| 公開(公告)號 | CN1616482A |
| 公開(公告)日 | 2005.05.18 |
| 申請(專利)號 | CN200310106275.5 |
| 申請日期 | 2003.11.13 |
| 專利名稱 | 殘殺威人工抗原合成方法 |
| 主分類號 | C07K1/02 |
| 分類號 | C07K1/02;C07K14/00;G01N33/53;G01N33/531 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 南京農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 劉鳳權(quán);張奇 |
| 地址 | 210095江蘇省南京市衛(wèi)崗1號南京農(nóng)業(yè)大學(xué)科技處劉鳳權(quán) |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項 | 殘殺威人工抗原合成方法，包括：1)鄰-異丙氧基苯甲酰氯的合成：稱取雙光氣27.1g，加入0.138g活性碳，37℃水浴加熱，用50.0g甲苯收集光氣，甲苯液在24℃水浴中磁力攪拌，尾氣通入堿液，光氣劇毒，且氣味難聞，應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，至雙光氣反應(yīng)完，甲苯相增重24.0g，得34％光氣/甲苯溶液；稱取鄰-異丙氧基苯酚11.056g，溶進(jìn)100ml10％的NaOH水溶液，40℃水浴加熱磁力攪拌1小時，冷卻到室溫后緩慢加入上光氣/甲苯溶液，40分鐘加完，開始計時，4小時后結(jié)束反應(yīng)；取有機(jī)相減壓蒸餾得20.270g黃色油狀物；GC法測定目標(biāo)物的含量，5℃冰箱存放備用；2)γ-氨基丁酸(H殘)的合成：稱取間-甲基苯甲酰氯5.105g，溶進(jìn)4ml4MNaOH溶液，置5℃冰箱冷卻，得A液；稱取γ-丁胺酸2.102g，溶進(jìn)4ml4MNaOH溶液，置5℃冰箱冷卻，得B液；另取3ml4MNaOH溶液，置5℃冰箱冷卻，得C液；將A液與C液均分成5等份，每間隔5～10分鐘向B液中同時各加入1份，整個反應(yīng)置冰水中，磁力攪拌下進(jìn)行；加樣全部完成開始記時，3小時后結(jié)束反應(yīng)；用濃鹽酸調(diào)節(jié)反應(yīng)終液的pH值為4，目標(biāo)產(chǎn)物用乙酸乙酯3個50ml份抽提；乙酸乙酯相用稀HCl洗滌數(shù)次，用1MNaHCO3溶液2個50ml份抽提；水相再用濃鹽酸酸化，乙酸乙酯再抽提；無水Na2SO4干燥，所得物減壓蒸餾濃縮至13.8ml，向濃縮液中逐漸加入3lml正己烷，白色結(jié)晶物析出，過濾；結(jié)晶物經(jīng)低溫干燥得4.771g；再經(jīng)過甲苯與去離子水5℃下洗滌，干燥后稱重得到H殘結(jié)晶物3.626g；3)殘殺威人工抗原的合成：稱取H殘結(jié)晶物60mg和NHS30mg，用600μlDMF溶解于反應(yīng)裝置中；稱取55mgDCC，用600μlDMF溶解；將DCC/DMF溶液滴加到上反應(yīng)裝置中，反應(yīng)在磁力攪拌下室內(nèi)溫度進(jìn)行5小時，反應(yīng)終液置5℃冰箱冷卻2小時以上，經(jīng)1.2萬rpm離心5分鐘，取上清活潑酯液并將其均分為2等份，分別緩慢滴加到3.0ml10mg/ml的BSA溶液與3.0ml10mg/ml的OVA溶液中反應(yīng)，反應(yīng)緩沖液為0.2MpH8.0的PB液，反應(yīng)在磁力攪拌下室內(nèi)溫度進(jìn)行4小時，將反應(yīng)液置透析袋內(nèi)，于0.2MpH6.8的PB中4℃攪拌透析，每4小時換一次透析液，共透析60小時，透析結(jié)束后將透析袋中的殘殺威人工抗原白色乳狀液裝于若干1ml離心管中，于-20℃冰箱中存放備用。 |
| 摘要 | 本發(fā)明殘殺威人工抗原合成方法屬于有機(jī)化學(xué)及免疫學(xué)技術(shù)范疇。根據(jù)有機(jī)化學(xué)反應(yīng)的一般原理，合成殘殺威半抗原及抗原(包括包被抗原與免疫原)，方法，包括：鄰-異丙氧基苯甲酰氯的合成，γ-氨基丁酸(H殘)的合成；殘殺威人工抗原的合成，抗原于-20℃冰箱至少可以存放3年。此抗原具有穩(wěn)定性好、免疫原性較強(qiáng)等特點。此抗原可制備出高效價、高親和力的殘殺威抗體�？乖苽浼夹g(shù)簡便可行：抗原的整個制備過程無需要特別的儀器設(shè)備，成本低廉，容易工廠化規(guī)模生產(chǎn)。 |
| 國際公布 |
