本研究中,齲壞組織檢測到雙歧桿菌者占22.5%,說明雙歧桿菌確實可在深齲組織中檢出,但此結(jié)果比Becker等[3]的檢出率低,可能與取樣、培養(yǎng)、人種等因素有關(guān)。本研究結(jié)果還顯示出S-ECC組和無齲組的雙歧桿菌的檢出情況明顯不同。S-ECC組的不同部位均可檢出雙歧桿菌,且其檢出率無明顯差異,說明S-ECC兒童的口腔狀態(tài)有利于雙歧桿菌的生存。該結(jié)果提示,S-ECC兒童存在口腔微生態(tài)環(huán)境失衡,在此條件下,雙歧桿菌成為條件致病菌,齲損環(huán)境有利于雙歧桿菌的生長。傳統(tǒng)的細菌培養(yǎng)、生化鑒定等方法費時且不穩(wěn)定,但有助于研究細菌特性;分子生物學(xué)方法簡便快速,但存在較高的假陽性。本試驗將二者結(jié)合起來,互補不足,為研究細菌的致病機制奠定基礎(chǔ)?谇粌(nèi)細菌種類繁多,目前尚無一種較好的分離口腔雙歧桿菌的選擇性培養(yǎng)基[6]。筆者在試驗初始階段,通過對培養(yǎng)基成分的改良和反復(fù)篩選,摸索出一種可以較好地分離口腔雙歧桿菌的選擇性培養(yǎng)基。筆者在原成品雙歧桿菌選擇性培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,加入氯化鋰、山梨酸、丙酸鈉,它們均有抑制細菌和真菌生長的作用[6,12],從而為雙歧桿菌的分離提供了條件;還加入硫酸新霉素和卡那霉素,二者均為雙歧桿菌耐受的抗生素[6],且容易獲得、保存方便。本試驗證明,經(jīng)過改良的雙歧桿菌選擇性培養(yǎng)基對該菌的選擇性較好。當(dāng)分離樣本中含有雙歧桿菌時,雙歧桿菌的生長較好;而樣本中不含雙歧桿菌時,少量的其他細菌可在其上生長,如乳桿菌、放線菌等。由此可見,本研究所用培養(yǎng)基對雙歧桿菌的分離和挑選提供了很大方便,可推薦作為口腔雙歧桿菌的選擇性培養(yǎng)基。但該培養(yǎng)基也存在一定的不足之處,如不能抑制乳桿菌、放線菌等口腔常駐菌的生長,對于其他可能混雜的細菌未能進行進一步的種類劃分和鑒定。因此,對雙歧桿菌的特異性選擇培養(yǎng)基還需作進一步的探索。
【參考文獻】
[1] 馬賀, 胡德渝. 學(xué)齡前兒童齲病高發(fā)的危險因素[J]. 國際口腔醫(yī)學(xué)雜志, 2008, 35(增刊):131-133.MA He, HU De-yu. Risk factors of caries in the preschoolchildren[J]. Int J Stomatol, 2008, 35(Suppl):131-133.
[2] Cole MF, Bryan S, Evans MK, et al. Humoral immunity tocommensal oral bacteria in human infants: Salivary antibodiesreactive with Actinomyces naeslundii genospecies 1 and 2 duringcolonization[J]. Infect Immun, 1998, 66(9):4283-4289.
[3] Becker MR, Paster BJ, Leys EJ, et al. Molecular analysis ofbacterial species associated with childhood caries[J]. J Clin Mi-crobiol, 2002, 40(3):1001-1009.
[4] 中華口腔醫(yī)學(xué)會牙體牙髓病專業(yè)委員會. 口腔微生物名稱(第二版)[J]. 華西口腔醫(yī)學(xué)雜志, 2006, 24(6):566-570.Chinese Stomatological Association, Operative Dentistry and En-dodontics Field. Name of oral microbes(2nd edition)[J]. WestChina J Stomatol, 2006, 24(6):566-570.
[5] Crociani F, Biavati B, Alessandrini A, et al. Bifidobacterium in-opinatum sp. nov. and Bifidobacterium denticolens sp. nov., twonew species isolated from human dental caries[J]. Int J Syst Bac-teriol, 1996, 46(2):564-571.
[6] 凌代文, 東秀珠. 乳酸細菌分類鑒定及實驗方法[M]. 北京: 中國輕工業(yè)出版社, 1999:108.LING Dai-wen, DONG Xiu-zhu. Classification and verificationof lactic acid bacteria and the epirical method[M]. Beijing: ChinaLight Industry Press, 1999:108醫(yī).學(xué).全.在.線52667788.cn.
[7] Barr ES, Berg JH, Bookwalter CA, et al. Definition of earlychildhood caries[J]. Pediatr Dent, 2005, 27(7):13.
[8] Kaufmann P, Pfefferkorn A, Teuber M, et al. Identification andquantification of Bifidobacterium species isolated from food withgenus-specific 16S rRNA-targeted probes by colony hybridiza-tion and PCR[J]. Appl Environ Microbiol, 1997, 63(4):1268-1273.
[9] Matsuki T, Watanabe K, Tanaka R, et al. Distribution of Bifi-dobacterial species in human intestinal microflora examined with16S rRNA-gene-targeted species-specific primers[J]. Appl Env-iron Microbiol, 1999, 65(10):4506-4512.
[10] 周學(xué)東, 岳松齡. 實用牙體牙髓病治療學(xué)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2004:108-110.ZHOU Xue-dong, YUE Song-ling. Applied conservative dentistry[M]. Beijing: People′s Medical Publishing House, 2004:108-110.
[11] 肖曉蓉. 口腔微生物學(xué)[M]. 成都: 四川大學(xué)出版社, 2002:129-132.XIAO Xiao-rong. Oral microbiology[M]. Chengdu: Sichuan U-niversity Press, 2002:129-132.
[12] 李濤, 高偉. 利用正交法研究三種防腐劑對細菌的抑菌效應(yīng)[J].陜西師范大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué)版, 2007, 35(S1):27-30.LI Tao, GAO Wei. Inhibition effect of three kinds of food preser-vative on bacteria using orthogonal experiment[J]. J Shanxi Nor-mal University: Natural Science Edition, 2007, 35(S1):27-30.