| 公開(公告)號 | CN1160452C |
| 公開(公告)日 | 2004.08.04 |
| 申請(專利)號 | CN01114286.3 |
| 申請日期 | 2001.06.15 |
| 專利名稱 | 一株重組廣譜蘇云金芽孢桿菌 |
| 主分類號 | C12N1/21 |
| 分類號 | C12N1/21;C12N1/20;C12N15/10;C12N15/87;C12N13/00;C12Q1/04;C12Q1/68;A01N63/00;//(C12N1/21,C12R1:07) |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國科學(xué)院武漢病毒研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 高梅影;彭可凡;戴順英 |
| 地址 | 430071 湖北省武漢市武昌小洪山 |
| 頒證日 | 2004.08.04 |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 武漢科宏專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 王敏峰 |
| 國省代碼 | 湖北;42 |
| 主權(quán)項 | 一株重組廣譜蘇云金芽孢桿菌LCJ-12(Bacillusthuringiensis LCJ-12)，其特征在于，該菌株具有如下特性：a、含有殺鱗翅目昆蟲的蘇云金芽孢桿菌殺蟲晶體蛋白質(zhì)基因cry1Ac和殺鞘翅目昆蟲的蘇云金芽孢桿菌殺蟲晶體蛋白質(zhì)基因cry3A，b、產(chǎn)生菱形和四方形兩種殺蟲晶體蛋白質(zhì)，c、可同時殺鱗翅目昆蟲和殺鞘翅目昆蟲，d、含有穿梭重組質(zhì)粒pHT304/1Ac10；該菌株由下列方法制備：a、采用保藏號為CCTCC NO：M 201003的菌株作為蘇云金芽孢桿菌的受體菌，該菌株含cry3A基因；采用pHT304/1Ac10重組質(zhì)粒，該重組質(zhì)粒含殺鱗翅目昆蟲的cry1Ac基因；b、在含有氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中接種含重組質(zhì)粒pHT304/1Ac10的大腸桿菌，35-37℃劇烈搖晃培養(yǎng)8-12小時，將細(xì)菌沉淀重懸于100μl用冰預(yù)冷的溶液I中，劇烈震蕩，加200μl溶液II；加150μl用冰預(yù)冷的溶液III，于4℃下12000g離心10分鐘，用等量酚-氯仿-異戊醇抽提上清液，用2倍體積上清液的乙醇于一20℃沉淀DNA，得到重組質(zhì)粒pHT304/1Ac10；c、將受體菌接種在LB培養(yǎng)基中，28-30℃搖動培養(yǎng)8-10小時后，冰浴20-30分鐘，在4℃下12000g離心10分鐘，先用電擊洗脫液洗兩次，再用電擊緩沖液洗一次，最后懸浮在電擊緩沖液中，得到受體菌電擊感受態(tài)細(xì)胞，置-20℃保存；d、將pHT304/1Ac10質(zhì)粒DNA與受體菌感受態(tài)細(xì)胞懸液充分混均，取200μl注入電擊轉(zhuǎn)化杯中，用E.coli Gene Pulser大腸桿菌電擊轉(zhuǎn)化儀在2.5KV下電擊一次，將電擊液轉(zhuǎn)入4mlLB培養(yǎng)基中，28-30℃振動培養(yǎng)2小時后，涂布于含紅霉素20μg/ml的LB平板上，28-30℃下培養(yǎng)3天；e、在20μg/ml的紅霉素抗性平板上挑選單個菌落，涂片鏡檢，選取具有蘇云金芽孢桿菌特征的菌落在紅霉素平板上傳代，以檢測其穩(wěn)定性，經(jīng)過二十代的遺傳傳代和毒力生物測定及PCR檢測，獲得毒力最高的并含有cry1Ac及cry3A基因的重組廣譜蘇云金芽孢桿菌，即為本發(fā)明的一株重組廣譜蘇云金芽孢桿菌LCJ-12。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種既殺鱗翅目又殺鞘翅目害蟲的廣譜重組蘇云金芽孢桿菌LCJ-12，該菌株具有穩(wěn)定高效且廣譜性的殺蟲效果，使用其制成的殺蟲劑具有多種殺蟲特性，節(jié)約了生產(chǎn)成本和使用成本，提高了經(jīng)濟(jì)價值，且對人、畜及其它動植物無害，不污染環(huán)境，具有良好的經(jīng)濟(jì)、生態(tài)效益，有著良好的推廣應(yīng)用前景。其急性毒性和生態(tài)安全性獲準(zhǔn)了農(nóng)業(yè)部遺傳工程體中試級安全性評價和野外釋放級安全性評價。 |
| 國際公布 |
