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1.3 糖尿病皮膚潰瘍大鼠模型的建立 給大鼠喂飼高脂飼料(50 %基礎(chǔ)飼料、10 %熟豬油、 25%蔗糖、15%蛋黃粉)7d后，在大鼠尾靜脈注射四氧嘧啶40mg/kg，5d后測(cè)血糖，篩選血糖值在20～33mmol/L之間為符合標(biāo)準(zhǔn)的糖尿病大鼠，建立糖尿病大鼠模型。然后用戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，用刀片在大鼠小腿劃一個(gè)約1cm長(zhǎng)的切口，深達(dá)皮下，并注入1ml金黃色葡萄球菌懸液(由浙江中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)院提供)，以引起皮膚潰瘍、甚至壞死，制作成大鼠皮膚潰瘍模型。
1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 大鼠90只隨機(jī)選取6只為正常對(duì)照組(正常組)，其余84只均以尾靜脈注射四氧嘧啶40mg/kg，除8只不符合糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)的大鼠予以剔除外，76只用于建立糖尿病皮膚潰瘍模型造模，隨機(jī)分成6組，模型對(duì)照組16只、加減防己黃芪湯干預(yù)的高劑量組(防己黃芪高劑量)12只、中劑量組(防己黃芪中劑量)12只、低劑量組(防己黃芪低劑量)12只、中藥糖脈康對(duì)照組(中藥對(duì)照組)12只、化學(xué)藥物二甲雙胍加6542陽(yáng)性對(duì)照組(西藥對(duì)照組)12只。
1.5 給藥劑量與方法 加減防己黃芪湯根據(jù)臨床用藥劑量，折算成大鼠使用劑量，高、中、低劑量分別是：12g/kg、6g/kg、3g/kg(分別為成人臨床日用藥量的20、10、5倍，成人體重按60kg計(jì));糖脈康顆粒劑量10g/kg(成人日用藥量的10倍，體重按60kg計(jì));鹽酸二甲雙胍片125mg/kg，消旋山莨菪堿片5mg/kg(成人日用藥量的10倍，體重按60kg計(jì))。各組藥物在灌胃時(shí)根據(jù)大鼠體重，稀釋成相同的用量。正常對(duì)照組給予基礎(chǔ)飼料，同時(shí)用與各藥物治療組相同用量的生理鹽水灌胃，每日1次。其余6組除給予高脂高糖飼料外，模型組還用與各藥物治療組相同用量的生理鹽水灌胃，每日1次;加減防己黃芪湯高、中、低劑量組分別用12g/kg、6g/kg、3g/kg的加減防己黃芪湯灌胃，每日1次;中藥對(duì)照組用10g/kg的糖脈康溶解液灌胃，每日1次;西藥對(duì)照組用125mg/kg的二甲雙胍片灌胃，8周后開始聯(lián)合消旋山莨菪堿片5mg/kg溶解液灌胃，每日1次。各組均自由飲水，干預(yù)治療10周。
1.6 NO和ET1水平的檢測(cè) 血清一氧化氮(NO)濃度采用化學(xué)法測(cè)定，其應(yīng)用原理是NO遇氧及水生成硝酸鹽及亞硝酸鹽，后二者遇硝酸鹽顯色劑可生成淡紅色偶氮化合物，通過比色可間接測(cè)知NO濃度。NO測(cè)定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。血漿ET1水平采用放射免疫法(RIA)測(cè)定，試劑盒由北京北方生物技術(shù)研究所提供。所有樣本均由專人嚴(yán)格按產(chǎn)品說明書操作。
1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用方差分析對(duì)各組均數(shù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，P<0.05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
血清一氧化氮(NO)的變化，血漿ET1水平的變化 見表1。表1 各組大鼠血清NO、血漿ET1水平與模型組比，^P<0.05，▲▲ P<0.01，△△△P<0.001
