課程名稱

臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)學(xué)

授課題目（章節(jié)或主題)

血液分析儀原理及應(yīng)用

授課教師

吳曉蔓

所屬二級學(xué)院

第二臨床學(xué)院

所屬教研室

臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)

職稱

教授

授課時(shí)間

2008年3月25 日第5周 星期二第 1～2節(jié)第1 次課

授課時(shí)數(shù)

8學(xué)時(shí)

授課班級

  檢驗(yàn) 專業(yè)（本科√  �？啤�)2005   級   1，2，3   班

教學(xué)課型

理論課√    實(shí)驗(yàn)課□ 習(xí)題課□ 討論課□ 實(shí)習(xí)（踐)課□  其它□

教材名稱、作者、出版社及出版時(shí)間

臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ) 熊立凡主編 人民衛(wèi)生出版社 2007第四版

教學(xué)目標(biāo)與要求：

掌握

1．試述血液分析儀檢測白細(xì)胞的原理，列舉白細(xì)胞檢測參數(shù)

2．VCS檢測血細(xì)胞的特點(diǎn)。

3．血液分析儀檢測白細(xì)胞分類、網(wǎng)織紅細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、網(wǎng)織血小板有哪些特殊細(xì)胞染色法

4． 簡述三分群血液分析儀細(xì)胞檢測的主要原理。

熟悉

1．DHSS檢測血細(xì)胞有何特點(diǎn)？

2．射頻電導(dǎo)法可檢測細(xì)胞的哪些特征？

3．簡述流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的主要原理。

4．血液分析儀應(yīng)用分光光度法何種原理、檢測何種物質(zhì)？

5．MAPSS檢測血細(xì)胞具有何特點(diǎn)？

6．血液分析儀檢測紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)分別應(yīng)用哪些原理？

了解

1.流式細(xì)胞術(shù)Mie光散射理論。

2.簡述激光散射法系統(tǒng)的基本組成。

3.血液分析儀應(yīng)用哪兩大類溶血?jiǎng)�檢測血紅蛋白？各有何特點(diǎn)？

4.試列舉血液分析儀檢測紅細(xì)胞的原理及檢測參數(shù)。

5.血液分析儀檢測血小板的原理及檢測參數(shù)

主要知識點(diǎn)、重點(diǎn)與難點(diǎn)：

主要知識點(diǎn)：

1．血液分析儀檢測白細(xì)胞的原理，列舉白細(xì)胞檢測參數(shù)

2．VCS檢測血細(xì)胞的特點(diǎn)。

3．血液分析儀檢測白細(xì)胞分類、網(wǎng)織紅細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、網(wǎng)織血小板有哪些特殊細(xì)胞染色法

4．簡述三分群血液分析儀細(xì)胞檢測的主要原理。

重點(diǎn)與難點(diǎn)：

血液分析儀檢測白細(xì)胞的原理

血液分析儀檢測白細(xì)胞分類、網(wǎng)織紅細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、網(wǎng)織血小板有哪些特殊細(xì)胞染色法

簡述三分群血液分析儀細(xì)胞檢測的主要原理。

教學(xué)方法（請打√選擇)：

講授法√　 討論法√ 　演示法□　 自學(xué)輔導(dǎo)法□　 　練習(xí)法(習(xí)題或操作) □　讀書指導(dǎo)法□

ＰＢＬ（以問題為中心的教學(xué)法)□　　案例法□　 其他□

教學(xué)媒體（請打√選擇)：

教材√  板書√  實(shí)物□  標(biāo)本□  掛圖□ 模型□ 投影□ 幻燈□   錄像√   CAI（計(jì)算機(jī)輔助教學(xué))□

教學(xué)過程設(shè)計(jì)（包括講授內(nèi)容、講授方法、時(shí)間分配、媒體選用、設(shè)計(jì)等)：

自動(dòng)血液分析儀（automated hematology analyzer，AHA)

血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（blood cell counter)是目前國內(nèi)外臨床檢驗(yàn)最常用的篩檢儀器之一。

現(xiàn)代血液分析儀的功能有：

第一節(jié) 檢測原理

五、血液分析儀檢測參數(shù)原理

（一)血液分析儀檢測參數(shù)原理

（二)白細(xì)胞系列參數(shù)檢測原理 

1．體積、電導(dǎo)和光散射（volume，conductivity，light scatter，VCS)法（圖3-5) 

在細(xì)胞幾近自然狀態(tài)下，分別應(yīng)用電阻抗技術(shù)檢測細(xì)胞體積，電導(dǎo)（射頻)技術(shù)檢測細(xì)胞大小和內(nèi)部結(jié)構(gòu)（包括細(xì)胞化學(xué)成分和核的體積)，光散射技術(shù)（10°～70°)檢測細(xì)胞內(nèi)的顆粒性、核分葉性核細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)。

2．流式細(xì)胞術(shù)、電阻抗、射頻和特殊細(xì)胞染色法  

①4DIFF通道：利用激光流式細(xì)胞術(shù)、核酸熒光染色技術(shù)，得到4DIFF白細(xì)胞散點(diǎn)圖（圖3-8)，包括中性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和未成熟粒細(xì)胞。

②WBC/BAS52667788.cn/yaoshi/O通道：在堿性溶血?jiǎng)┳饔孟�，除嗜堿性粒細(xì)胞外的其他所有細(xì)胞均被溶解或萎縮，隨后用流式細(xì)胞術(shù)計(jì)數(shù)嗜堿性粒細(xì)胞，從而得到WBC/嗜堿性粒細(xì)胞百分率和細(xì)胞計(jì)數(shù)絕對值及WBC/BASO散點(diǎn)圖。

③未成熟粒細(xì)胞信息通道：用射頻、電阻抗和細(xì)胞化學(xué)染色法。在細(xì)胞懸液中加硫化氨基酸，幼稚細(xì)胞與硫化氨基酸結(jié)合的量多于較成熟的細(xì)胞、且對溶血?jiǎng)┯械挚棺饔�。因此，�?dāng)加入溶血?jiǎng)�時(shí)，成熟細(xì)胞被溶解，只留下幼稚細(xì)胞（含未成熟粒細(xì)胞、原始細(xì)胞、造血祖細(xì)胞)得以計(jì)數(shù)。IMI通道可定量分析不同類型幼稚細(xì)胞。

3．鎢光源、激光散射法

 ①過氧化物酶（peroxidase，Perox)染色通道（圖3-11)：

過氧化物酶活性強(qiáng)度：嗜酸性粒細(xì)胞大于中性粒細(xì)胞，后者大于單核細(xì)胞；淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞則無過氧化物酶活性。

②嗜堿性粒細(xì)胞/核分葉性（baso/lobularity)通道（圖3-12)：

溶解紅細(xì)胞和血小板，除嗜堿性粒細(xì)胞外，其他所有白細(xì)胞膜均被破壞，胞質(zhì)溢出，僅剩裸核，作白細(xì)胞計(jì)數(shù)和嗜堿性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。

③未染色大細(xì)胞（large unstained cell count，LUC)檢測：在Perox通道，可檢測到大于正常淋巴細(xì)胞體積平均值2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差的細(xì)胞，如異型淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、毛細(xì)胞、幼稚淋巴細(xì)胞和原始細(xì)胞。

4．多角度偏振光散射法（multi angle polarized scatter separation，MAPSS) 

多角度偏振光散射法分4個(gè)角度（圖3-13)檢測：

①  0°，前向散射光：反映細(xì)胞大小，同時(shí)檢測細(xì)胞數(shù)量（圖3-14)。

②  7°，側(cè)向散射光：反映細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)及核染色質(zhì)的復(fù)雜性。

③  90°，垂直角度散射光（偏振光)：反映細(xì)胞內(nèi)部顆粒及分葉狀況（圖3-15)。

④  90°D，垂直角度消偏振散射光；“去偏振”是指垂直方向激光光波運(yùn)動(dòng)隨光散射結(jié)果而改變；在光散射過程中，嗜酸性粒細(xì)胞顆粒豐富，可去偏振光，與中性粒細(xì)胞鑒別（圖3-16)。

5．雙流體（雙鞘流)動(dòng)力連續(xù)系統(tǒng)（double hydrodynamic sequential system，DHSS)

①白細(xì)胞計(jì)數(shù)通道：用電阻抗法檢測。

②嗜堿性粒細(xì)胞通道：用專用染液染色，嗜堿性粒細(xì)胞具有抗酸性，而其他細(xì)胞胞質(zhì)溢出，成為裸核，用電阻抗法檢測，所得結(jié)果與白細(xì)胞/血紅蛋白通道（采用鞘流阻抗法測定白細(xì)胞)的白細(xì)胞結(jié)果進(jìn)行比較（圖3-19)。

③白細(xì)胞分類通道：雙鞘流系統(tǒng)中，用流式細(xì)胞光吸收、電阻抗和細(xì)胞化學(xué)染色液對細(xì)胞脂質(zhì)和蛋白組分染色檢測除各類嗜堿性粒細(xì)胞以外的白細(xì)胞（圖3-20)；在幼稚紅細(xì)胞通道，熒光染色，進(jìn)行白細(xì)胞分類。

雙矩陣LIC散點(diǎn)圖可將幼稚細(xì)胞分為3個(gè)亞群（圖3-22)：

①未成熟粒細(xì)胞（immature granulocyte，IMG)：包括異常中性粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞、原始粒細(xì)胞。

②未成熟單核細(xì)胞（immature monocyte，IMM)：包括早幼單核細(xì)胞、原始單核細(xì)胞。

③未成熟淋巴細(xì)胞（immature lymphocyte，IML)：包括早幼淋巴細(xì)胞、原始淋巴細(xì)胞等。

（三)成熟紅細(xì)胞系列參數(shù)檢測原理

1．電阻抗法  依據(jù)紅細(xì)胞大小和數(shù)量進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（圖3-23)。

2．流式細(xì)胞術(shù)、鞘流電阻抗法

3．流式細(xì)胞術(shù)激光散射法 

（1)紅細(xì)胞/血小板檢測通道：

（2)紅細(xì)胞散點(diǎn)圖：

4．電阻抗法和光散射法 

（四)血小板系列參數(shù)檢測原理

1．電阻抗法 

2．流式細(xì)胞激光核酸熒光染色和電阻抗法 

3．激光散射法 

4．固體激光散射法、電阻抗法和單克隆抗體熒光染色散射法 

（五)血紅蛋白濃度測定檢測原理 

1．改良氰化高鐵血紅蛋白法  測定波長540nm，稀釋液含氰化物成分。

2．非氰化高鐵血紅蛋白法  即稀釋液不含氰化物配置的成分。如SLS-Hb測定法。

（六)網(wǎng)織紅細(xì)胞系列參數(shù)檢測原理 

1．非熒光染料染色法  用新亞甲藍(lán)對網(wǎng)織紅細(xì)胞RNA染色，同時(shí)用一種試劑使紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白溢出后變?yōu)椤坝凹?xì)胞”，可減少對網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測的干擾，采用VCS技術(shù)測定網(wǎng)織紅細(xì)胞（圖3-34)。

2．熒光染料染色法

（1)用聚次甲基染RNA和噁嗪染DNA法：

（2)用氧氮雜芑750染RNA法：

（3)用非對稱菁（asymmetrical cyanine)熒光染料染RNA（也可染DNA)法：

（4)用噻唑橙染網(wǎng)織紅細(xì)胞RNA法：

（七)有核紅細(xì)胞系列參數(shù)檢測原理

1． VCS法  圖3-41 VCS法有核紅細(xì)胞檢測散點(diǎn)圖

2．流式激光/熒光染色法

（1)聚次甲基熒光染色法：圖3-42聚次甲基熒光染色有核紅細(xì)胞檢測散點(diǎn)圖

（2)碘化丙啶染色法：圖3-43碘化丙啶熒光染色有核紅細(xì)胞檢測散點(diǎn)圖

3．白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類通道衍生法  在白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類的過氧化物酶染色通道和嗜堿性粒細(xì)胞染色/分葉核細(xì)胞通道，根據(jù)NRBC的核大小和核密度與各類白細(xì)胞進(jìn)行鑒別（圖3-44，圖3-45)。

4．阻抗法和噻唑橙熒光染色流式細(xì)胞術(shù)  圖3-46

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提問、課堂討論等師生互動(dòng)的設(shè)計(jì)：

1.簡述三分群血液分析儀細(xì)胞檢測的主要原理？

2．血液分析儀檢測白細(xì)胞應(yīng)用哪些原理？試列舉盡可能多的檢測參數(shù)？

3．血液分析儀檢測紅細(xì)胞應(yīng)用哪些原理？試列舉盡可能多的檢測參數(shù)？

4．血液分析儀檢測血小板應(yīng)用哪些原理？試列舉盡可能多的檢測參數(shù)？

5．什么是VCS？檢測血細(xì)胞各具有何特點(diǎn)？

6．什么是MAPSS？檢測血細(xì)胞具有何特點(diǎn)？

7．什么是DHSS？檢測血細(xì)胞具有何特點(diǎn)？

教學(xué)小結(jié)、復(fù)習(xí)思考及作業(yè)題布置：

1. 血液分析儀有哪幾類結(jié)果顯示形式？

2．簡述三分群血液分析儀白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板直方圖的表達(dá)特點(diǎn)？

3．哪些因素可影響正常細(xì)胞直方圖？

4．2005年，國際血液學(xué)組織發(fā)布的血液分析儀顯微鏡復(fù)檢規(guī)則有幾條？

5．簡述紅細(xì)胞參數(shù)RDW、IRF、CHr臨床意義？

6．簡述血小板參數(shù)MPV、IPF臨床意義？

教學(xué)中的創(chuàng)新點(diǎn)（加強(qiáng)基礎(chǔ)與臨床聯(lián)系、外語運(yùn)用、啟發(fā)學(xué)生思維、指導(dǎo)學(xué)生自學(xué)、介紹學(xué)科新進(jìn)展等方面)：

加強(qiáng)基礎(chǔ)與臨床聯(lián)系、 介紹學(xué)科新進(jìn)展、提出理論聯(lián)系實(shí)際，檢驗(yàn)結(jié)果必須結(jié)合臨床表現(xiàn)等

參考資料（包括輔助教材、參考書、文獻(xiàn)等)：

1. 叢玉隆 ,王淑娟主編:《今日臨床檢驗(yàn)學(xué)》, 中國科學(xué)技術(shù)出版社,1997年。  

2．叢玉隆 ,樂家新，秦小玲，楊宏偉，王丹玲主編:《血細(xì)胞分析技術(shù)與臨床》,天津科學(xué)技術(shù)出版社, 2002年。

教研室

意 見

符合教學(xué)要求，同意。

教研室主任簽章：鄭小玲 2008年2月25日

教學(xué)后記（即教學(xué)實(shí)施情況總結(jié)分析，在課程結(jié)束后填寫)

血液分析儀是臨檢基礎(chǔ)中發(fā)展較快的內(nèi)容，本教材新增的內(nèi)容很多，也非常前沿。本內(nèi)容為8學(xué)時(shí)，但時(shí)間較緊，內(nèi)容太多，也比較重要，在以后的教學(xué)中可適當(dāng)增加課時(shí)。