生物化學(xué)與分子生物學(xué)-授課教案醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)教學(xué)方案:

課程名稱

醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)

年級(jí)

2007

專業(yè)、層次

臨床醫(yī)學(xué)

授課教師

于海清

職稱

講師

課型（大、小)

大

學(xué)時(shí)

3

授課題目（章、節(jié))

緒論、第一章  基因的結(jié)構(gòu)與功能

基本教材及主要參考書(shū)

藥立波 主編. 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)(第3版). 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2008

馮作化 主編. 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué). 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2001

教學(xué)目的與要求：

目的：理解醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)的發(fā)展歷史和主要研究?jī)?nèi)容。理解和掌握基因的現(xiàn)代分子生物學(xué)概念。理解和掌握真核生物結(jié)構(gòu)基因的特點(diǎn)。理解和掌握原核生物和真核生物基因的調(diào)控序列。

要求：

1. 掌握基因的現(xiàn)代分子生物學(xué)概念。掌握DNA和RNA的化學(xué)組成；DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)；DNA的主要二級(jí)結(jié)構(gòu)。熟悉DNA的細(xì)胞內(nèi)組裝。

2. 掌握結(jié)構(gòu)基因、斷裂基因、外顯子和內(nèi)含子的概念；真核生物結(jié)構(gòu)基因的特點(diǎn)；順式作用元件和反式作用因子的概念；原核生物基因的調(diào)控序列；真核生物基因的調(diào)控序列。熟悉原核生物啟動(dòng)子的功能區(qū)。

3. 掌握信使RNA的結(jié)構(gòu)特征；轉(zhuǎn)運(yùn)RNA的結(jié)構(gòu)特征。熟悉核糖體RNA的功能；小分子RNA的種類和功能。

4. 掌握核酸酶的概念；核酶的概念。熟悉核酸酶的類型和特點(diǎn)。

教學(xué)內(nèi)容與時(shí)間安排、教學(xué)方法：

內(nèi)容：

1. 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)的定義、發(fā)展歷史和主要研究?jī)?nèi)容、 現(xiàn)狀和未來(lái)   10分鐘

2. 基因的研究簡(jiǎn)史和基因的現(xiàn)代分子生物學(xué)概念  25分鐘

3. 基因的化學(xué)結(jié)構(gòu)      5分鐘

4. 結(jié)構(gòu)基因?yàn)槎嚯逆満吞囟≧NA分子編碼       20分鐘

5. 基因包含結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控序列  40分鐘

6. RNA的結(jié)構(gòu)與功能   10分鐘

7. 核酸酶 10分鐘

方法：舉例調(diào)動(dòng)學(xué)生對(duì)此門課程的興趣，強(qiáng)調(diào)課程的重要性。盡量使用圖片簡(jiǎn)圖加深感性認(rèn)識(shí)，總結(jié)對(duì)比增強(qiáng)辨識(shí)力，動(dòng)畫(huà)演示有助于理解。布置一些內(nèi)容自學(xué)，嘗試課堂提問(wèn)或討論。

教學(xué)重點(diǎn)及如何突出重點(diǎn)、難點(diǎn)及如何突破難點(diǎn)：

重點(diǎn)：基因的概念；真核生物結(jié)構(gòu)基因的特點(diǎn)；原核生物基因的調(diào)控序列；真核生物基因的調(diào)控序列。對(duì)于重點(diǎn)內(nèi)容，教學(xué)過(guò)程中應(yīng)注意著重強(qiáng)調(diào)，以提醒學(xué)生注意。

難點(diǎn)：真核生物結(jié)構(gòu)基因的特點(diǎn)；原核生物基因的調(diào)控序列；真核生物基因的調(diào)控序列。

有關(guān)基因的結(jié)構(gòu)和調(diào)控序列等教學(xué)內(nèi)容較為繁雜，應(yīng)多使用圖片和動(dòng)畫(huà)以助學(xué)生理解。

教研室審閱意見(jiàn)：

  教研室主任簽名：

    年   月 日

基本內(nèi)容

教學(xué)手段

課堂設(shè)計(jì)和時(shí)間安排

緒論

1. 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)的基本含義，是一門從分子水平上研究生命本質(zhì)的一門新興邊緣學(xué)科。

2. 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)研究的主要內(nèi)容：基因的結(jié)構(gòu)與功能，基因組的結(jié)構(gòu)與功能，基因信息的貯存、復(fù)制、傳遞，基因表達(dá)調(diào)控，基因組學(xué)及相關(guān)組學(xué)，基因變異與疾病，基因操作技術(shù)及其應(yīng)用，基因診斷，基因治療。

3. 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)的發(fā)展史：萌芽階段、起步階段、發(fā)展階段。

4. 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)的現(xiàn)狀與未來(lái)。

舉例

簡(jiǎn)圖

討論

舉例結(jié)合圖示講解課程概況，引起對(duì)課程的興趣，強(qiáng)調(diào)學(xué)習(xí)此課程的重要性。

（10分鐘)

第一章  基因的結(jié)構(gòu)與功能

――――――――――――――――――

（★－重點(diǎn)，☆－難點(diǎn))

基因的研究簡(jiǎn)史和現(xiàn)代分子生物學(xué)概念

•   1865年，Mendel ：hereditary factor

•   1869年，Miescher在研究細(xì)胞核時(shí)發(fā)現(xiàn)了DNA，隨后，RNA也被發(fā)現(xiàn)。

The word protein was first used in 1838.

•   1879年，F(xiàn)lemming研究細(xì)胞分裂--染色體。

•   1903年，Sutton和Boveri：factor--chromosome

•   1909年，Johansen:  gene (birth)

•   1926年，Morgan: line, smallest unit of mutation

•   1928年，Griffith: Griffith riddle (R+S)

•   1941年，Beadle和Tatum: one gene, one enzyme

•   1944年，Avery: gene--DNA

•   1949年，Pauling: gene--amino acid sequences

•   1950年，McClintock：gene is jumping!

C-Ds-Ac operate system, 轉(zhuǎn)座因子,

•   1952年，Hershey和Chase: gene--DNA (Herriott hypothesis)

•   1953年4月25日，Watson和Crick: DNA double helix

•   1956年，Kornberg: DNA聚合酶

•   1956年，Ingram: 珠蛋白第6位氨基酸殘基由Glu突變?yōu)閂al是鐮刀狀紅細(xì)胞貧血的致病原因。

•   1957年，Benzer：順?lè)醋覥istro

•   1958年，Weiss: RNA聚合酶

•   1958年，Crick: Central dogma

semiconservative replication

•   1958年，Meselson和Stahl: 證明DNA半保留復(fù)制

•   1959年，Lejeune: Down氏綜合征是由于21號(hào)染色體三體突變所致。

•   1960年，Kendrew等完成了抹香鯨血紅蛋白三維結(jié)構(gòu)的高分辨X-射線衍射分析。

•   1960年，Hirs，Moore和Stein: RNase的一級(jí)結(jié)構(gòu)

•   1961年，Jacob和Monod：operon theory，mRNA Some genes are nothing but  operating!

•   1964年，Nirenberg和Khorana：the Genetic Code

•   1965年，中國(guó)科學(xué)家人工合成了牛胰島素。

•   1967年，Weiss發(fā)現(xiàn)了T4噬菌體DNA連接酶。

•   1968年，Okazaki提出DNA不連續(xù)復(fù)制學(xué)說(shuō)。

•   1970年，Temin和Baltimore發(fā)現(xiàn)了逆轉(zhuǎn)錄酶。

•   1972年，Berg將病毒SV40的DNA與噬菌體P22的DNA在體外重組成功。

•   1973年，Kim用X-射線衍射法測(cè)定了酵母苯丙氨酸t(yī)RNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)。

•   1973年，中國(guó)科學(xué)家用X-射線衍射法測(cè)定了牛胰島素的空間結(jié)構(gòu)。

•   1975年，Sanger建立DNA序列測(cè)定的加減法。

•   1976年，Mexam和Gilbert建立了DNA序列測(cè)定的化學(xué)法。

•   1976年，Varmus 和Bishop：病毒癌基因v-src，隨后又提出了癌基因假說(shuō)。

•   1977年，Sanger：DNA序列測(cè)定的末端終止法。

•   1977年，Sanger：基因具有重疊性。

•   1977年，Boyer將生長(zhǎng)激素釋放抑制因子基因在E. coli中表達(dá)成功。

•   1977年，Roberts和Sharp：真核基因具有內(nèi)含子和外顯子，提出了斷裂基因的概念。

•   1978年，Kan YM第一次利用DNA多態(tài)性與致病基因的關(guān)聯(lián)性成功地對(duì)鐮刀狀紅細(xì)胞貧血進(jìn)行了產(chǎn)前診斷。

•   1981年，Costantini和Lacy首次報(bào)告轉(zhuǎn)基因小鼠獲得成功。

•   1982年，Cech發(fā)現(xiàn)了四膜蟲(chóng)RNA具有自催化活性，并提出了核酶（ribozyme)的概念。

•   1983年，Mullis建立了PCR技術(shù)。

•   1983年，第一次將亨丁頓病的致病基因定位于第4號(hào)染色體上。

•   1986年，第一個(gè)人類致病基因—慢性肉芽腫病的致病基因被定位和克隆。

•   1987年，美國(guó)開(kāi)發(fā)完成DNA自動(dòng)測(cè)序儀。

•   1990年，Blaese等完成了首例針對(duì)腺苷脫氨酶缺陷基因的基因治療。

•   1990年，人類基因組計(jì)劃啟動(dòng)，并于2006年完成了人類基因組DNA的全部測(cè)序工作。

•   1990~2000年，完成了多種致病微生物基因組的測(cè)序工作，其中包括流感病毒基因組、支原體基因組、結(jié)核桿菌基因組等。

•   1998年，F(xiàn)ire和Mello：RNA interference

闡明gene silencing的機(jī)制，RNAi已被廣泛用作研究基因功能的一種手段，有望在未來(lái)幫助科學(xué)家開(kāi)發(fā)出治療疾病的新療法。

基因（gene)是指核酸分子中貯存與表達(dá)遺傳信息的單位，包括編碼序列、非編碼序列和調(diào)控序列。大部分生物中構(gòu)成基因的核酸物質(zhì)是DNA，少數(shù)生物（如RNA病毒)中是RNA。

討論

簡(jiǎn)圖

動(dòng)畫(huà)

★  概念。

舉例結(jié)合圖示講解基因，進(jìn)一步引起對(duì)學(xué)生對(duì)課程的興趣

　　　　　　　   　(25分鐘)

第一節(jié)  基因的化學(xué)結(jié)構(gòu)

   1. DNA和RNA的化學(xué)組成

  核苷酸：戊糖、堿基（嘌呤和嘧啶)、磷酸

   2. DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)：堿基組成

3. DNA的主要二級(jí)結(jié)構(gòu)：雙螺旋

4. DNA在細(xì)胞內(nèi)的組裝：核小體

討論

簡(jiǎn)圖

動(dòng)畫(huà)

結(jié)合圖示和復(fù)習(xí)生化相關(guān)內(nèi)容講解：DNA和RNA的化學(xué)組成；DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)；DNA的主要二級(jí)結(jié)構(gòu)；DNA在細(xì)胞內(nèi)的組裝。

(5分鐘)

――第1節(jié)課結(jié)束――

第二節(jié)  基因的功能和組構(gòu)

1. 結(jié)構(gòu)基因?yàn)槎嚯逆満吞囟≧NA分子編碼。

定義: 在基因片段中，貯存一特定轉(zhuǎn)錄RNA分子的DNA序列，這段序列決定該RNA分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)基因又稱為編碼序列。

討論

簡(jiǎn)圖

動(dòng)畫(huà)

★  結(jié)構(gòu)基因的概念。

結(jié)合圖示講解：真核生物結(jié)構(gòu)基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。

(20分鐘)

設(shè)問(wèn)

1. 原核生物結(jié)構(gòu)基因與真核生物結(jié)構(gòu)基因有何區(qū)別？

2. 病毒結(jié)構(gòu)基因與真核生物結(jié)構(gòu)基因有何區(qū)別？

2. 基因包含結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控序列。

基因的組成：一個(gè)編碼特定多肽鏈的DNA序列(結(jié)構(gòu)基因) + 與蛋白質(zhì)編碼無(wú)關(guān)的DNA序列(調(diào)控序列)

原核生物基因的調(diào)控序列：

1. 啟動(dòng)子（promoter)：是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列。位于結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的上游，啟動(dòng)子本身并不被轉(zhuǎn)錄。包括三個(gè)部分:轉(zhuǎn)錄起始部位（＋1 bp)、－10 bp區(qū)和－35 bp區(qū)。RNA聚合酶全酶中的σ因子識(shí)別并結(jié)合在－35 bp區(qū)和－10 bp區(qū)

討論

對(duì)比

簡(jiǎn)圖

動(dòng)畫(huà)

★強(qiáng)調(diào)：原核生物基因的調(diào)控序列。

☆結(jié)合圖示講解：原核生物基因的啟動(dòng)子特點(diǎn)，終止子，操縱元件，正調(diào)控蛋白結(jié)合位點(diǎn)。

(20分鐘)

――第2節(jié)課結(jié)束――

真核生物基因的調(diào)控序列

外顯子（exon)

指結(jié)構(gòu)基因中與成熟RNA分子中的保留序列相 

對(duì)應(yīng)的序列

 內(nèi)含子（intron)

指與RNA分子剪接時(shí)刪除部分相對(duì)應(yīng)的結(jié)構(gòu)基因序列

n 內(nèi)含子Chambon規(guī)則（GT-AG規(guī)則)：5’GT-AG3’是真核chrDNA剪接酶的識(shí)別信號(hào)

n GC島（GC island)：人類DNA中有基因密集的“城市中心”，GC含量很高

n 與轉(zhuǎn)錄調(diào)控有關(guān)的DNA序列稱為順式作用元件（cis-acting elements)

n 順式作用元件：包括啟動(dòng)子、上游啟動(dòng)子元件、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)和一些反應(yīng)元件等。

1. 啟動(dòng)子

•   RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列。

•   多數(shù)位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的上游，啟動(dòng)子本身不被轉(zhuǎn)錄。但有一些啟動(dòng)子（如tRNA啟動(dòng)子)可以位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的下游，這些DNA序列可以被轉(zhuǎn)錄。

2. 上游啟動(dòng)子元件

•   指TATA盒上游的一些特定的DNA序列

•   與 TATA盒共同組成啟動(dòng)子

•   是反式作用因子（轉(zhuǎn)錄激活蛋白)識(shí)別與結(jié)合的位點(diǎn) 

n 常見(jiàn)的上游啟動(dòng)子元件

•   CAAT盒：含有5‘GGNCAATCT3’核心序列

－80 bp～－90 bp

•   CACA盒: 含有5‘GCCACACCC3’核心序列－80 bp～－90 bp (大多數(shù)真核生物基因具有)

•   GC盒:  含有5‘CCGCC 3’ 核心序列

  －70 bp和－120 bp (組成型基因具有)

3. 反應(yīng)元件

•   一類能介導(dǎo)基因?qū)��?xì)胞外的某種信號(hào)產(chǎn)生反應(yīng)的特異的DNA序列

•   特點(diǎn)：

具有較短的保守序列

通常位于啟動(dòng)子附近、啟動(dòng)子內(nèi)或增強(qiáng)子區(qū)域

4. poly(A)信號(hào)

•   II類基因除了調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始的序列外，在結(jié)構(gòu)

   基因的3‘端下游還有加尾信號(hào)。由AATAAA序列和醫(yī)學(xué).全在線52667788.cnGT豐富區(qū)，或T豐富區(qū)組成。

•   作用:  終止mRNA轉(zhuǎn)錄和為其加上poly(A)尾

討論

對(duì)比

簡(jiǎn)圖

動(dòng)畫(huà)

★強(qiáng)調(diào)：真核生物基因的調(diào)控序列。

☆結(jié)合圖示講解：真核生物基因的啟動(dòng)子特點(diǎn)，增強(qiáng)子，沉默子。

(20分鐘)

第三節(jié)  RNA的結(jié)構(gòu)與功能

1. 信使RNA具有特征結(jié)構(gòu)。

u 原核生物mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：多順?lè)醋咏Y(jié)構(gòu)

u 真核生物mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：

① 單順?lè)醋咏Y(jié)構(gòu)，只編碼一條多肽鏈

② 3’-端具有polyA的”tail“結(jié)構(gòu)，不由DNA編碼，防止mRNA被核酸酶水解，核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)

③ 5’端具有 m7G5’pppN的“cap”結(jié)構(gòu)， 防止核酸外切酶對(duì)mRNA的降解，識(shí)別起始點(diǎn)（核糖體識(shí)別mRNA )

討論

對(duì)比

☆結(jié)合圖示講解：原核生物與真核生物mRNA的特征結(jié)構(gòu)。

    (8分鐘)

2. 轉(zhuǎn)運(yùn)RNA有氨基酸接納莖和反密碼環(huán)。

u 分子量25KD左右，沉降系數(shù)4s；多數(shù)為70~90個(gè)核苷酸

u 三葉草形結(jié)構(gòu)

u 3’末端（接受末端)CAOH結(jié)構(gòu)，接受活化的aa

u 5’端多為pG，也有pC結(jié)構(gòu)的

u 執(zhí)業(yè)藥師具有不等的稀有堿基及位置不變的恒定核苷酸2

3. 核糖體RNA是核糖體的組成成分。

u 原核生物的rRNA：16S、5S、23S

u 真核生物的rRNA：18S、5S、5.8S、28S

4. 小分子RNA有不同的種類和功能。

u 真核細(xì)胞的小分子RNA

snRNA 參與mRNA的剪接

snoRNA參與rRNA前體的剪接

scRNA參與蛋白質(zhì)的翻譯和轉(zhuǎn)運(yùn)

miRNA、siRNA、antisense RNA參與基因表達(dá)調(diào)控

u 原核細(xì)胞的小分子RNA：antisense RNA

討論

對(duì)比

簡(jiǎn)圖

動(dòng)畫(huà)

結(jié)合圖示和復(fù)習(xí)生化相關(guān)內(nèi)容講解：DNA和RNA的化學(xué)組成；DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)；DNA的主要二級(jí)結(jié)構(gòu)；DNA在細(xì)胞內(nèi)的組裝。

  (5分鐘)

 第四節(jié)  核酸酶

核酸酶是指所有可以水解核酸的酶

1. 依據(jù)底物不同分類

•   DNA酶（deoxyribonuclease，DNase)，專一切割DNA

•   RNA酶（ribonuclease，RNase)，專一切割RNA

2. 依據(jù)切割部位不同

•   核酸內(nèi)切酶 限制性核酸內(nèi)切酶  非限制性核酸內(nèi)切酶

•   核酸外切酶 5’--3’或3‘--5’核酸外切酶

²  參與DNA的合成與修復(fù)及RNA合成后的剪接等重要基因復(fù)制和基因表達(dá)過(guò)程

²  負(fù)責(zé)清除多余的，結(jié)構(gòu)和功能異常的核酸，同時(shí)也可以清除侵入細(xì)胞的外源性核酸

²  消化液中降解食物中的核酸以利吸收

²  體外重組DNA技術(shù)中的重要工具酶

核酶（ribozyme)：是一類具有催化活力的RNA

l   功能

  主要參與RNA的加工和成熟

l 應(yīng)用

剪切、破壞特定的RNA分子，如切割RNA的基因組或癌基因的mRNA等，達(dá)到治療疾病的目的

討論

簡(jiǎn)圖

動(dòng)畫(huà)

★強(qiáng)調(diào)：核酸酶，核酶的概念。

☆結(jié)合圖示講解：核酸酶的種類和特點(diǎn)。

(7分鐘)

――第3節(jié)課結(jié)束――

小

結(jié)

原核生物基因與真核生物基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。

原核生物基因與真核生物基因的調(diào)控序列。

  (2分鐘)

復(fù)

習(xí)

思

考

題

、

作

業(yè)

題

1. 什么是DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)？

2. DNA的主要二級(jí)結(jié)構(gòu)的要點(diǎn)有哪些？

3. 什么是Chargaff規(guī)則？

4. 原核生物與真核生物DNA的細(xì)胞內(nèi)組裝有何不同？

5. 原核生物的結(jié)構(gòu)基因與調(diào)控序列是怎樣進(jìn)行組織的？

6. 真核生物的順式作用元件包括哪些？

7. 什么是啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和沉默子？

8. 真核生物信使RNA有何結(jié)構(gòu)特征？

9. 原核生物和真核生物核蛋白體的組成有何不同？

10. 小分子RNA的種類和功能有哪些？

11. 核酸酶的類型有哪些，各有什么特點(diǎn)？

12. 核酶的本質(zhì)和功能是什么？

下

次

課

預(yù)

習(xí)

要

點(diǎn)

1. 真核細(xì)胞基因組存在三種重復(fù)序列

2. 多基因家族及假基因的概念；

3. 原核生物基因組的特點(diǎn)

4. 操縱子的概念。

5. 病毒基因組的分類和特點(diǎn)

6. 重疊基因的概念。

實(shí)

施

情

況

及

分

析