抗體的制備

　�。ㄆ�)免疫失敗的可能原因及應(yīng)采取的措施

　　有時(shí)不能獲得滿意的抗血清，可從下列幾方面找原因，并改進(jìn)之。

　�。�1)免疫動(dòng)物的種屬及品系是否合適，可考慮改變動(dòng)物的種屬或品系，或擴(kuò)大免疫動(dòng)物的數(shù)量。

　�。�2)抗原質(zhì)量是否良好，可改用其它廠家的產(chǎn)品或改用同一廠家的其它批號(hào)，也可考慮改變抗原分子的部分結(jié)構(gòu)，或改進(jìn)提取方法。

　　（3)制備的免疫原是否符合要求，可從偶聯(lián)劑，載體、抗原或載體的比例、反應(yīng)時(shí)間等多方面去考慮，并加以改進(jìn)。

　�。�4)所用的佐劑是否合適，乳化是否完全，可改用其它佐劑，或加強(qiáng)乳化。

　�。�5)免疫的方法、劑量，加強(qiáng)免疫的間隔時(shí)間和次數(shù)，免疫的途徑是否合適。

　�。�6)動(dòng)物的飼養(yǎng)是否得當(dāng)，如營養(yǎng)（飼料、飲水)、環(huán)境衛(wèi)生（通風(fēng)、采光、溫度)是否符合要求，動(dòng)物的健康情況是否良好等。

　　二、單克隆抗體的制備

　　1975年Kohler和Milstein發(fā)現(xiàn)將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與和綿羊紅細(xì)胞免疫的小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行融合，形成的雜交瘤細(xì)胞既可產(chǎn)生抗體，又可無性繁殖，從而創(chuàng)立了單克隆抗體雜交瘤技術(shù)。這一技術(shù)上的突破使血清學(xué)的研究進(jìn)入了一個(gè)高度精確的新紀(jì)元。

　　免疫細(xì)胞化學(xué)的 技術(shù)關(guān)鍵之一是制備特異性強(qiáng)、親合力大、滴度高的特異性抗體，由于每種抗原都有幾個(gè)抗原決定簇，用它免疫動(dòng)物將產(chǎn)生對(duì)各個(gè)決定簇的抗體，即多克隆抗體。單克隆抗體則是由一個(gè)產(chǎn)生抗體的細(xì)胞與一個(gè)骨髓瘤細(xì)胞融合而形成的雜交廇細(xì)胞經(jīng)無性繁殖而來的細(xì)胞群所產(chǎn)生的，所以它的免疫球蛋白屬同一類型，質(zhì)地純一，而且它是針對(duì)某一抗原決定簇的，因此特異性強(qiáng)，親合性也一致。單克隆抗體（McAb)的特性和常規(guī)血清抗體的特性比較見2-3。

表2—3 單克隆抗體（McAb)和常規(guī)免疫血清抗體的特性比較

　　單克隆抗體的制備方法如下。

　　（一)動(dòng)物的選擇與免疫

　　1．動(dòng)物的選擇

　　純種BALB/C小鼠，較溫順，離窩的活動(dòng)范圍小，體弱，食量及排污較小，一般環(huán)境潔凈的實(shí)驗(yàn)室均能飼養(yǎng)成活。目前開展雜交瘤技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室多選用純種BALA/C小鼠。

　　2．免疫方案

　　選擇合適的免疫方案對(duì)于細(xì)胞融合雜交的成功，獲得高質(zhì)量的McAb至關(guān)重要。一般在融合前兩個(gè)月左右根據(jù)確立免疫方案開始初次免疫，免疫方案應(yīng)根據(jù)抗原的特性不同而定。

　�。�1)可溶性抗原免疫原性較弱，一般要加佐劑，半抗原應(yīng)先制備免疫原，再加佐劑。常用佐劑：福氏完全佐劑、福氏不完全佐劑。

　　初次免疫 抗原1～50μg加福氏完全佐劑皮下多點(diǎn)注射或脾內(nèi)注射（一般0.8～1ml,0.2ml/點(diǎn))

　　↓3周后

　　第二次免疫 劑量同上，加福氏不完全佐劑皮下或ip（腹腔內(nèi)注射)（ip劑量不宜超過0.5ml)

　　↓3周后

　　第三次免疫 劑量同一，不加佐劑，ip（5～7天后采血測其效價(jià))

　　↓2～3周

　　加強(qiáng)免疫，劑量50～500μg為宜，ip或iv（靜脈內(nèi)注射)

　　↓3天后

　　取脾融合

　　目前，用于可溶性抗原（特別是一些弱抗原)的免疫方案也不斷有所更新，如：①將可溶性抗原顆粒化或固相化，一方面增強(qiáng)了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改變抗原注入的途徑，基礎(chǔ)免疫可直接采用脾內(nèi)注射。③使用細(xì)胞因子作為佐劑，提高機(jī)體的免疫應(yīng)答水平，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對(duì)抗原的反應(yīng)性。

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