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1 材料和方法
1.1 動(dòng)物分組
33只雄性SD大鼠(南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供)，體重200～250 g，隨機(jī)分為非燙傷正常參照組(正常組)、傳統(tǒng)TPN組(傳統(tǒng)組)和添加Ala-Gln的TPN組(二肽組)，每組11只。
1.2 中心靜脈置管
禁食24 h后，傳統(tǒng)組和二肽組大鼠稱重，2%氯氨酮(100 mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉后，以8%～10%硫化鈉水溶液脫去頸部、背部體毛，溫水擦凈，碘伏消毒皮膚，右頸部作縱形切口，顯露右側(cè)頸外靜脈，遠(yuǎn)端結(jié)扎，近端插入外徑1.2 mm、內(nèi)徑0.6 mm的硅膠管至上腔靜脈(插入1.0～2.0 cm)。硅膠管自皮下隧道從背部肩胛間皮下引出后接保護(hù)彈簧及自制旋轉(zhuǎn)裝置。正常組不置管。
1.3 燙傷模型制作和飼養(yǎng)
根據(jù)公式S=0.091×W2/3〔S為體表面積(m2)、W為大鼠體重(kg)〕計(jì)算出大鼠體表面積，在大鼠仍處于麻醉狀態(tài)下，將傳統(tǒng)組和二肽組大鼠已行脫毛處理的背部浸入100℃水中12 s，造成30%體表面積的Ⅲ度燙傷。傷后立即按體重腹腔內(nèi)注射林格液(2.5 ml·100 g-1)，置入代謝籠，自中心靜脈置管用微量注射泵持續(xù)注林格液(11.25 ml·100 g-1)抗休克治療。正常組不做燙傷處理，置入籠中自由飲食。飼養(yǎng)室內(nèi)溫度保持在25℃左右，每天保持約12 h光照，紫外線消毒室內(nèi)空氣每天1次，乙醇擦洗代謝籠以保持代謝籠清潔;每天碘伏消毒燙傷創(chuàng)面和手術(shù)切口。
1.4 營(yíng)養(yǎng)支持
傳統(tǒng)組和二肽組大鼠接受等熱量等氮量TPN：熱量780 kJ·kg-1體重，采用葡萄糖和脂肪乳劑(30%英特利匹特，華瑞公司生產(chǎn))雙能源3∶2比例提供。每千克體重氮量1.8 g：傳統(tǒng)組氮源由8.5%樂(lè)凡命(華瑞公司生產(chǎn))供給，二肽組氮源由8.5%樂(lè)凡命中添加Ala-Gln(費(fèi)森尤斯公司生產(chǎn)的20%力肽，其中力肽提供的氮量占總氮量的48%)。非蛋白熱量：氮量=434 kJ∶1 g。2組TPN液中均加入適量的水溶性、脂溶性維生素、微量元素、電解質(zhì)以及胰島素(按每10 g葡萄糖1 U給予)。TPN液配方見(jiàn)表1。自中心靜脈插管用微量注射泵均勻持續(xù)輸注TPN液，燙傷當(dāng)日每天每100 g體重給予11.25 ml，第2～7天每天每100 g體重給予22.5 ml。表1 傳統(tǒng)組和二肽組TPN營(yíng)養(yǎng)液配方(略)
1.5 標(biāo)本收集與檢測(cè)醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站52667788.cn
第8天晨處死動(dòng)物，取標(biāo)本檢測(cè)各觀察指標(biāo)。
1.5.1 體重變化醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站52667788.cn
第8天大鼠稱重，觀察TPN前后的體重變化情況。
1.5.2 血生化檢查
腹主動(dòng)脈穿刺取血，置入干燥管中，血凝后離心20 min (1500 r·min-1)，取上清-20℃冷凍保存，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(G)，采用免疫濁度法檢測(cè)前白蛋白(PAB)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)。
1.5.3 肌肉組織中Gln含量的測(cè)定
取大腿肌肉一塊，立即液氮冷凍，移入-80℃深低溫水箱保存，集中用高效液相色譜法測(cè)定肌肉中Gln的含量[1]。
1.5.4 氮平衡和累積氮平衡測(cè)定
收集大鼠24 h尿液，微量凱氏定氮法檢測(cè)24 h尿液中氮量。氮平衡(g·kg-1)=〔入氮(g)-出氮(g)〕/體重(kg)。TPN時(shí)，入氮即營(yíng)養(yǎng)液中氨基酸的含氮量，出氮主要為24 h尿液中的氮量。第n天的累積氮平衡=第1～n天的氮平衡的累加。
1.5.5 空腸黏膜形態(tài)學(xué)觀察
距Treitz韌帶8 cm處取一段空腸，10%甲醛溶液固定，常規(guī)病理切片，于光鏡下用多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)測(cè)量絨毛高度(VH)、絨毛寬度(VW)、隱窩深度及黏膜厚度，根據(jù)公式VSA=л×VW×VH計(jì)算出絨毛表面積(VSA)，每張切片隨機(jī)測(cè)量5個(gè)絨毛，取平均值。
1.5.6 創(chuàng)面肉芽組織的觀察
取背部燙傷皮膚一塊，10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片、蘇木精-伊紅染色、樹(shù)脂封片，光鏡下觀察肉芽組織中毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞的密度，每張切片高倍鏡觀察至少8個(gè)不同的視野，對(duì)毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，取平均值。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
全部數(shù)據(jù)采用±s表示，應(yīng)用SPSS 10.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行差異比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié) 果
