①加尿液：根據(jù)蛋白質半定量的結果決定標本的加入量。尿蛋白定性（+)～（++)，于10ml離心管中加尿液5ml，如定性（++)～（+++)，則取1ml尿液加4ml蒸餾水稀釋。
②加沉淀劑：向離心管加入0.075mol/L硫酸2.5ml，混勻后再加15g/L鎢酸鈉溶液2.5ml，充分混勻后靜置10min。
③離心：1500r/min離心5min后，傾盡上清液，將離心管倒置于干燥濾紙上吸干水分，保留沉淀待測。
④復溶：向沉淀中加生理鹽水至1ml刻度，振搖以使蛋白質溶解，作為測定管。
4、雙縮脲反應 按表測定，混勻后37℃水浴30min
尿蛋白定量雙縮脲法
試劑 測定管標準管 空白管
生理鹽水 1.0 __
2.5g/L蛋白標準液 _ 1.0_
雙縮脲試劑4.0 4.0 4.0
5、比色和計算 波長540nm，空白管調零分別讀取A標A測。
A測 24h尿量（ml)
24尿蛋白總量（g)= A標 ×2.5× 1000（ml)
[注意事項] 24h尿標本最好不加防腐劑，冷藏保存，測定前充分混勻。
[目的]掌握尿葡萄糖定性的班氏法。
[原理]葡萄糖或其他還原性糖的醛基在熱堿性溶液中，能將班氏試劑的藍色硫酸銅還原為黃色的氫氧化亞銅，進而形成紅色氧化亞銅沉淀。
[器材]試管架、中試管、滴管、試管夾、酒精燈。
[試劑]
1、甲液 枸櫞酸鈉，無水碳酸鈉，蒸餾水加熱助溶。
2、乙液 硫酸銅，蒸餾水加熱助溶。冷卻后，將乙液緩慢加入甲液中，不斷混勻，冷卻至室溫后補充蒸餾水至1000ml。如溶液不透明則需要過濾，煮沸后出現(xiàn)沉淀或變色則不能應用。
[標本]新鮮尿液
[操作]
1、鑒定班氏試劑質量 取中號試管1支，加入班氏試劑2.0ml，搖動試管徐徐加熱至沸騰，觀察試劑有無顏色及性狀變化，若試劑仍為透明藍色，可進行以下實驗。
2、加尿液 向班氏試劑中加離心后的尿液0.2ml，混勻。
3、加熱煮沸 繼續(xù)煮沸1～2min，或置沸水浴5min，自然冷卻。
4、判斷結果 判斷結果見表
糖定性試驗結果判斷
反應現(xiàn)象 報告方式 葡萄糖含量（mmol/L)
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藍色不變 — ＜5.6
藍色中略帶綠色,但無沉淀 ± 5.6～11.2
綠色,伴少許黃綠色沉淀 +＜28
較多黃綠色沉淀,以黃為 ++ 28～56
土黃色渾濁,有大量沉淀+++ 57～112
大量棕紅色或磚紅色沉淀 ++++ ＞112
[注意事項]
1、試劑與尿液的比例為10︰1。
2、煮混時應不時52667788.cn/shouyi/搖動試管以防爆沸噴出，出可在沸水浴中實驗。
3、檢驗糖尿病患者尿液中葡萄糖，應空腹或餐后2h留取尿標本。
4、尿液中有大量尿酸鹽存在時，煮沸后也呈渾濁并帶綠色，但久置后并不變黃色而呈灰藍色，故必須于冷卻后觀察結果。尿中含大量銨鹽時可抑制氧化亞銅沉淀的生成，應加堿煮沸除去。蛋白含量較高時也影響銅鹽的沉淀，可用加熱乙酸法除去。
5、一些非糖還原性物質，如水合氯醛、氨基比林、PAS、阿匹林、青霉素、鏈霉素、VitC、異煙肼等，當基在尿中含量過高時亦呈陽性反應，應停藥3d后再進行檢查。對靜脈輸注大劑量VitC者5d內不宜做尿糖定性，或定性時先將尿液煮沸使之分解破壞。
[目的]掌握尿沉渣非染色法顯微鏡檢查的內容和方法。
[原理]采用顯微鏡觀察的方法，根據(jù)尿液細胞、管型等有形成分的形態(tài)特征，識別并記錄其在顯微鏡一定視野內的數(shù)量。
[器材]載玻片、離心機、刻度離心管、蓋玻片、滴管、普通顯微鏡、定量尿沉渣分析板。
[標本]新鮮尿液
[操作]
1、未離心直接涂片法
（1)混勻：充分混勻尿液。
（2)制備涂片：取混勻的尿液1滴于載玻上，加蓋玻片，注意避免產(chǎn)生氣泡。
（3)觀察計數(shù)：①先用低倍觀察全片細胞、管型等成分的分布情況，然后用高倍鏡確認。注意使用暗視野觀察尿液有形成分，特別是透明管型。②管型在低倍鏡下觀察，至少計數(shù)20個視野；細胞在高倍鏡下觀察至少計數(shù)10個視野，取其平均值報告；結晶按高倍鏡視野中分布范圍報告。計數(shù)時要注意細胞的完整性，還要注意有無其他異常巨大細胞、寄生蟲蟲卵、滴蟲、細菌、粘液絲等，男性尿液標本還要注意有無精子及卵磷脂小體。
2、離心沉淀涂片法
（1)離心尿液：透用于尿外觀非明顯渾濁的尿標本，是尿沉渣檢查標準化推行的方法。取尿液10ml離心5min，要求相對離心力為400g。
（2)提取尿沉渣：手持離心管傾斜45°～90°，用滴管吸去上層尿液，保留下層0.2ml尿沉渣。
（3)涂片：輕輕混勻尿沉渣后，取1滴置載玻片上，用18mm×18mm或22mm×22mm的蓋玻片覆蓋后顯微鏡檢查。
（4)觀察計數(shù)：與未離心尿直接涂片法相同。
3、定量尿沉渣分析法 定量尿沉渣分析板由1塊硬質塑料板制成，每塊板內分為10個統(tǒng)一深度的計數(shù)池，每1個計數(shù)池內的計數(shù)區(qū)為1.0ul計數(shù)區(qū)分為10個大方格，每個大方格又分為9個小方格。
（1)未離心法：直接取充分混勻的尿液1滴充入定量尿沉渣分析計數(shù)池內，在低倍鏡下計數(shù)10個大方格內管型總數(shù)，在高倍鏡下計數(shù)10個大方格內細胞總數(shù)，此即每微升尿液某種細胞或管型的數(shù)量。
（2)離心法：尿液標本處理同離心尿沉淀涂片法，然后充池計數(shù)，方法同上。
4、報告結果
（1)涂片法：細胞以最低數(shù)～最高數(shù)/HP、管型以最低數(shù)～最高數(shù)/低倍鏡視野報告。結晶以所占視野面報告，無結晶為（—)；結晶占1/4視野（+)；結晶占1/2視野為（++)；結晶占3/4視野為（+++)；結晶滿視野為（++++)。如果細胞、管理的數(shù)量過多難以計算，也可按結晶的報告方式報告結果。
（2)定量尿沉渣分析板法：以每微升某種細胞或管型數(shù)報告。
[目的]掌握腦脊液顯微鏡檢查的內容、方法。
[器材]顯微鏡、改良牛鮑計數(shù)板、微量吸管、刻度吸管、小試管。
[試劑]生理鹽水或紅細胞稀釋液，冰乙酸，白細胞稀釋液，瑞氏染液或瑞-吉染液。
[標本]新鮮腦脊液。
[操作]
（1)充池：直接用微量吸管吸取混勻的腦脊液，充入血細胞計數(shù)板的上下2個計數(shù)池。
（2)計數(shù)：靜置2～3min后，低倍鏡下計數(shù)2個計數(shù)池內四角和中央大方格共10個大方格內的細胞數(shù)。
（3)計算：10個大方格內的細胞總數(shù)即為每微升腦脊液細胞總數(shù)，再換算成每升腦脊液細胞總數(shù)。
[注意事項]
1、直接白細胞計數(shù)時，也可用微量吸管吸取冰乙酸后盡可能全部吹出，僅使吸管內壁粘附少許冰乙酸，再吸以少量混勻的腦脊液于吸管中，數(shù)分鐘后吸管內紅細胞溶解，然后再充池計數(shù)。
2、細胞計數(shù)時，如發(fā)現(xiàn)較多細胞有皺縮或腫脹等異�，F(xiàn)象，應如實報告，以協(xié)助臨床醫(yī)學鑒別是陳舊性出血或新鮮出血。
3、血性腦脊液中的白細胞必須校正后才有價值，校正方法是分別計數(shù)血液紅細胞、白細胞數(shù)和腦脊液細胞總數(shù)、白細胞數(shù)，扣除因出血而帶進腦脊液的白細胞數(shù)。
腦脊液紅細胞數(shù)×血液白細胞數(shù)
白細胞校正數(shù)腦脊液白細胞未校正數(shù)— 血液內紅細胞數(shù)
4、細胞涂片時，為了使細胞容易粘在玻片上，可取沉淀的細胞懸液2滴，加血清1滴，混勻后涂片。
5、涂片染色分類時，如見內皮細胞或異常細胞，則另行描述報告，必要時用巴氏或HE染色查找腫瘤細胞。
6、實驗結果后，血細胞計數(shù)板用0.75%乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸泡，以免損壞計數(shù)板。
[目的]掌握腦脊液蛋白質定性試驗的方法。
[原理]腦脊液中球蛋白與苯酚結合，形成不溶性蛋白鹽而產(chǎn)生白色渾濁或沉淀。
[器材]小試管、刻度吸管、尖滴管。
[試劑]飽和苯酚溶解。
[標本]新鮮腦脊液。
[操作]
1、加試劑 取試劑2ml于小試管中。
2、加標本 用尖滴管垂直滴加腦脊液標本1～2滴。
3、觀察結果 在黑暗背景下立即用肉眼觀察結果。
4、判斷結果
（1)清晰透明，不呈現(xiàn)云霧狀為（—)。
（2)呈微白霧狀，對光不易看見，黑色背景下才能見到（±)。
（3)灰白色云霧狀為（+)。
（4)白色渾濁或白色薄云狀沉淀為（++)。
（5)白色絮狀沉淀或白色濃云塊狀為（+++)。
（6)立即形成白色凝塊為（++++)。
[注意事項]
1、當室溫在10℃以下時，應將試劑保存在37℃溫箱中，否則飽和度降低，可致假陽性。
2、試管內徑以小為佳，一般為（13±1)mm，加入試劑后立即觀察結果。
3、標本中如紅細胞過多，應離心沉淀取上清液檢測。
[目的]掌握漿膜腔積液顯微鏡檢查的內容、方法。
[器材]顯微鏡、改良牛鮑計數(shù)板、微量吸管、小試管。
[試劑]生理鹽水或紅細胞稀釋液，冰乙酸，白細胞稀釋液，瑞氏染液或瑞-吉染液。
[標本]漿膜腔穿刺液。
[操作]
（一)有核細胞計數(shù)
1、直接計數(shù)法
（1)去除紅細胞：在小試管內放入冰乙酸1～2滴，轉動試管，使內壁粘附少許冰乙酸后傾去，滴加混勻漿膜腔積液3～4滴，混勻，放置數(shù)分鐘，破壞紅細胞。
（2)充池：用微量吸管取混勻破壞紅細胞后的漿膜腔積液充入血細胞計數(shù)板的2個計數(shù)池內。
（3)計數(shù)：靜置2～3min后，低倍鏡計數(shù)2個計數(shù)池內四周和中央大方格共10個大方格內的有核細胞數(shù)。
（4)計算：10個大方格有核細胞總數(shù)即每微升漿膜腔積液的有核細胞總數(shù)，再換算成每升漿膜腔積液的有核細胞數(shù)。
2、稀釋計數(shù)法
（1)稀釋破壞紅細胞：根據(jù)標本內有核細胞多少，用白細胞稀釋液對標本進行一定倍數(shù)稀釋，混勻，放置數(shù)分鐘，破壞紅細胞。
（2)充池：用微量吸管取混勻稀釋后的漿膜腔液充入1個計數(shù)池。
（3)計數(shù)：靜置2～3min后，低倍鏡計數(shù)1個計數(shù)池內的四角和中央大方格共5個大方格內的有核細胞總數(shù)。
（4)計算：根據(jù)5個大方格內的有核細胞總數(shù)稀釋倍數(shù)，計算每升漿膜腔積液的有核細胞數(shù)。
（二)有核細胞分類
1、直接分類法 有核細胞計數(shù)后，將低倍鏡轉為高倍鏡，直接在高倍鏡下根據(jù)細胞形態(tài)和細胞核形態(tài)進行分類，共分類計數(shù)100個有核細胞，分別計數(shù)單個核細胞（包括淋巴細胞、單核細胞及間皮細胞)和多個核細胞（粒細胞)的百分率。
2、涂片染色分類法 在抽出穿刺液后，立即以1000r/min離心5min，取沉淀物制成均勻的薄片，置于室溫下或37℃恒溫箱內盡快干燥，瑞氏或瑞-吉染色后油鏡分類計數(shù)100個有核細胞。一般標本中可見到淋巴細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、間皮細胞等。
[注意事項]
1、有核細胞計數(shù)應包括間皮細胞。
2、必要時可采用細胞玻片離心沉淀儀收集細胞，以提高白細胞分類計數(shù)的準確性。
3、有核細胞分類計數(shù)誤差大，尤其是陳舊性、細胞變形的標本，故推薦采用涂片染色分類計數(shù)。
4、染色分類計數(shù)過程中，若發(fā)現(xiàn)間皮細胞和不能分類的異常細胞應中外描述或作HE、巴氏染色查找腫瘤細胞。
[目的]掌握漿膜腔液粘蛋白定性（李凡他試驗)的方法。
[原理]漿膜腔上皮細胞在炎癥刺激下分泌粘蛋白。粘蛋白是一種酸性糖蛋白，其等電點pH為3～5，因此，可在稀乙酸中出現(xiàn)白色沉淀。
[器材]100ml量筒，滴管。
[試劑]冰乙酸、蒸餾水。
[標本]漿膜腔穿刺液
[操作]
1、加試劑 加2～3滴冰乙酸于100ml量筒中，再加大約100ml蒸餾水，混勻，此時溶液的pH為3～5，靜置數(shù)分鐘。
2、加標本 垂直滴加待測標本1滴于量筒中。
3、觀察結果 立即在黑色背景下觀察有無白色云霧狀沉淀生成及其下降程度。
4、判斷結果
（1)陰性、陽性結果的判斷。
1)陰性：清晰，不顯霧狀或有輕微白色霧狀渾濁，但在下降過程中消失。
2)陽性：出現(xiàn)白色霧狀渾濁并逐漸下沉至量筒底部不消失。
執(zhí)業(yè)醫(yī)師（2)陽性程度的判斷
1)漸呈白霧狀為（±)
2)可見灰白色霧狀為（+)
3)白色薄云狀為（++)
4)白色濃云狀（++++)
[注意事項]
1、血性漿膜腔積液經(jīng)離心沉淀后，用上清液進行檢查。
2、量筒的高度與蒸餾水的量要足夠。
3、加入標本后立即在黑色背景下仔細觀察結果。如渾濁不明顯，下沉緩慢，中途消失者為陰性。
[目的]掌握精子活動率和活動力的檢查方法。
[原理]精液液化后，將精液滴于載玻片上，顯微鏡下觀察精子的活動情況，計算活動率和活動力。
[器材]顯微鏡，載玻片，蓋玻片。
[試劑]5g/L伊紅Y染液
[標本]新鮮液化精液。
[操作]
1、計算精子活動率 取液化精液1滴于載玻片上，加蓋玻片，高倍鏡下觀察100個精子，計數(shù)有尾部活動精子數(shù)，計算其百分率，即精子活動率。
2、觀察精子活動力 在觀察活動率的同時，觀察精子活動的強度，將精子活動分為a、b、c、d四個級別，即精子活動力。a級：精子呈前向快速運動；b級：緩慢或呆滯的前向運動；c級：非前向運動；d級：死精子。
3、染色 若不活動精子大于50%，可進行體外活體染色，以鑒別其死活。取新鮮液化精液和伊紅Y染液1滴于載玻片上，混勻，1min后推成薄片，自然干燥后于顯微鏡（高倍鏡)下觀察。死精子呈紅色，活精子不著色。觀察100個精子，以不著色精子的百分率報告精子活率。
[注意事項]
1、排精后1h內送檢，時間過長，精子活動率和活動力減低。
2、檢查時注意保溫，溫度過低，精子活動率、活動力下降。
[目的]掌握精子計數(shù)的方法
[原理]采用碳酸氫鈉破壞精液的粘稠度，甲醛固定精子，然后充計數(shù)池，顯微鏡下計數(shù)一定范圍內的精子數(shù)，換算成每升精液中的精子數(shù)。
[器材]顯微鏡，血紅細胞計數(shù)板，小試管。
[試劑]精子稀釋液。
[標本]新鮮精液化精液。
[操作]
1、取稀釋液 取精子稀釋液0.38ml于小試管內。
2、加精液 加入混勻的液化精液20ul，充分混勻。
3、充池 取1滴精子懸液充入計數(shù)池內，靜置3～5min。
4、觀察 高倍鏡下計數(shù)中央大方格內四角及中央5個中方格內的精子數(shù)。
5、計算
精子計數(shù)=5個中方格內精子數(shù)×109/L
精子總數(shù)=精子數(shù)/L×精液量（ml)×10-3
[注意事項]
1、精子數(shù)量變異較大，較準確的計數(shù)應在2～3個月內分別取3份或更多的精液標本檢查。出現(xiàn)1次異常結果，應間隔7d后再復查，反復查2～3次后方能得出較準確結果。
2、如常規(guī)檢查未發(fā)現(xiàn)精子，應離心后取沉淀物檢查，若仍無精子才能確定為精子癥。
[目的]掌握精子正常形態(tài)及其檢查方法。
[原理]正常精子形似蝌蚪，分頭、體、尾三部分，長約50～60um。頭部呈橢圓形，尾長可彎曲，經(jīng)過瑞特染色后，顯微鏡下觀察100～200個精子，觀察形態(tài)正常和異常精子數(shù)及其所占的比例。
[器材]顯微鏡，載玻片，香柏油。
[試劑]Wright染液。
[標本]新鮮液化精液。
[操作]
1、涂片并染色 取液化精液1滴于載玻片上，直接涂片，自然干燥后行Wright染色。
2、觀察結果 油鏡下計數(shù)200個精子，觀察有無異形精子，同時計數(shù)精子凝集情況。
3、結果判斷
（1)頭部異常：有大頭、小頭、尖頭、雙頭、梨形頭、無定形頭及頭部邊緣不齊等。
（2)體部異常：有分支、雙支、體部腫脹甚至消失。
（3)尾部異常：有雙尾、卷曲尾、斷尾、尾部消失等。
[注意事項]
1、觀察精子形態(tài)的同時也要注意有無紅細胞、白細胞、上皮細胞和腫瘤細胞等。
2、注意觀察有無未成熟的生殖細胞，如發(fā)現(xiàn)未成熟生殖細胞，應計數(shù)200個生殖細胞（包括精子)，計算其未成熟生殖細胞百分率。
3、如果精子數(shù)＞10×109/L，可直接涂片檢查；如果＜10×109/L，則應將精液離心15～20min后，取沉淀物涂片檢查。
4、衰老的精子體部也可膨大并有被膜，不宜列入異形精子。
一、陰道分泌物理學檢查
[目的]掌握陰道分泌物的理學檢查的方法及內容。
[原理]通過理學檢查方法對新鮮陰道分泌物進行檢查，以觀察其顏色和pH變化。
[器材]消毒棉拭子，pH試紙。
[標本]新鮮陰道分泌物。
[操作]
1、觀察外觀 肉眼仔細觀察陰道分泌物的顏色。
2、測定酸堿度 用pH試紙檢測其酸堿度。
二、陰道分泌物顯微鏡檢查
[目的]掌握陰道分泌物顯微鏡檢查的方法及內容。
[原理]利用顯微鏡對陰道分泌物濕片和染色涂片檢查，觀察其清潔度和有無特殊細菌及細胞等。
[器材]顯微鏡，載玻片。
[試劑]
1、2.5mol/L KOH溶液。
2、生理鹽水。
3、革蘭染液。
[標本]新鮮陰道分泌物
[操作]
1、濕片檢查
（1)取陰道分泌物后滴加1滴生理鹽水，制成涂片。
（2)低倍鏡觀察后，再用高倍鏡檢查，根據(jù)上皮細胞、白細胞（或膿細胞)、桿菌、球菌的多少，判斷陰道清潔度。
（3)檢查清潔度的同時，高倍鏡觀察有無陰道毛滴蟲。
（4)于陰道分泌物涂片上加1滴2.5mol/LKOH，混勻后加蓋玻片，先用低倍鏡觀察言觀色，若發(fā)現(xiàn)有菌絲樣物，再換高倍鏡，檢查有無真菌。
2、染色涂片檢查
（1)取陰道分泌物涂片，自然干燥后，行革蘭染色。
（2)顯微鏡下檢查有無致病菌。
3、結果判斷 陰道分泌物清潔度結果判斷
[注意事項]
1、取材要準確，并及時送檢。否則會導致陰道毛滴蟲死亡、淋病奈瑟菌自溶。
2、陰道清潔度檢查時，標本必須新鮮，防止污染。
3、檢查陰道毛滴蟲時應注意保溫。
4、濕片檢查陰性時，應再用Wright染色或革蘭染色，一次陰性不能排除診斷。
