全血細(xì)胞培養(yǎng)染色體技術(shù)常用試劑配制

　　一、國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用試劑配制

　�。ㄒ�)培養(yǎng)液

　�。�1)RPMI1640培養(yǎng)液：稱取RPMI培養(yǎng)基9.8g，碳酸氫鈉1.9g、青霉素100u/ml，加雙蒸水至1000ml，調(diào)節(jié)　pH7.2～7.4無菌過濾凍存?zhèn)溆谩?/P>

　�。�2)小牛血清商品：成都生物制品廠。

　�。�3)植物凝集素（PHA)：自制或成品（重慶藥檢所)。

　　（4)pH調(diào)整液：5%NaHCO₃溶液高壓滅菌（8磅15min)，0.1N稀鹽酸液100ml。

　　（5)秋水仙素：10mg/ml無菌過濾高壓滅菌（8磅10min)。

　�。�6)磷酸緩沖液：pH7.4。

　　磷酸氫二鈉28.8g(H₂O)、磷酸二氫鉀2.67g(無水)，溶于1000ml雙蒸水中，加肝素，終濃度為100u/ml。

　�。�7)Giemsa染色液：

　　Giemsa粉劑　　　　　　　　　　　1g

　　甘油　　　　　　　　　　　　　　66ml

　　在研缽中，加入少量甘油油仔細(xì)研磨然后放甘油全部加磨，60℃溫箱中保溫2h，冷卻后加入甲醇66ml。裝入有色瓶中混合待用。染色時(shí)用pH7.4磷酸緩沖液稀釋10倍，隨配隨用。醫(yī).學(xué).全.在線.網(wǎng).站.提供

　�。ǘ�)固定液

　�。�1)甲酸：冰乙酸3：1混合即用。

　�。�2)PBS緩沖液配制：

　　NaCl　　 16g　　 Na₂HPO₄(12H₂O)　　5.65g

　　KCl　　　0.4g 　KH₂PO₄0.4g

　　加雙蒸水至1000ml pH7.0。

　　取5%胰酶（生理鹽水配制)1ml加入50ml PBS液中（最終濃度為0.025%)，4℃冰箱待用。

　　二、細(xì)胞培養(yǎng)（Bhatl B和McGee JOD,1990)

　　1．完全培養(yǎng)基

　　RPMI　　　　　　　　　　　　 76.0ml

　　胎牛血清 　　　　　　　　　　20.0ml

　　植物凝集素　　　　　　　　　　2.0ml

　　抗生素/抗菌素溶液（100×)　　1.0ml

　　L-谷氨酰胺（100×)　　　　　1.0ml

　　2.BudR(5’-Bromo-2-deoxyuridine, 5’-溴-2-脫氧尿嘧啶)溶解10mg/ml BudR于dH₂O中，0.2μm濾膜過濾除菌，分裝后-20℃儲(chǔ)存，BudR要在柔光（弱光)下操作。

　　3．胸腺嘧啶（Thymidine,Thd)　　按250μg/ml溶解于dH₂O中，過濾后分裝儲(chǔ)存于-20℃。

　　4．Colcemid(Sigma)　　5.0μg/ml溶于dH₂O中，過濾后分裝儲(chǔ)存于-20℃。

　　5．KCl（0.75mol/L)　　溶解560mg于100ml dH₂O中，新鮮配制37℃保存。

　　6．固定劑　　甲醇冰醋酸按3：1（V/V)混合即可，現(xiàn)用現(xiàn)配，置冰上待用。

　　7．缺口平移試劑盒（Amersham和BRL公司)

　　8．生物素7-dATP(BRL)

　　9.糖原（BRL)

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