| 公開(公告)號(hào) | CN1301264C |
| 公開(公告)日 | 2007.02.21 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510000032.2 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.01.05 |
| 專利名稱 | 海洋生物抗氧化活性肽及其制備方法 |
| 主分類號(hào) | C07K7/06(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C07K7/06(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 王躍軍;孫 謐;鄒 建;王海英 |
| 地址 | 266071山東省青島市南京路106號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京金信立方知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 史和初 |
| 國省代碼 | 山東;37 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種海洋生物抗氧化活性肽的制備方法，包括 (1)抗氧化活性蛋白的制備： ①將貝類內(nèi)臟團(tuán)絞碎，然后按濕重1∶1(w/w)加入含0.2％Triton-100；0.1mmol/L EDTA的1.0％的NaCl溶液置組織勻漿器中制成勻漿； ②調(diào)pH為5.6，70℃水浴加熱5min，迅速冷卻，冷卻液經(jīng)離心10min，收集上清液，調(diào)pH至6.7后收取60～90％飽和度的(NH4)2SO4沉淀，沉淀用5mmol/L pH 7.5的三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液溶解、透析； ③將離心透析液取上清液，加入1.5倍預(yù)冷丙酮，將丙酮沉淀物再溶解于5mmol/L pH 7.5的三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液中并充分透析得粗蛋白液； ④粗蛋白液經(jīng)聚乙二醇20000濃縮、離心除不溶物，取上清液上DEAE-Sephadex A-50 20×400mm柱，先用5mmol/L pH 7.5的三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液充分平衡，再用含0～0.2M氯化鈉的上述緩沖液梯度洗脫，流速20ml/h，收集在280nm有吸收的餾份，合并具SOD活性的餾份，濃縮并用雙蒸水充分透析、凍干保存； (2)抗氧化活性多肽制備 ①向抗氧化蛋白加入海洋低溫堿性蛋白酶，蛋白質(zhì)與酶重量比為33∶1.6，調(diào)pH為9.0，于30℃恒溫水浴中酶解24小時(shí)，酶解結(jié)束后，將酶解液置于沸水浴中加熱使酶失活，冷卻，離心除去變性的大分子蛋白，取上清液冷凍干燥； ②酶解后粗品用去離子水溶解，經(jīng)Sephadex G-25凝膠柱層析進(jìn)一步去除大分子蛋白：用pH7.2三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液平衡后裝18×1000mm柱，上樣后用平衡緩沖液洗脫，流速為3ml/min，280nm處檢測； (3)提純 ①CM Sepharose陽離子交換柱層析： 陽離子交換劑CM Sepharose Fast Flow，經(jīng)預(yù)處理后用pH3.0的2mM磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液平衡后裝30×160mm柱，上樣后用緩沖液洗脫到出現(xiàn)基線，再用含0～0.5M氯化鈉的上述緩沖液梯度洗脫，收集活性峰； ②反相高效液相色譜(RP-HPLC) Waters 2690高效液相色譜系統(tǒng)，Symmetry C18分析型色譜5um，3.9×150mm柱，上樣溶液為過膜去離子水，洗脫液為30％乙腈-水溶液，0％～100％洗脫液洗脫15ml，樣品收集后真空冷凍干燥，得純海洋生物抗氧化活性肽。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及新型海洋生物抗氧化活性肽及其制備方法，該海洋生物抗氧化活性肽，其特征為一小分子量多肽類物質(zhì)，分子量為794Da1；由7種氨基酸組成，分別為天冬氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸和賴氨酸，其物質(zhì)的量之比為1∶1∶1∶1∶2∶1∶1。含有8個(gè)氨基酸殘基。其中酸性氨基酸的相對(duì)含量為9.22％，堿性氨基酸的相對(duì)含量為12.62％，極性氨基酸的相對(duì)含量為44.8％。本發(fā)明提供的海洋生物抗氧化活性肽具有如下明顯的優(yōu)點(diǎn)：抗氧化活性強(qiáng)、水溶性好及安全、無毒、無副作用等，適宜應(yīng)用于食品、化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。 |
| 國際公布 |
