| 公開(公告)號 | CN1888078A |
| 公開(公告)日 | 2007.01.03 |
| 申請(專利)號 | CN200510120597.4 |
| 申請日期 | 2005.12.31 |
| 專利名稱 | 細(xì)胞內(nèi)篩選抗乙型肝炎病毒藥物的方法 |
| 主分類號 | C12Q1/18(2006.01)I |
| 分類號 | C12Q1/18(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 武漢生物制品研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 方志正;劉漢平 |
| 地址 | 430060湖北省武漢市武昌區(qū)臨江大道7號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 武漢開元專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 樊 戎 |
| 國省代碼 | 湖北;42 |
| 主權(quán)項 | 一種細(xì)胞內(nèi)篩選抗乙型肝炎病毒藥物的方法，其特征是：它是基于HepG2細(xì)胞內(nèi)乙肝病毒基因組瞬時表達(dá)細(xì)胞模型，以HBVfxRNA、trxRNA和HBcAg為藥效評價指標(biāo)，以相應(yīng)的引物和競爭子對實驗組和對照組HBV fxRNA、HBV trxRNA定量分析，以ECL技術(shù)分析HBcAg并以它們?yōu)樗幮гu價指標(biāo)來篩選抗乙肝病毒藥物，其具體步驟如下： (1)乙肝病毒全基因和CN基因以磷酸鈣共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，并設(shè)加藥物共同轉(zhuǎn)染的實驗組和不加藥物轉(zhuǎn)染的對照組； (2)轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)細(xì)胞4天，收獲細(xì)胞，提取細(xì)胞內(nèi)總RNA和蛋白質(zhì)； (3)將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，與相應(yīng)的競爭子作競爭聚合酶鏈反應(yīng)，從而對實驗組和對照組的HBV fxRNA、HBV trxRNA進(jìn)行定量分析； (4)將實驗組和對照組的蛋白質(zhì)以ECL技術(shù)對HBcAg進(jìn)行分析，通過HBV fxRNA、HBV trxRNA和HBcAg的檢測結(jié)果篩選抗乙肝病毒藥物。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種乙型肝炎病毒藥物的篩選方法，具體地說是一種細(xì)胞內(nèi)篩選抗乙型肝炎病毒藥物的方法。它是基于HepG2細(xì)胞內(nèi)乙肝病毒基因組瞬時表達(dá)細(xì)胞模型或穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系HepG2 2.2.15細(xì)胞，以HBV fxRNA、trxRNA和HBcAg為藥效評價指標(biāo)，以相應(yīng)的引物和競爭子對實驗組和對照組HBV fxRNA、HBV trxRNA定量分析，以ECL技術(shù)分析HBcAg并以它們?yōu)樗幮гu價指標(biāo)來篩選抗乙肝病毒藥物。本發(fā)明對HBV生命周期的前期階段RNA的復(fù)制有抑制作用，能夠有效的抑制HBV復(fù)制。采用本發(fā)明方法可以比較簡便、有效和經(jīng)濟(jì)地大量初篩抗乙肝病毒(HBV)藥物。 |
| 國際公布 |
