豬傳染性胸膜
肺炎放線桿菌病的初步分離鑒定與診治體會(huì)
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某養(yǎng)豬場突然暴發(fā)一種發(fā)病快、死亡率高的的豬病，經(jīng)
流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢病理、實(shí)驗(yàn)室微生物培養(yǎng)、生化試驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等診斷，確診為豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌病。經(jīng)藥物敏感性試驗(yàn)篩選的敏感藥物用于治療，效果顯著。1基本情況1.1發(fā)病情況四川省某豬場于2006年5月初從外地購得仔豬800余頭，在6月初，突然有2頭豬鼻孔流出帶血的分泌物而死亡。隨后豬群陸續(xù)出現(xiàn)精神沉郁、食欲廢絕、
咳嗽、體溫升高、腹式呼吸、呈"犬坐式"和鼻孔流出帶血的分泌物等主要癥狀。疫情已危及各個(gè)豬舍。筆者趕到現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)已經(jīng)死亡7頭，其余各豬舍均有不同數(shù)量的豬發(fā)生不同程度的咳嗽、呼吸困難等典型癥狀。從發(fā)病死亡到全群控制期間，共發(fā)病246余頭，死亡34余頭，發(fā)病率約為30%，死亡率為13.8%。1.2臨床癥狀:病豬體溫升高達(dá)41.9℃，咳嗽，噴嚏（有的病豬的鼻腔分泌物中含有血液)、食欲減退或廢絕。病豬不同程度的呼吸困難。頭、頸、耳尖四肢末端皮膚發(fā)紺。最后臥地不起，肌肉
抽搐，窒息而死，病程一般1～3d。有的豬還發(fā)出嘶啞的尖叫聲。1.3剖檢及病理變化:皮膚和黏膜發(fā)紺，皮下血管怒張，血液呈暗紅色；脾和腎臟無明顯肉眼可見變化；腹股溝淋巴結(jié)腫大、出血；空腸和回腸黏膜充血、出血，腸壁菲薄透明，腸道充氣，腸系膜淋巴結(jié)腫大和充血。本次疫病的特征性的剖檢變化在心臟、
肺臟及整個(gè)胸腔，表現(xiàn)為心臟和肺臟有明顯的纖維素性滲出物；
心包粘連，心包膜內(nèi)布滿灰黃色、干
酪樣滲出物；氣管和支氣管充滿帶血液的泡沫樣分泌物；肺充血、出血，呈暗紅色，切面多汁，有血色液體流出，肺與胸壁和縱膈粘連，胸壁常有出血點(diǎn)或出血斑。慢性病例常表現(xiàn)為肺臟有大小不等的壞死結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)處肺臟和胸壁粘連，切開結(jié)節(jié)有灰白色膿樣物流出。2細(xì)菌的分離鑒定2.1取病死豬氣管分泌物、肺臟、肝臟、腎臟等組織觸片，革蘭氏染色，鏡檢。2.2細(xì)菌的分離培養(yǎng):無菌取死亡豬的氣管分泌物、肺臟、肝臟、腎臟等病料，接種于含0.01%NAD的巧克力瓊脂平板,37℃需氧和厭氧培養(yǎng)24ｈ。對分離的APP菌株分別進(jìn)行革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)和染色特性。純培養(yǎng)后，以40%
甘油生理鹽水或20%脫脂牛奶于-70℃保存?zhèn)溆谩? 2.3細(xì)菌的病原特性試驗(yàn)2.3.1培養(yǎng)特性試驗(yàn):將分離菌株分別接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板、Ｓ.Ｓ.瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、TSA瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和
兔血瓊脂平板，37℃需氧和厭氧培養(yǎng)24 h、36 h、48h后,觀察不同培養(yǎng)基上分離株的生長情況。2.3.2生化特性試驗(yàn):分離菌株分別接種含有0.02% V因子的乳糖、果糖、
葡萄糖、
鼠李糖、甘露糖、
甘露醇、山梨醇、水楊苷、靛基質(zhì)、甲基紅、VP、硝酸鹽和
尿素酶等微量生化試管，37℃培養(yǎng)1~7d，觀察和記錄試驗(yàn)結(jié)果。2.3.3NAD生長試驗(yàn)將分離菌株分別接種于含有終濃度為0.01%的NAD和無NAD的普通營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h后,觀察試驗(yàn)結(jié)果。2.3.4溶血性試驗(yàn):將分離菌株分別接種于
兔血瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h,觀察溶血類型。2.4動(dòng)物實(shí)驗(yàn):將4頭健康豬隨機(jī)分為2組，每組2頭，其中第1組為試驗(yàn)組。第2組為對照組；實(shí)驗(yàn)豬分別滴鼻接種分離培養(yǎng)的細(xì)菌（5mL約100億個(gè))；對照組每頭豬滴鼻接種5 mL滅菌的生理鹽水，隔離飼養(yǎng)和觀察實(shí)驗(yàn)豬臨床癥狀，對實(shí)驗(yàn)豬死亡后進(jìn)行病理剖檢和觀察。同時(shí)對實(shí)驗(yàn)豬的病料進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)。3藥物敏感性試驗(yàn):取分離菌株的液體純培養(yǎng)物，均勻涂抹接種血瓊脂平板，用紙片法做藥敏試驗(yàn)。藥物分別為：
青霉素、
慶大霉素、卡那霉素、
四環(huán)素、
紅霉素、氟哌酸、恩諾沙星、復(fù)方新諾明、氟甲砜霉素。4結(jié)果4.1細(xì)菌的分離培養(yǎng)與病原學(xué)特性:直接將觸片革蘭氏染色后可以看到呈革蘭氏陰性，多形態(tài)的細(xì)菌,多為球桿菌、短桿菌、長桿菌,偶有成絲狀的細(xì)菌，著色不均。分離培養(yǎng)染色結(jié)果同直接觸片的染色結(jié)果；在普通營養(yǎng)瓊脂平板、Ｓ.Ｓ.瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板和普通營養(yǎng)瓊脂平板，37℃需氧和厭氧條件下培養(yǎng)24~96 h均不生長；在巧克力瓊脂平板和血瓊脂平板上均能長出透明、細(xì)小、米粒大小的圓形露珠樣黏液型菌落，菌落直徑約1~2 mm；在TSA營養(yǎng)瓊脂平板上長出乳白色1~2 mm大小菌落；在含有NAD的普通營養(yǎng)瓊脂平板上長出乳白色米粒大小的菌落。該菌可水解尿素酶，發(fā)酵乳糖、果糖、
葡萄糖產(chǎn)酸，水楊苷為遲緩發(fā)酵，不發(fā)酵甘露醇、山梨醇、鼠李糖及甘露糖。靛基質(zhì)、甲基紅、VP試驗(yàn)均為陰性。硝酸鹽還原試驗(yàn)陽性，生長需要NAD。在血瓊脂平板上呈現(xiàn)明顯的β型溶血。4.2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果:分離菌株接種實(shí)驗(yàn)豬后，第2天后體溫升高到40℃以上，后來逐漸形成耳、鼻、四肢、腹側(cè)等全身的皮膚充血和發(fā)紺。前期鼻孔流出血色黏液、后期為
鐵銹色黏液。持續(xù)9 d后后肢跛行，而后逐漸發(fā)展為后軀麻痹，體溫下降到35.0℃以下,最后呼吸困難而死。剖檢癥狀主要是肺大面積充血、出血和壞死，有的地方形成2~5 cm大小的硬結(jié)節(jié)，切開可見黑色的液體流出。整個(gè)肺的外膜和胸腔、膈肌、心包膜粘連，肺和胸腔、膈肌粘連處形成小腔，里面充滿黃褐色的液體，胸腔可見大量的纖維素滲出；肝臟腫大；腸壁和腸系膜充血，腸系膜淋巴結(jié)充血腫大；后肢膝關(guān)節(jié)、跗關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)和蹄關(guān)節(jié)均有腫大和含纖維素的黃色液體。整個(gè)后肢皮下與肌肉之間形成黃白色膠凍樣物質(zhì)。以上均為典型的豬傳染性胸膜肺炎癥狀，表明分離菌株對豬有致病性。分別在剖檢后用前面介紹的細(xì)菌分離培養(yǎng)方法，無菌取血液、鼻腔分泌物、肺組織、氣管、支氣管、扁
桃體等組織接種加NAD的兔血巧克力瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24 h均分離出接種的分離菌株。綜上所述，根據(jù)各項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果，查閱《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》（第8版)，確定分離到的1株細(xì)菌為豬胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumonia,APP)。4.3藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果:根據(jù)細(xì)菌抑菌圈直徑，高敏藥物有：氟甲砜霉素、氟哌酸、恩諾沙星；中敏藥物有紅霉素、四環(huán)素；低敏或無效的藥物有復(fù)方新諾明、卡那霉素、慶大霉素、青霉素。5防治5.1隔離病豬:將發(fā)病豬根據(jù)癥狀的輕重分別隔離,同時(shí)對沒有明顯癥狀,但與發(fā)病豬密切接觸的豬實(shí)行分別隔離，對環(huán)境及豬舍嚴(yán)格消毒；根據(jù)以往控制呼吸道疾病的經(jīng)驗(yàn)，將假定健康豬和發(fā)病的能吃飼料的豬全群按20~30mg/kg體重的劑量拌料飼喂氟甲砜霉素，發(fā)病的豬不吃飼料能飲水的采用將藥物加入飲水中口服，無飲食欲的病豬按20~30 mg/kg體重的劑量肌肉注射氟甲砜霉素的方法連續(xù)用藥3d。5.2環(huán)境消毒及凈化措施:豬舍走道、豬圈地面、墻壁、食槽等用具先用3％燒堿水噴灑，干燥后沖洗所有圈舍，然后再用3％燒堿水噴灑消毒。豬糞堆積發(fā)酵。藥敏試驗(yàn)結(jié)果出來后根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果繼續(xù)選用氟甲砜霉素注射液，按20~30 mg/kg體重的劑量肌肉注射發(fā)病豬，每天兩次，每次間隔8~12h，連用5d。減少各種應(yīng)激因素,加強(qiáng)飼養(yǎng)管理與減少工作人員的流動(dòng),盡量減少豬群的大量活動(dòng),對進(jìn)出本場的人員實(shí)行嚴(yán)格的消毒、更衣等制度,謝絕外來人員的參觀等活動(dòng),相對固定每棟豬舍的飼養(yǎng)員以及其他工作人員,對有明顯臨床癥狀的豬實(shí)行專人特別監(jiān)護(hù),其他無關(guān)人員不得隨意靠近，對死亡豬必須經(jīng)過深埋處理或焚燒處理，盡量將疫情控制在一個(gè)小的片區(qū)而最終在全場凈化。
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