一、PCR應(yīng)用特點
1．操作簡便目前PCR技術(shù)采用耐高溫Taq DNA聚合酶，并且在有電腦控制的DNA擴(kuò)增儀中進(jìn)行，使操作大為簡化，一次加入的酶即可滿足反應(yīng)全過程。DNA擴(kuò)增儀能自動迅速升降溫度，只需把反應(yīng)所需的全部材料混勻，置入儀器內(nèi)，反應(yīng)便依所輸入的程序進(jìn)行。
2．省時應(yīng)用TaqDNA聚合酶時，單核苷酸摻入速率較高，75～80℃時，每個酶分子每秒鐘可完成150個核苷酸的合成。PCR每一周期需數(shù)分鐘，所以，一般常取用20～30個周期能使目的DNA達(dá)數(shù)到百萬倍擴(kuò)增的反應(yīng)只要數(shù)小時即可完成。在基因分離、突變體構(gòu)建、DNA測序等方面，PCR方法均較之常規(guī)法快速的多。例如，用常規(guī)方法建立cDNA庫或染色體DNA庫來分離基因，需花幾個月，用PCR方法只需1～2個月星期；用M13法構(gòu)建突變體需1～2個月，而PCR法只用數(shù)天；PCR方法擴(kuò)增的目的DNA片段可直接用作序列分析，較常用的通過克隆、培養(yǎng)擴(kuò)增、純化制備等步驟獲得測序片段更為簡便。
3．靈敏度高PCR產(chǎn)物的生成是以指數(shù)方式增加的，所以欲擴(kuò)增pg量級的起始物到μg水平或放大真核細(xì)胞單拷貝基因，通過PCR方法都是不難完成的。PCR方法可用單、雙倍體細(xì)胞、一根頭發(fā)、甚至單一精子進(jìn)行DNA定型。
4．特異性強(qiáng)作為引物的寡核苷酸與模板結(jié)合的正確性是決定反應(yīng)產(chǎn)物是否特異的關(guān)鍵。Taq DNA聚合酶耐高溫的性質(zhì)使反應(yīng)中引物與模板退火的步驟可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的目的片段也能保持很高的正確程度。
5．對原始材料質(zhì)量要求低由于PCR技術(shù)有較高的靈敏度和特異性，故僅含微量（pg,ng)的目的DNA的粗制品或者總RNA，就可以用做反應(yīng)起始材料來獲取目的產(chǎn)物。部分降解的DNA材料也可以通過PCR多次反應(yīng)周期，最終得到所需的全長DNA片段。
6．有一定程度的單核苷酸錯誤摻入由于Taq DNA聚合酶缺乏3’→5’核酸外切酶活性，因而不能糾正反應(yīng)中發(fā)生的錯誤的核苷酸摻入，標(biāo)準(zhǔn)條件下，其錯誤摻入率可達(dá)1.25×10-4～1×10-5。但是，這種錯誤并不意味著PCR產(chǎn)物一定會發(fā)生序列改變。Innis MA發(fā)現(xiàn)，錯誤摻入的堿基有終止鏈延伸的作用傾向，這就使得發(fā)生了的錯誤不會再擴(kuò)大。醫(yī)學(xué)全.在線提供
二、PCR應(yīng)用領(lǐng)域
單克隆抗體技術(shù)曾使免疫學(xué)理論與實踐有了新的突破，近幾年來PCR技術(shù)使分子生物學(xué)及相關(guān)學(xué)科發(fā)生了一次方法學(xué)的革命。在不到10年的時間內(nèi)，在以下幾個領(lǐng)域中PCR技術(shù)已具有實用價值，且其應(yīng)用范圍正在不斷擴(kuò)大中。
1．遺傳病的產(chǎn)前診斷 用胎兒羊膜細(xì)胞，羊水或甚至母血可以檢查胎兒的性別，這在與性染色體關(guān)聯(lián)遺傳病診斷中是必要的。對于高發(fā)的遺傳病，如地中海貧血、鐮刀狀細(xì)胞貧血、凝血因子缺乏、DMD等已在臨床應(yīng)用多年，為優(yōu)生優(yōu)育作了貢獻(xiàn)，對于有遺傳傾向的疾病尤其是老年性疾病，如糖尿病、高血脂癥、甚至腫瘤中的一部分，均是當(dāng)前研究的重點，近期內(nèi)可望有突破。
2．致病病原體的檢測 這些外源入侵的基因，一旦闡明其部分核酸序列，就可以設(shè)計引物或探針，用PCR、PT-PCR或雜交方法來檢測，其范圍包括細(xì)菌、病毒、原蟲及寄生蟲、霉菌、立克次體、衣原體和支原體等一切微生物，PCR診斷的特點是可以選擇其基因中的保守區(qū)作通用檢測，也可以選定差異較大的基因部位作分型檢測。既可以做一病原體的專用檢測，也可以將有關(guān)病毒、細(xì)菌中不同的品種作一次多元檢測。而且檢測的靈敏度和特異性都遠(yuǎn)高于當(dāng)前的免疫學(xué)方法，所需時間也已達(dá)到臨床要求，這對于難于培養(yǎng)的病毒（乙肝)，細(xì)菌（如結(jié)核、厭氧菌)和原蟲（如梅毒螺旋體)等來說尤為適用。
3．癌基因的檢測和診斷 雖然對癌基因的研究大部分還屬于基礎(chǔ)階段，但癌變是由基因變異所導(dǎo)致的這一基本事實已無庸置疑，所以癌基因、抗癌基因入抗轉(zhuǎn)移基因的研究，離開分子水平的診斷手段是無法進(jìn)行的，臨床上已可應(yīng)用的例子有白血病殘留細(xì)胞的定量（包括慢粒和急粒)，肺癌中P53及Rb等抗癌基因的失活，神經(jīng)質(zhì)瘤N-myc基因的激活和表達(dá)。通過原位雜交觀察特定癌基因及抗轉(zhuǎn)移基因的植入和反義寡核苷酸對強(qiáng)表達(dá)癌基因的阻斷均已成為近代基因治療的著眼點。
4．DNA指紋、個體識別、親子關(guān)系鑒別及法醫(yī)物證 這一為公、檢、法部分所矚目的課題已經(jīng)在某些國家取得法律認(rèn)可。肌紅蛋白小衛(wèi)星基因，β-珠蛋白基因、ApoB基因等的多肽性和重復(fù)次數(shù)的差異都被應(yīng)用于鑒定，其靈敏度已達(dá)到一根頭發(fā)、一個細(xì)胞、一個精子取得個體特征圖譜，這一領(lǐng)域也已發(fā)展到骨髓或臟器移植配型及動物種系的研究中。
5．動、植物檢疫 靈敏、特異、快速診斷檢測方法是我國進(jìn)出口口岸的門衛(wèi)，檢查出入國門的人員、動、植物（種畜、種籽)等是否攜帶烈性傳染�。ò�、動物病毒、植物病毒等)病原體，食品、飼料等是否帶沙門氏菌等均需要基因診斷手段將這些病菌拒之于國門之外，是提高我國綜合國力的必要保證。
6．高科技生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用 在轉(zhuǎn)基因動植物中檢查植入基因的存在。PCR技術(shù)尚可應(yīng)用于基因拼接、測序等領(lǐng)域。
