| 公開(公告)號 | CN1160462C |
| 公開(公告)日 | 2004.08.04 |
| 申請(專利)號 | CN96195892.8 |
| 申請日期 | 1996.06.06 |
| 專利名稱 | 利用革蘭氏陽性菌表達(dá)重組蛋白質(zhì) |
| 主分類號 | C12N15/62 |
| 分類號 | C12N15/62;C12N15/31;C12N15/74;C07K14/315 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1995.6.7 US 08/472,244 |
| 申請(專利權(quán))人 | 洛克菲勒大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | A·達(dá)爾針?biāo)?S·懷特赫德;D·魯拜 |
| 地址 | 美國紐約州紐約 |
| 頒證日 | 2004.08.04 |
| 國際申請 | PCT/US1996/009965 1996.6.6 |
| 進(jìn)入國家日期 | 1998.01.25 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中國專利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 盧新華;姜建成 |
| 國省代碼 | 美國;US |
| 主權(quán)項 | 一種在革蘭氏陽性細(xì)菌中表達(dá)所需蛋白質(zhì)的方法，包括：選擇一種異源細(xì)菌宿主，此宿主是革蘭氏陽性菌，其胞外蛋白酶的產(chǎn)生缺陷，并能通過C-末端分選信號錨定表面蛋白；將質(zhì)粒載體導(dǎo)入宿主，此載體包含編碼革蘭氏陽性細(xì)胞壁表面蛋白氨基和羧基端分選序列和所需蛋白質(zhì)的DNA片段，以及在所選宿主中起作用的轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列；表達(dá)融合蛋白，此融合蛋白含所需蛋白、N-末端信號序列和C-末端分選序列，其中被表達(dá)的融合蛋白錨定于宿主細(xì)胞表面；使用蛋白酶從宿主細(xì)胞表面切割下被錨定的蛋白；和回收并純化切割下的蛋白。 |
| 摘要 | 一種用來在革蘭氏陽性菌中克隆和表達(dá)基因的新系統(tǒng)。此表達(dá)系統(tǒng)是基于如下發(fā)現(xiàn)：許多革蘭氏陽性菌通過順式作用N一末端信號序列和C-末端錨定區(qū)將蛋白分選至其細(xì)胞表面。具體而言，鏈球菌M6蛋白，一種熟知的表面分子，其細(xì)胞分選信號被用于構(gòu)建革蘭氏陽性表達(dá)系統(tǒng)，稱之為SPEX(鏈球菌蛋白表達(dá))。通過將目的基因克隆入合適的SPEX盒，然后將此盒穩(wěn)定導(dǎo)入細(xì)菌宿主如人共生格氏鏈球菌而實現(xiàn)表達(dá)。根據(jù)所用的SPEX載體，重組蛋白在由特定的內(nèi)切蛋白酶切割釋放之前可被錨定于細(xì)胞壁上或在細(xì)菌生長過程中被分泌入培養(yǎng)基中。使用缺失胞外蛋白酶的宿主細(xì)菌會保護(hù)分泌的蛋白不被蛋白酶降解。此系統(tǒng)中一些表達(dá)載體還生產(chǎn)被特異性標(biāo)記的重組蛋白，使所得產(chǎn)物可一步純化。 |
| 國際公布 | WO1996/040943 英 1996.12.19 |
