| 公開(公告)號 | CN1869239A |
| 公開(公告)日 | 2006.11.29 |
| 申請(專利)號 | CN200610040766.8 |
| 申請日期 | 2006.06.01 |
| 專利名稱 | 一種融合蛋白的酵母表達(dá)載體及其基因工程產(chǎn)品 |
| 主分類號 | C12N15/81(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/81(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 南京農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 陳溥言;葛菲菲;邱亞峰;曹瑞兵;周 斌 |
| 地址 | 210095江蘇省南京市衛(wèi)崗1號南京農(nóng)業(yè)大學(xué)科技處錢寶英 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 |
| 代理人 | 樓高潮 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種融合蛋白的酵母表達(dá)載體，是通過以下方法獲得的： 1)設(shè)計(jì)引物： 上游引物p1：5’GAATTCATCCTCCTGCTGTTGGTC3’； 下游引物p2：5’GGATCCGAAGGGGTTCACTGTCAC3’； 以乙腦E蛋白基因?yàn)槟０�，通過PCR方法擴(kuò)增獲得乙腦E蛋白上主要抗原片段基因，E蛋白上主要抗原片段基因位于乙腦SA14-14-2毒株基因組的946nt-2058nt； 2)設(shè)計(jì)引物： 上游引物p1：5’GGATCCATGGCTCGTGCGGTCGGGATCGACC3’； 下游引物p2：5’TCTAGAAACTTGGCCTCCCGGCCGTCGTCG3’； 以人結(jié)核桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株的基因組為模板，PCR方法擴(kuò)增出M.T hsp70基因，M.T hsp70基因登錄號為X58406； 3)首先將E蛋白上主要抗原片段基因用酶切位點(diǎn)EcoR I和BamH I連接到pBluescript SK+質(zhì)粒中，然后將M. Thsp70基因用酶切位點(diǎn)BamH I和Xba I連接到pBluescript SK+質(zhì)粒中E蛋白主要抗原片段基因的下游，因此獲得將E蛋白主要抗原片段基因和M.T hsp70基因融合在pBluescript SK+上的載體SK-E-hsp70，再通過EcoR I和Xba I這兩個酶切位點(diǎn)將E蛋白主要抗原片段基因和M.T hsp70基因形成的融合基因切下來，隨后同樣通過EcoRI和Xba I這兩個酶切位點(diǎn)連接到畢赤酵母表達(dá)載體pPICZ α-A上，從而構(gòu)建成功融合酵母表達(dá)載體pPICZ α-E-hsp70。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種融合蛋白的酵母表達(dá)載體及其基因工程產(chǎn)品，屬于生物技術(shù)制藥工業(yè)中的基因工程生產(chǎn)疫苗藥物的技術(shù)領(lǐng)域。分別以乙腦E蛋白基因和人結(jié)核桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株的基因組為模板擴(kuò)增出E蛋白主要抗原片段基因和M.Thsp70基因，先將這兩個基因以一個酶切位點(diǎn)BamHI連接的方式克隆入pBluescript SK+質(zhì)粒中，最后將該融合基因克隆入pPICZ α-A中，構(gòu)建酵母表達(dá)載體pPICZ α-E-hsp70，按照說明書，該融合表達(dá)載體pPICZ α-E-hsp70線性化后，電轉(zhuǎn)化酵母菌，通過甲醇誘導(dǎo)表達(dá)，從而獲得融合蛋白E-hsp70，來開發(fā)研制相關(guān)的基因工程產(chǎn)品。 |
| 國際公布 |
