一、癌胚抗原的特點
癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA)是分子量約20萬的糖蛋白，具有二級以上結(jié)構(gòu)。不同腫瘤中提取的CEA雖然抗原性相似，但所含唾液酸及其它糖組分的含量不一定相同，故有多個抗原決定簇，能與非特異性反應(yīng)抗原NCA、NCA-2和正常胎兒糞抗原等發(fā)生交叉反應(yīng)。NCA存在于正常肺、胰腺、粒細胞、單核細胞及巨噬細胞內(nèi)，也存在于正常腸粘膜、胃粘膜腸化生腺體細胞及膽汁內(nèi)。臨床血清學檢查CEA對結(jié)腸癌、肺癌、胰腺癌、胃癌及其它腺上皮性惡性腫瘤等的診斷有較大價值。免疫細胞化學研究可以明確CEA的定位和分布，也可以通過組織切片和分泌物涂片進行臨床診斷和鑒別診斷。
二、癌胚抗原的免疫細胞化學染色
1．組織加工有人提出用冰凍切片進行CEA免疫細胞化學染色。由于非特異性熒光和需要一定設(shè)備條件，有人改用福爾馬林固定和胰酶消化的方法。從我們的體會看，福爾馬林固定后的切片CEA的部分抗原決定簇被遮蓋，陽性結(jié)果顯著受到影響。但是用冷酒精固定后的組織切片，CEA的陽性率明顯升高，而且結(jié)果仍很清晰。goldenbery等同時進行CEA酶標記組織，而福爾馬林固定的組織切片中CEA檢出范圍為3.0～7.0ng/g組織，酒精固定的組織切片比福爾馬林固定者敏感2～3倍。有趣的是我們用酒精固定26個月的切片進行染色，效果仍然很好。說明冷酒精固定法便于進行回顧性研究。雖然酒精固定后組織收縮比較明顯，但不影響組織結(jié)構(gòu)及形態(tài)，而且可以進行多種抗原的定位研究，操作簡單，是值得推薦的一種組織固定方法。冷酒精固定方法和步驟同抗體產(chǎn)生細胞的研究。
2．染色方法的選擇根據(jù)實驗條件和抗體特點選擇染色方法。PAP和ABC技術(shù)可以采用，但試劑價格較昂貴，步驟較復雜。我們認為間接熒光或間接酶技術(shù)即可獲得滿意結(jié)果。間接酶染色技術(shù)步驟如下：
�。�1)冷酒精固定的組織石蠟包埋，組織切片，常規(guī)脫蠟后在PBS中放置5min，過一次蒸餾水清除玻片上的沉淀物后風干，加含3%H2O2甲醇一滴在切片上，放置20min后再PBS沖洗3次，過蒸餾水后風干。
�。�2)加稀釋好的兔抗CEA血清（稀釋度根據(jù)染色工作效價)在37℃濕盒內(nèi)放置45min。
（3)PBS清洗3次后風干，再加HRP標記物的羊抗兔IgG（稀釋度也要根據(jù)染色工作效價)，37℃濕盒內(nèi)放置45min。
�。�4)PBS清洗3次后加新鮮配制的含3%H2O2pH7.6Tris緩沖液（10ml溶液中含二氨基聯(lián)苯胺5mg)中暗處反應(yīng)5～8min（邊反應(yīng)邊在顯微鏡下觀察)，自來水沖洗，用1%甲基綠復染2～5min，再次自來水沖洗，常規(guī)脫水、透明和封片，在光鏡下觀察。醫(yī)學.全在線www.med126.com
3．陽性結(jié)果判斷及計數(shù)檢查前應(yīng)當對CEA的分布有一定理性認識，而且用正常結(jié)腸組織和陽性組織作對照觀察。CEA以三種形式出現(xiàn)在胃腸道組織切片中：①腔面分布。沿腺腔面的胞漿有棕紅色酶著色。這是胃粘膜中腸上皮化生腺體、高分化腺癌和正常結(jié)腸腺體的CEA分布形式。②胞漿分布。在低分化粘液細胞癌中，CEA多位于胞漿。③粘液分布。在高分化腺癌的腺腔和粘液細胞癌周圍的粘液中有CEA著色。
4．腹水免疫細胞化學染色臨床上鑒別良惡性腹水可采用免疫細胞化學技術(shù)。抽取200～300ml腹水，離心后取細胞沉淀進行直接涂片、干燥、酒精固定后采用間接熒光染色。具體的方法是：在腹水涂片上加兔抗CEA抗血清（1：25稀釋，稀釋液為BPS緩沖液)，在37℃濕盒內(nèi)放置45min后BPS沖洗，共10min，再加入FITC標記的羊抗兔IgG（1：20稀釋，稀釋液為0.1%伊文氏藍緩沖液)，在37℃濕盒內(nèi)放置45min后，PBS沖洗3次，共10min，用50%甘油封片，熒光顯微鏡觀察。有綠色熒光陽性細胞的片子再進行HE染色，做對照觀察和判斷。也可以將細胞沉淀物在試管內(nèi)直接進行間接熒光染色（方法同T淋巴細胞染色)。我們發(fā)現(xiàn)，不論采用哪種方法，都可能出現(xiàn)非特異性著色。少數(shù)淋巴細胞也能出現(xiàn)熒光或酶著色。其機理尚不清楚，如果采用伊文氏藍作對比熒光染色，可明顯減少非特異性熒光，而且淋巴細胞較小，腺癌細胞較大，有利于進行鑒別診斷。
三、臨床意義
免疫細胞化學技術(shù)可以確定CEA的組織發(fā)生部位，根據(jù)陽性特點可以判斷癌細胞的位置。我們的研究發(fā)現(xiàn)正常結(jié)腸組織CEA為弱陽性，多非常清晰分布在腔面。但結(jié)腸癌組織中CEA著色帶較寬，多為強陽性，而且不規(guī)整。對胃粘膜的研究發(fā)現(xiàn)正常胃腺體均為陰性，腸化生腺體細胞弱陽性。胃腺瘤細胞也含有CEA。70%以上胃癌細胞CEA強陽性，特別是粘液細胞癌，光鏡下癌細胞分散浸潤，無法確定其轉(zhuǎn)移及浸潤范圍。用免疫熒光或免疫酶技術(shù)進行染色，根據(jù)陽性細胞分布可作出正確判斷。在肝臟或其它部位轉(zhuǎn)移癌有時因細胞分化不良，無法確定其組織來源。如果用免疫細胞化學染色，發(fā)現(xiàn)CEA陽性細胞說明來源于腺上皮的癌腫，可能來自胃腸道或卵巢等組織。用胸腹水進行免疫細胞化學染色對臨床診斷有實用價值。Walts對26例腫瘤病人滲出液和抽吸液離心后做免疫酶染色，發(fā)現(xiàn)13例有CEA陽性細胞。11例常規(guī)細胞學檢查陰性的腫瘤病人發(fā)現(xiàn)8例胸腹水中有CEA陽性細胞。如果膽高CEA抗體的特異性，改進組織加工方法，排除非特異性著色，可望提高診斷價值。已經(jīng)有人在血清學監(jiān)測CEA診斷胃腸道腫瘤的基礎(chǔ)上，將CEA標記125I進行放射掃描定位診斷和用CEA標記131I或抗癌藥物進行腫瘤治療的報道。
