藥物分析-授課教案:第八章　雜環(huán)類藥物分析

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

重點(diǎn)介紹五類雜環(huán)藥物：即吡啶類中的尼可剎米、異煙肼和硝平地平等；喹啉類中的硫酸奎寧和奎尼丁、鹽酸環(huán)丙沙星等；托烷類中的硫酸阿托品和氫溴酸東莨菪堿等；吩噻嗪類中的氯丙嗪、異丙嗪、奮乃靜和鹽酸硫利達(dá)嗪等；苯駢二氮雜卓類中的地西泮、奧沙西泮和氯氮卓等。　　　　　　　　

第一節(jié)　吡啶類藥物的分析

一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

(一) 典型藥物的結(jié)構(gòu)

 (二) 主要化學(xué)性質(zhì)

1.弱堿性　母核吡啶環(huán)上有堿性氮原子，顯弱堿性。尼可剎米遇堿水解后，釋放出具有堿性的二乙胺，可以此進(jìn)行鑒別。

2.吡啶環(huán)的特性　含有吡啶環(huán)，可發(fā)生開環(huán)反應(yīng)（特性反應(yīng))。

3.還原性 異煙肼吡啶環(huán)γ位上被酰肼取代，酰肼基具有較強(qiáng)的還原性，并可與某些含羰基的試劑發(fā)生縮合反應(yīng)。

二、鑒別試驗(yàn)

(一) 吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)

1.戊烯二醛反應(yīng)（Konig反應(yīng))　當(dāng)溴化氰與芳香第一胺作用于吡啶環(huán)， 可形成戊烯二醛的有色西fo氏堿類（聚甲炔染料)。這一反應(yīng)不能由吡啶環(huán)單獨(dú)發(fā)生，而是在溴化氰加到吡啶環(huán)，使環(huán)上氮原子由3價(jià)轉(zhuǎn)變成5價(jià)時(shí)，吡啶環(huán)水解，形成戊烯二醛后再與芳香第一胺縮合而成。

　　本反應(yīng)適用于吡啶環(huán)α、α’位未取代，以及β或γ位為烷基或羧基的衍生物。異煙肼和尼可剎米均具有此反應(yīng)，而中國藥典只用于尼可剎米的鑒別，所用芳香第一胺為苯胺。

　　方法 取本品1滴，加水50ml，搖勻，分取2ml，加溴化氰試液2ml與2. 5 ％苯胺溶液3ml，搖勻，溶液漸顯黃色。

用于異煙肼鑒別時(shí)，應(yīng)先用高錳酸鉀或溴水氧化為異煙酸，再與溴化氰作用，然后再與芳香第一胺縮合形成有色的戊烯二醛衍生物。戊烯二醛衍生物的顏色隨所用芳香第一胺不同而有所不同，如與苯胺縮合形成黃至黃棕色；與聯(lián)苯胺則形成淡紅至紅色。

講授結(jié)合多媒體教學(xué)

復(fù)習(xí)舊課（3min)

作業(yè)解析(5min)

引入新課(2min)

2min，

異煙肼：4-吡啶甲酰肼

尼可剎米：N,N-二乙基-3-吡啶甲酰胺

硝平地平：2，6-二甲基 -4-（2-硝基苯基)-1，4-二氫-3，5-吡啶二甲酸二甲酯

6min

利用還原性，Ch.P(2005):溴酸鉀法測(cè)定異煙肼的含量。

7min

通過多媒體課件，結(jié)合各步化學(xué)反應(yīng)式進(jìn)行講解。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

　　尼可剎米、異煙肼和異煙腙等，需經(jīng)適當(dāng)處理，即將酰肼氧化成羧基或?qū)Ⅴ０匪�解為羧基后才有此反�?yīng)。中國藥典已用于異煙腙的鑒別。

　　用于異煙肼鑒別時(shí)，可取其乙醇溶液加入硼砂及5％2, 4-二硝基氯苯乙醇溶液，蒸干，繼續(xù)加熱10min，殘?jiān)�加甲醇攪拌后，即顯紫紅色。

若異煙肼不經(jīng)處理，則其酰肼基在乙醇溶液中，亦可與2, 4-二硝基氯苯反應(yīng)，生成2,4-二硝基苯肼衍生物，在堿性溶液中呈紫紅色。

(二) 形成沉淀的反應(yīng)

本類藥物具有吡啶環(huán)的結(jié)構(gòu)，可與重金屬鹽類（如氯化汞、硫酸銅)及苦味酸等試劑形成沉淀。如尼可剎米可與硫酸銅及硫氰酸銨作用生成草綠色配位化合物沉淀。

異煙肼、尼可剎米可與氯化汞形成白色沉淀。

(三)　酰肼基團(tuán)的反應(yīng)

1.還原反應(yīng)　

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

異煙肼與亞硒酸作用，可將其還原成紅色硒的沉淀。

中國藥典使用氨制硝酸銀試液。

  異煙肼  ChP（2005)

 【鑒別】 （2)取異煙肼約10 mg，置試管中，加水2 ml溶解后，加氨制硝酸銀試液1 m1，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。

2.縮合反應(yīng)　酰肼基與芳醛縮合形成腙，析出結(jié)晶，可測(cè)定其熔點(diǎn)。最常用的芳醛為香草醛，其次是對(duì)二甲氨基苯甲醛、水楊醛等與1,2－萘醌－4－磺酸在堿性介質(zhì)中可縮合顯紅色，凡具有－NH₂或活性－CH₂－基者均有此反應(yīng)。

異煙肼  ChP（2005)

 【鑒別】 （1)取本品約0.1 g，加水5 ml溶解后，加10％香草醛的乙醇溶液1 m1，搖勻，微熱，放冷，即析出黃色結(jié)晶，濾過，用稀乙醇重結(jié)晶，在105℃干燥后，測(cè)定熔點(diǎn)，其熔點(diǎn)為228～231℃，熔融時(shí)同時(shí)分解。

(四) 分解產(chǎn)物的反應(yīng)

(五) 紫外吸收光譜特征

三、有關(guān)物質(zhì)的檢查

(一) 異煙肼中游離肼的檢查

異煙肼是一種不穩(wěn)定的藥物，其中的游離肼是由制備時(shí)原料引入，或在貯存過程中降解而產(chǎn)生。而肼又是一種誘變劑和致癌物質(zhì)，因此國內(nèi)外藥典多數(shù)規(guī)定了異煙肼原料藥及其制劑中游離肼的限量檢查。常用的方法有薄層色譜法，比濁法和差示分光光度法。 

BP(1998)亦采用本法檢查“游離肼及有關(guān)物質(zhì)”。

2.比濁法

注意：

中國藥典使用氨制硝酸銀試液，注意其現(xiàn)象。

UV利用最大、最小吸收及百分吸收系數(shù)鑒別

10min

比濁法自學(xué)

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

3.差示分光光度法  利用游離肼與對(duì)-二甲氨基苯甲醛可形成黃色縮合產(chǎn)物(對(duì)-二甲氨基苯甲醛連氮)，于456nm波長(zhǎng)處有最大吸收；而異煙肼與上述試劑形成的縮合產(chǎn)物(對(duì)-二甲氨基芐叉)在此波長(zhǎng)處無吸收;根據(jù)這一性質(zhì)，同時(shí)運(yùn)用差示分光光度法,在參比溶液中加3%(V/V)的丙酮，可與肼生成無色的二甲基甲酮連氮，在456nm波長(zhǎng)處無吸收; 而異煙肼(干擾組分)生成的縮合物在456nm波長(zhǎng)處的吸收度與供試溶液(不含丙酮)的吸收度相等，即△A456nm為零，對(duì)游離肼測(cè)定無干擾。進(jìn)而，可在456nm波長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算二者的差示吸收度△A456nm，同時(shí)以對(duì)照品比較法計(jì)算游離肼含量。

參比溶液中丙酮含量在3%時(shí)，異煙肼(干擾組分)生成的縮合物在456nm波長(zhǎng)處的吸收度與供試溶液(不含丙酮)的吸收度相等，即△A456nm為零，對(duì)游離肼測(cè)定無干擾。若添加的丙酮量高于或低于3%時(shí)，均不能使異煙肼的△A456nm為零(圖8-2)。

測(cè)定方法如下：

對(duì)照品溶液的制備與測(cè)定

供試品溶液的制備與測(cè)定

(二) 尼可剎米中有關(guān)物質(zhì)檢查--TLC高低濃度對(duì)照法

(三)硝苯地平中有關(guān)物質(zhì)的檢查

15in,其中首先講解原理(5min)，再引入游離肼的差示分光光度法(10min)檢查。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

課間休息十分鐘

第二節(jié)  喹啉類藥物

一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)

(一)典型藥物的結(jié)構(gòu)

復(fù)習(xí)上節(jié)課內(nèi)容

3min

結(jié)構(gòu)講解2min，典型藥物講解5min。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

1、堿性  氮原子有堿性，與強(qiáng)酸成穩(wěn)定的鹽。

     喹核堿：含脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)，與硫酸成鹽

     喹啉環(huán)：芳環(huán)氮，堿性弱，不能與硫酸成鹽

2、旋光性  硫酸奎寧為左旋體，=-2370～-2440；

    硫酸奎尼丁為右旋體，=+2750～+2900

鹽酸環(huán)丙沙星無旋光性

3、熒光特性  硫酸奎寧和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均顯藍(lán)色熒光

  鹽酸環(huán)丙沙星無熒光

二、鑒別試驗(yàn)

(一)綠奎寧反應(yīng)(Thalleioquin)

奎寧和奎尼丁為6位含氧喹啉衍生物，可以發(fā)生綠奎寧反應(yīng)。

以6-羥基喹啉為例：經(jīng)氯水的氯化反應(yīng)，再以氨水處理，生成綠色的二醌基吲胺的銨鹽，即為綠奎寧反應(yīng)的基本機(jī)制。

如Ch.P(2005):

硫酸奎寧：

^{【鑒別】  (1) 取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光。}

^{(2) 取鑒別(1)項(xiàng)剩余的溶液5ml，加溴試液3滴與氨試液1ml ，即顯翠綠色。} 

^{硫酸奎尼丁：}

^{【鑒別】  (1) 取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光，加幾滴鹽酸，熒光即消失。} 

^{(2) 取上述溶液5ml ，加溴試液1 ～2 滴后，加氨試液1ml ，即顯翠綠色。}

結(jié)合化學(xué)結(jié)構(gòu)，在旋光性上注意觀察其立體結(jié)構(gòu)。

10min

10min

中國藥典采用此反應(yīng)鑒別奎寧和奎尼丁。給學(xué)生講解中國藥典的鑒別方法，加深理解。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

1、紫外吸收光譜特征  Ch.P(2005)用本法鑒別鹽酸環(huán)丙沙星。

^{【鑒別】  (2)取本品，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含8μg的溶液，照分光光度法(附錄Ⅳ A)測(cè)定，在277nm與315nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。}

^{2、熒光光譜特征}

^{硫酸奎寧   稀硫酸溶液}

   ^{藍(lán)色熒光}

^{硫酸奎尼丁} 

鹽酸環(huán)丙沙星 無熒光

3、紅外吸收光譜特征

   硫酸奎寧和鹽酸環(huán)丙沙星采用IR鑒別。

   硫酸奎尼丁  未用此法

4、無機(jī)酸鹽

   利用鑒別。

如：硫酸奎尼丁的鑒別

^{【鑒別】(3) 本品的水溶液顯硫酸鹽的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ)。}

^{三、特殊雜質(zhì)檢查} 

^{(一)硫酸奎寧中特殊雜質(zhì)檢查}

^{來源：中間體、副反應(yīng)產(chǎn)物}

^檢查：

^{酸度----控制酸性雜質(zhì)。}

^{三氯甲烷-乙醇中不溶物----控制醇中不溶性雜質(zhì)或無機(jī)鹽類。}

^{其他金雞納堿----采用高低濃度對(duì)比法控制其他生物堿。}

^{Ch.P(2005)中檢查項(xiàng)內(nèi)容}

^{(二)鹽酸環(huán)丙沙星中特殊雜質(zhì)檢查}

^{來源：生產(chǎn)、貯藏過程中引入。}

^檢查：

^{酸度----控制酸性雜質(zhì)。}

^{溶液的澄清度與顏色----控制水中不溶性物質(zhì)和有色雜質(zhì)。}

^{有關(guān)物質(zhì)----采用HPLC法中歸一化法控制引入的結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)雜質(zhì)。}

^{Ch.P(2005)中檢查項(xiàng)內(nèi)容}

5min

5min

問題討論(5min)；

作業(yè)和習(xí)題布置(2min)；

歸納總結(jié)(3min)

小 結(jié)

通過學(xué)習(xí)使學(xué)生掌握差示分光光度法的原理及應(yīng)用，熟悉吡啶類藥物的鑒別：吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)，酰肼基團(tuán)的反應(yīng)； 喹啉類藥物的鑒別試驗(yàn)，特殊雜質(zhì)檢查方法：  綠奎寧反應(yīng)

復(fù)習(xí)思考題

或

作 業(yè) 題

1、中國藥典采用何種方法檢查異煙肼中游離肼的檢查？如何檢查異煙肼中的游離肼？

2、差示分光光度法的原理？

3、硫酸奎寧、硫酸奎尼丁和鹽酸環(huán)丙沙星的主要化學(xué)性質(zhì)？

教 學(xué) 效 果

與 分 析

多媒體教學(xué)和板書相結(jié)合，并結(jié)合一定的實(shí)例，加深學(xué)生對(duì)知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)和了解。特別是通過問題討論，讓大家對(duì)所學(xué)知識(shí)進(jìn)行回顧、討論，建立一個(gè)互動(dòng)的教學(xué)氛圍。效果較好。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

第三節(jié)  托烷類藥物

本類藥物是由莨菪烷衍生的氨基醇與不同的有機(jī)酸縮合酯的生物堿，即雙環(huán)-1(R)、5(S)-托品烷系和有機(jī)酸，二者多在3-位結(jié)合成酯。常見的有顛茄生物堿和古柯生物堿。

母核

N-甲基-8-氮雜雙環(huán)[3,2,1]-3-辛醇

 (一)典型藥物的結(jié)構(gòu)

(二)主要化學(xué)性質(zhì)

1、水解性  具酯結(jié)構(gòu)，易水解。

  如：阿托品可水解成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)。

講授結(jié)合多媒體教學(xué)

復(fù)習(xí)舊課（3min)

作業(yè)解析(5min)

引入新課(2min)

注意立體結(jié)構(gòu)及其所含結(jié)晶水。即硫酸阿托品為一水合物，如在含量測(cè)定中要換算成一水硫酸阿托品的量(694.85/676.83)

5min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

3、旋光性

氫溴酸東莨菪堿   含不對(duì)稱碳原子，左旋體，比旋度-24^o～-27^o。

阿托品  含不對(duì)稱碳原子，消旋體，無旋光性。

二、鑒別試驗(yàn)

(一)托烷生物堿一般鑒別試驗(yàn)

Ch.P(2005) 附錄Ⅲ

鑒別方法：取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘?jiān)�，放冷，加乙�?～3滴濕潤，加固體氫氧化鈉一小粒，即顯深紫色。

(二)氧化反應(yīng)

水解產(chǎn)物莨菪酸，與硫酸和重鉻酸鉀在加熱的條件下，發(fā)生氧化反應(yīng)，生成苯甲醛(俗稱苦杏仁油)。

 (三)沉淀反應(yīng)

可與生物堿沉淀劑生成沉淀

阿托品+氯化汞醇   黃色沉淀

東莨菪堿+氯化汞醇   白色復(fù)鹽沉淀

10min

首先水解成莨菪酸，再硝酸處理。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

硫酸阿托品：

+ 白色沉淀不溶解

   +白色沉淀溶解

氫溴酸東莨菪堿：

   +

   +

三、氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質(zhì)的檢查

制法概要：

雜質(zhì)來源：生產(chǎn)和貯藏

檢查：

酸度----強(qiáng)酸弱堿鹽，5%水溶液，pH=4.0～5.5。

其他生物堿----①加氨試液，不得發(fā)生渾濁。否則，有阿撲阿托品、顛茄堿等其他生物堿。

②加氫氧化鉀試液，發(fā)生瞬即消失的類白色渾濁。(因加氫氧化鉀試液后，有東莨菪堿析出顯渾濁。但東莨菪堿在堿性條件下水解，生成異東莨菪堿醇和莨菪酸，前者在水中易溶；后者生成堿式鹽在水中也能溶解，故可使瞬即發(fā)生的渾濁消失。)

易氧化物----檢查阿撲阿托品及其他含有不飽和雙鍵的有機(jī)物質(zhì)等雜質(zhì)�？墒垢咤i酸鉀溶液褪色。

5min

雜質(zhì)來源：生產(chǎn)和貯藏

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)

(一)　結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與典型藥物

吩噻嗪類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有共同的硫氮雜蒽母核，基本結(jié)構(gòu)如下：

  結(jié)構(gòu)差異：母核2位上的R'取代基，通常為－H、－Cl、－CF₃、－COCH₃、－SCH₂CH₃等；10位上的R取代基，則為具有2-3個(gè)碳鏈的二甲或二乙胺基，或?yàn)楹�氮雜環(huán)如哌嗪和哌啶的衍生物等。

臨床上使用多為其鹽酸鹽，常用的吩噻嗪類典型藥物的結(jié)構(gòu)：

5min，強(qiáng)調(diào)取代基。

典型藥物的結(jié)構(gòu)。

5min。

鹽酸氯丙嗪：

N,N-二甲基 -2-氯-10H- 吩噻嗪-10-丙胺鹽酸鹽。

鹽酸異丙嗪：N,N,α－三甲基-10H- 吩噻嗪-10-乙胺鹽酸鹽

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

(二) 主要化學(xué)性質(zhì)

1.具有紫外和紅外吸收光譜特征  本類藥物的紫外特征吸收，主要由母核三環(huán)的π系統(tǒng)所產(chǎn)生。一般具有三個(gè)峰值，即在204nm～209nm（205nm附近)、250nm～265nm（254nm附近)、和300nm～325nm（300nm附近)。 最強(qiáng)峰多在250nm～265nm（ε為2.5×10⁴～3×10⁴)；兩個(gè)最小吸收峰則在220nm及280nm附近。

2.  10位上的取代基（R')不同，會(huì)引起吸收峰發(fā)生位移  例如2位上鹵素的取代（－Cl及－CF₃)可使吸收峰向紅移2nm～4nm，同時(shí)會(huì)使250nm～265nm區(qū)段的峰強(qiáng)度增大。R' 引起吸收峰位移，可能是通過對(duì)位效應(yīng)影響三環(huán)π系統(tǒng)的S，而間位效應(yīng)又影響三環(huán)π系統(tǒng)的N所發(fā)生的。因此，利用其紫外特征吸收可進(jìn)行本類藥物的鑒別。

本類藥物母核的硫?yàn)槎�價(jià)，易氧化，其氧化產(chǎn)物為亞砜及砜，與未取代的吩噻嗪母核的吸收光譜（見圖8-3 中 1)有明顯不同，它們具有四個(gè)峰值（見圖8-3 中 2,3)。因此，可以利用紫外吸收光譜的這些特征測(cè)定藥物中雜質(zhì)氧化物存在的量；同時(shí)也可在藥物含量測(cè)定時(shí)對(duì)氧化產(chǎn)物的干擾進(jìn)行校正。

鹽酸氟奮乃靜：

4-〔3-［2-（三氟甲基)-10H- 吩噻嗪-10-基］丙基］-1- 哌嗪乙醇二鹽酸鹽

10min

注意：吩噻嗪及其氧化產(chǎn)物的紫外光譜。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

4.與金屬離子絡(luò)合呈色　母核中未被氧化的S原子，可與金屬離子（如Pd²⁺)形成有色絡(luò)合物，其氧化產(chǎn)物砜和亞砜則無此反應(yīng)。利用此性質(zhì)可進(jìn)行鑒別和含量測(cè)定，并具有專屬性，可排除氧化產(chǎn)物的干擾。   

    課間休息十分鐘

二、鑒別試驗(yàn)

(一)　紫外特征吸收和紅外吸收光譜

表  吩噻嗪類藥物的紫外特征吸收鑒別實(shí)例

國藥典（2005年版)用IR鑒別的有：奮乃靜、癸奮乃靜、鹽酸三氟拉嗪和鹽酸二氧丙嗪等藥物。

5min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

　　1.氧化劑氧化顯色　吩噻嗪類藥物可被不同氧化劑如硫酸、硝酸、過氧化氫等氧化而呈色，反應(yīng)情況列于表8-4。

2.與鈀離子絡(luò)合顯色　吩噻嗪類藥物分子結(jié)構(gòu)中的未被氧化的二價(jià)Ｓ能與金屬鈀離子絡(luò)合形成有色絡(luò)合物，如與癸氟奮乃靜形成紅色的絡(luò)合物�！　�

癸氟奮乃靜  ChP（2005)

[鑒別] （2)取本品約 50mg，加甲醇2ml 溶解后，加 0.1% 氯化鈀溶液 3ml，即有沉淀生成，并顯紅色，再加過量的氯化鈀溶液，顏色變深。  

(三)分解產(chǎn)物的反應(yīng)

癸氟奮乃靜  Ch.P（2005)

3min

2min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

   除鹽酸氟奮乃靜未列此項(xiàng)檢查外，其余六種原料藥與其部分制劑均規(guī)定了該項(xiàng)檢查。

　 (一)　鹽酸異丙嗪合成工藝與雜質(zhì)的來源

　　 1.合成工藝

　　 2.雜質(zhì)的來源　異丙嗪合成過程中易產(chǎn)生以下副反應(yīng)：

10min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

(二)　檢查方法　

取本品，加二氯甲烷制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加二氯甲烷制成每1ml中含0.15mg和0.05mg的溶液，作為對(duì)照溶液(1)和(2)。吸取上述三種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF₂₅₄薄層板上，以己烷-丙酮-二乙胺(8.5:1:0.5)為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3個(gè)；其雜質(zhì)斑點(diǎn)與對(duì)照溶液(2)的主斑點(diǎn)比較，不得更深；如有一點(diǎn)超過，應(yīng)不得深于對(duì)照溶液(1)的主斑點(diǎn)。

　　注意點(diǎn)：①異丙嗪遇光不穩(wěn)定，上述檢查應(yīng)在避光條件下操作; ②溶液應(yīng)臨用時(shí)配制，否則雜質(zhì)斑點(diǎn)增多。

第五節(jié) 苯駢二氮雜卓類藥物

一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥物

苯駢二氮雜卓類藥物為含氮雜原子、六元和七元環(huán)并合而成的有機(jī)化合物，其中1,4-苯駢二氮雜卓類藥物是目前臨床應(yīng)用最廣泛的鎮(zhèn)靜劑。典型藥物的結(jié)構(gòu)為:

在不同pH介質(zhì)中形成不同的分子形式(H₂A⁺，HA，A^-)有關(guān), 在強(qiáng)酸性溶液中可水解。

5min

3min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

(一) 化學(xué)反應(yīng)

1. 沉淀反應(yīng)

2. 水解后呈芳伯胺反應(yīng)(重氮化-偶合反應(yīng)) 氯氮卓、艾司唑侖和奧沙西泮的鹽酸溶液(1→2)，緩緩加熱煮沸，放冷，加亞硝酸鈉和堿性β-萘酚試液，生成橙紅沉淀，而后者放置色漸變暗。

7min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

4. 分解產(chǎn)物的反應(yīng) 上述列舉的本類藥物均為有機(jī)氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，生成氯化氫，以5%氫氧化鈉溶液吸收，加硝酸酸化，顯氯化物反應(yīng)。中國藥典僅用于地西泮和三唑侖藥物的鑒別。

5. 氯化銅顏色反應(yīng)    

(二) 紫外和紅外吸收光譜

(三) 薄層色譜法

苯駢二氮雜卓類藥物發(fā)展很快，目前臨床應(yīng)用的品種不斷增多。由于本類藥物結(jié)構(gòu)相似，不易分離、鑒別，因此薄層色譜法常被用于本類藥物的系統(tǒng)鑒別。

1. 常用的五種苯駢二氮雜卓類藥物的TLC法

2. 酸水解產(chǎn)物的TLC法

三、特殊雜質(zhì)檢查

苯駢二氮雜卓類藥物由于生產(chǎn)工藝過程或貯藏期間出現(xiàn)分解，致使藥物中存在中間體、副產(chǎn)物等雜質(zhì)(有關(guān)物質(zhì))和降解產(chǎn)物。目前國內(nèi)外藥典多采用薄層色譜法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物的檢查。而用高效液相色譜法，檢查本類藥物質(zhì)量的報(bào)道，也在逐年增多。

   (一)有關(guān)物質(zhì)檢查

中國藥典收載的八種本類藥物，除氯氮卓外，其余均作此項(xiàng)檢查。

方法：三唑侖用氣相色譜，其余用薄層色譜。

說明：Ch.P采用“溶液的澄清度”檢查來控制氯氮卓中中間體等水中不溶性雜質(zhì)。

USP(24)和BP(2000)對(duì)氯氮卓作此項(xiàng)檢查。

方法：薄層色譜法

5min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

來源：合成過程中的副反應(yīng)。

雜質(zhì)：N-去甲基苯甲二氯氮卓及化學(xué)結(jié)構(gòu)不明的有關(guān)物質(zhì)。

方法：TLC  高低濃度對(duì)比法

Ch.P(2005)：

^{有關(guān)物質(zhì)  取本品，加丙酮制成每1ml 中含100mg 的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加丙酮稀釋成每1ml 中含0.3mg 的溶液，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅴ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μg，分別點(diǎn)于同一硅膠ＧＦ254 薄層板上，以醋酸乙酯－己烷(1:1) 為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm) 下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。} 

2、氯氮卓中的關(guān)物質(zhì)的檢查

USP(24)：

有關(guān)物質(zhì)：中間體—氧化物

分解產(chǎn)物－氨基物

方法：TLC  對(duì)照品法  BP(2000)：

   方法：TLC  高低濃度對(duì)比法   ^{Ch.P(2005)：}

采用“溶液的澄清度”檢查來控制氯氮卓中中間體等水中不溶性雜質(zhì)。

^{【檢查】  溶液的澄清度  取本品0.50g,加鹽酸溶液(9→200)25ml，振搖使溶解，溶液應(yīng)澄清；如發(fā)生渾濁，與對(duì)照液（取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液10ml，加5 ％碳酸氫鈉溶液1ml,混勻，再加水14ml) 比較，不得更濃。}  

(二)降解產(chǎn)物的檢查

 地西泮注射液列入此項(xiàng)檢查。

 雜質(zhì)來源：貯藏過程中分解產(chǎn)物2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮

^【檢查】

^{分解產(chǎn)物  取本品，加甲醇分別制成每1ml 中含1mg 的供試品溶液和每1ml 中含5靏的對(duì)照溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，取對(duì)照溶液10μl 注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為記錄儀滿量程的10％；再準(zhǔn)確量取上述兩種溶液各10μl 分別進(jìn)樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的4 倍，供試品溶液的色譜圖中主成分峰之后如顯示雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積的和，不得大于對(duì)照溶液主成分峰的峰面積。}

^{【含量測(cè)定】  照高效液相色譜法（附錄Ⅴ D)測(cè)定。}  

^{色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)  用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇－水(70:30)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm 。理論板數(shù)按地西泮峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，地西泮峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。}

問題討論(5min)；

作業(yè)和習(xí)題布置(2min)；

歸納總結(jié)(3min)

小 結(jié)

通過學(xué)習(xí)，使學(xué)生熟悉托烷類、吩噻嗪類、苯駢二氮雜卓類藥物的基本結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)，鑒別試驗(yàn)和檢查方法。

復(fù)習(xí)思考題

或

作 業(yè) 題

1、如何區(qū)別硫酸阿托品與氫溴酸東莨菪堿？

2、在氫溴酸東莨菪堿的特殊雜質(zhì)檢查中，為什么會(huì)發(fā)生瞬即消失的類白色渾濁？

3、吩噻嗪與其氧化產(chǎn)物的紫外吸收光譜有何不同？

4、托烷類、吩噻秦類、苯并二氮雜卓類藥物分別有哪些鑒別方法？

教 學(xué) 效 果

與 分 析

多媒體教學(xué)和板書相結(jié)合，并結(jié)合一定的實(shí)例，加深學(xué)生對(duì)知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)和了解。特別是通過問題討論，讓大家對(duì)所學(xué)知識(shí)進(jìn)行回故、討論，建立一個(gè)互動(dòng)的教學(xué)氛圍。效果較好。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

一、非水溶液滴定法

(一)機(jī)理

是指在非水溶劑(有機(jī)溶劑與不含水的無機(jī)溶劑)中進(jìn)行滴定分析的方法。

以非水溶劑作為滴定介質(zhì)，不僅能增大有機(jī)化合物的溶解度，而且能改變物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)(如酸堿度及其強(qiáng)度)，使在水中不能進(jìn)行完全的滴定反應(yīng)能夠順利進(jìn)行，從而擴(kuò)大了滴定分析的應(yīng)用范圍。

由于本類藥物多為弱堿性，在水溶液中用標(biāo)準(zhǔn)酸直接滴定沒有明顯的突躍，終點(diǎn)難以觀測(cè)，常不能獲得滿意的測(cè)定結(jié)果。而在非水酸性介質(zhì)中，只要在水溶液中的K_b值大于10^-10,都能被冰醋酸均化到溶劑AC^-水平，堿強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，因而使弱堿性藥物的滴定能順利進(jìn)行。

溶劑只起到傳遞質(zhì)子的作用，其本身未起變化。

醋酸合質(zhì)子和醋酸陰離子發(fā)生以下反應(yīng)：

  當(dāng)時(shí)，溶液呈中性，即為化學(xué)計(jì)量點(diǎn)。

整個(gè)滴定反應(yīng)：

因此酸性溶劑是堿的均化性溶劑，對(duì)于在水中不能滴定的某些弱堿，選用酸性溶劑(如HAc)使堿性均化到溶劑陰離子(如Ac^-)的強(qiáng)度水平后，可用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液(如高氯酸)進(jìn)行滴定。

本章藥物除尼可剎米、地西泮和氯氮卓等，以游離堿的形式供分析外，多數(shù)為鹽酸鹽和硫酸鹽。這些鹽類的滴定過程，實(shí)際上是一個(gè)置換滴定，即強(qiáng)酸滴定液置換出與游離堿結(jié)合的較弱的酸。其反應(yīng)原理：

 式中表示游離堿類鹽；HA表示被置換出的弱酸。

 (二)一般方法

取樣量：以消耗標(biāo)準(zhǔn)液約8ml為度

溶劑：冰醋酸10ml～30ml

試劑：5%Hg(Ac)₂ 3ml～5ml  氫鹵酸鹽時(shí)加入

指示劑：結(jié)晶紫

復(fù)習(xí)舊課（3min)；

作業(yè)解析(5min)；

引入新課(2min)；

機(jī)理：5min

一般方法及問題討論5min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

1、適用范圍  用于K_b<10^-8的有機(jī)堿鹽及有機(jī)酸堿金屬鹽類的含量測(cè)定

  若K_b為： 10^-8～10^-10，冰醋酸為溶劑；

   10^-10～10^-12，冰醋酸與醋酐的混合溶液為溶劑；

<10^-12， 醋酐為溶劑。

  醋酐離解生成的醋酐合乙酰陽離子(CH₃CO)₃O⁺比冰醋酸中的醋酸合質(zhì)子H₂Ac⁺的酸性更強(qiáng)，因而在醋酐中有更明顯的滴定突躍。

 2、酸根的影響  本類藥物鹽中被置換出的無機(jī)酸類，在酸性介質(zhì)中的酸性以下列排序遞減：

高氯酸>氫溴酸>硫酸>鹽酸>硝酸

①若被置換出來的HA酸性較強(qiáng)，則反應(yīng)不能進(jìn)行到底，影響滴定終點(diǎn)，需進(jìn)行處理。

方法：加入定量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其生成在醋酸中難解離的鹵化汞，以消除氫鹵酸對(duì)滴定的干擾與不良影響。

2B·HX+Hg(Ac)₂→2B·Ac + HgX₂

  ↓

  和溶劑相同，不影響滴定

②Hg(Ac)₂量不足，影響滴定終點(diǎn)，使測(cè)定結(jié)果偏低；

過量的Hg(Ac)₂(1～3倍)， 不影響測(cè)定結(jié)果。

3、滴定劑的穩(wěn)定性 醋酸具揮發(fā)性，膨脹系數(shù)較大，溫度和貯藏條件影響滴定劑的濃度。

①滴定樣品時(shí)與標(biāo)定高氯酸溶液時(shí)的溫差≤10℃，校正：

   式中：0.0011為冰醋酸的體積膨脹系數(shù)，t₀為標(biāo)定時(shí)的溫度，c為滴定時(shí)的溫度，N₀為t₀時(shí)高氯酸滴定液的濃度，N₁為t₁時(shí)高氯酸滴定液的濃度。

②滴定樣品時(shí)與標(biāo)定高氯酸溶液時(shí)的溫差>10℃，重新標(biāo)定。

4、終點(diǎn)指示方法  電位法和指示劑法(多用，結(jié)晶紫指示劑)。

(四)應(yīng)用實(shí)例

1、游離弱堿性藥物的測(cè)定 

藥物：吡啶類、苯并二氮雜卓類，如：異煙肼、尼可剎米、地西泮及氯氮卓。

測(cè)定方法：直接測(cè)定。   

應(yīng)用實(shí)例30min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

例：Ch.P(2005)尼可剎米的含量測(cè)定：

^{【含量測(cè)定】  取本品約0.15g ，精密稱定，加冰醋酸10ml與結(jié)晶紫指示液1 滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml 的高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于17.82mg 的C10H14N2O 。}  

2、氫鹵酸鹽類藥物測(cè)定 

藥物：吩噻嗪類、喹啉類、托烷類藥物，如：鹽酸氯丙嗪、鹽酸環(huán)丙沙星、氫溴酸東莨菪堿。

測(cè)定方法：加入過量Hg(Ac)₂，再用高氯酸滴定液滴定。

   表  氫鹵酸鹽類藥物測(cè)定方法 

例：Ch.P(2005)鹽酸氯丙嗪的含量測(cè)定：

^{【含量測(cè)定】  取本品約0.2g，精密稱定，加醋酐10ml，振搖溶解后，加醋酸汞試液5ml 與橙黃Ⅳ指示液1 滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液顯玫瑰紅色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml 高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于35.53mg 的C17H19ClN2S.HCl 。}  

3、硫酸鹽類藥物測(cè)定 

藥物：在非水介質(zhì)中，只顯示一元酸解離為，即只供給一個(gè)H⁺，所以硫酸鹽類藥物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氫鹽，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。   

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

阿托品為堿性較強(qiáng)的一元堿藥物，其硫酸鹽簡(jiǎn)寫：，用高氯酸直接滴定時(shí)的反應(yīng)式為：

因此，可根據(jù)1mol的硫酸阿托品消耗1mol高氯酸的關(guān)系計(jì)算其含量。

Ch.P(2005)中硫酸阿托品的含量測(cè)定：

^{【含量測(cè)定】  取本品約0.5g，精密稱定，加冰醋酸與醋酐各10ml溶解后，加結(jié)晶紫指示液1 ～2 滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯純藍(lán)色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于67.68mg 的(C17H23NO3)2.H2SO4。}  

^{(2) 硫酸奎寧測(cè)定：}

^{奎寧為二元堿，  喹核堿：堿性強(qiáng)，與硫酸成鹽}

^{喹啉堿：堿性弱，游離}  

當(dāng)用高氯酸直接測(cè)定硫酸奎寧時(shí)，1mol的硫酸奎寧消耗3mol的高氯酸：

(C₂₀H₂₄N₂·H⁺)₂SO₄+3HCIO₄→

(C₂₀H₂₄N₂·2H⁺)·2CIO₄^-+(C₂₀H₂₄N₂·2H⁺)·HSO₄^-·CIO₄^-

中國藥典和USP(24)都采用此法測(cè)定硫酸奎寧和硫酸奎尼丁的含量。 

 Ch.P(2005)中硫酸奎寧的含量測(cè)定：

^{【含量測(cè)定】  取本品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml 與結(jié)晶紫指示液1～2滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于24.90mg的(C20H24N2O2)2.H2SO4。}

 ^{(3)硫酸奎寧片的含量測(cè)定：}

^{硫酸奎寧片堿化處理，生成奎寧游離堿，然后再用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定。此時(shí)，1mol的硫酸奎寧可消耗4mol的高氯酸。片劑分析的滴定度與原料藥的滴定度不同。}

^{Ch.P(2005)中硫酸奎寧片的含量測(cè)定：}

^{【含量測(cè)定】　取本品10片，除去糖衣后，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于硫酸奎寧0.3g)，置分液漏斗中，加氯化鈉0.5g與0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，混勻，精密加三氯甲烷50ml，振搖10分鐘，靜置，分取三氯甲烷液，用干燥濾紙濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，加醋酐5ml 與二甲基黃指示液2 滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液顯玫瑰紅色,并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于19.57mg 的(C20H24N2O2)2.H2SO4.2H2O。}  

藥物為脂溶性，用三氯甲烷提取出藥物，再測(cè)定。否則片劑中的硬脂酸鎂可被高氯酸滴定，干擾測(cè)定。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

5、磷酸鹽與有機(jī)酸鹽  按常規(guī)方法直接滴定。

    課間休息十分鐘

  二、鈰量法

利用藥物具有還原性，在酸性介質(zhì)中可以用硫酸鈰滴定液直接滴定。

硝苯地平   鄰二氮菲指示劑指示終點(diǎn) 

吩噻嗪類   藥物自身的顏色變化指示終點(diǎn)；或采用電位法或永停法指示終點(diǎn)。

(一)硝苯地平的含量測(cè)定

終點(diǎn)時(shí)，微過量的Ce⁴⁺將指示劑中的Fe²⁺氧化成Fe³⁺，使橙紅色配合物離子呈淡藍(lán)色或無色配位化合物離子，以指示終點(diǎn)的到達(dá)。

Ch.P(2005)硝苯地平的含量測(cè)定：

^{【含量測(cè)定】  取本品約0.4g，精密稱定，加無水乙醇50ml，微熱使溶解，加高氯酸溶液（取70％高氯酸8.5ml ，加水至100ml )50ml、鄰二氮菲指示液3 滴，立即用硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，在水浴中加熱至50℃左右，繼續(xù)緩緩滴定至橙紅色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于17.32mg 的C17H18N2O6。}

(二)吩噻嗪類藥物的測(cè)定

1、基本原理  利用吩噻嗪類藥物被硫酸鈰滴定時(shí)，先失去一個(gè)電子形成一種紅色的自由離子，達(dá)到化學(xué)計(jì)量點(diǎn)，溶液中的吩噻嗪類藥物均失去兩個(gè)電子，而紅色消褪，借以指示終點(diǎn)。

15min,其中原理5min，實(shí)例10min.

鄰二氮菲指示劑：^{鄰二氮菲指示液  取硫酸亞鐵0.5g,加水100ml使溶解，加硫酸2滴與鄰二氮菲0.5g,搖勻，即得。本液應(yīng)臨用新制。}

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

硫酸鈰的優(yōu)點(diǎn)：有較高的氧化電位，且為一價(jià)還原，同時(shí)不存在對(duì)環(huán)取代基的副反應(yīng)。

如：鹽酸氯丙嗪及其片劑的測(cè)定(非藥典收載方法)。

三、比色法

(一)酸性染料比色法

方法：利用某些酸性染料，如磺酸酞類指示劑，在一定pH條件下，可與堿性藥物結(jié)合呈色，然后采用比色法測(cè)定其含量。

應(yīng)用：適于少量供試品，小劑量藥物及其制劑，或生物體內(nèi)堿性藥物的定量分析。

1、基本原理

在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中，堿性藥物(B)可與氫離子結(jié)合成陽離子(BH⁺)，而一些酸性染料，如溴百里酚藍(lán)、溴酚藍(lán)、溴甲酚紫和溴甲酚綠等，可解離成陰離子(In^-)。上述陽離子與陰離子定量地結(jié)合成有色絡(luò)合物(BH⁺In^-)離子對(duì)，可以定量地被有機(jī)溶劑提取，在一定波長(zhǎng)處測(cè)定該溶液有色離子對(duì)的吸收度，即可計(jì)算出堿性藥物的含量。 

  2、影響因素 

(1)水相最佳pH值的選擇

最佳pH：

選擇方法：

根據(jù)有機(jī)藥物和酸性染料的pK值，以兩相分配系數(shù)而定。  

比色法35min，其中，酸性染料比色法原理10min，影響因素15min，實(shí)例10min;

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

選擇要求：

①與有機(jī)堿藥物定量結(jié)合，生成的離子對(duì)在有機(jī)相中溶解度大。

②染料在有機(jī)溶劑中不溶或很少溶解。

③生成的離子對(duì)，于其最大吸收波長(zhǎng)處有較高的吸收度。

常用酸性染料：①溴麝香草酚藍(lán)、甲基橙、溴甲酚綠。

②托烷類含量測(cè)定，選溴甲酚綠(Ch.P)。

  濃度：不能太高，否則易產(chǎn)生乳化層，影響測(cè)定結(jié)果。

(3)有機(jī)溶劑的選擇

  選擇要求：提取率高；不與水混溶；或能與離子對(duì)形成氫鍵。

  常用：氯仿(三氯甲烷)、二氯甲烷、苯、四氯化碳等。

(4)水分的影響

在提取過程中，嚴(yán)防水分混入有機(jī)溶劑中。

  ①水相中有過量的酸性染料，影響測(cè)定結(jié)果；

②水分的混入使氯仿混濁，影響比色測(cè)定。

控制水分方法：脫水劑，或經(jīng)濾紙過濾。

酸性染料中雜質(zhì)的去除：用所選用的有機(jī)溶劑提取，除去雜質(zhì)。

3、應(yīng)用示例

氫溴酸東莨菪堿片[Ch.P(2005)](原料采用非水滴定，注射液同片劑)

^{【含量測(cè)定】  對(duì)照品溶液的制備  精密稱取氫溴酸東莨菪堿對(duì)照品30mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml ，置100ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。}    

^{供試品溶液的制備  取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于氫溴酸東莨菪堿3mg )，置50ml量瓶中，加水使氫溴酸東莨菪堿溶解并稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液，即得。}  

^{測(cè)定法  精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2ml ，分別置預(yù)先精密加入氯仿10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液〔取溴甲酚綠50mg與鄰苯二甲酸氫鉀1.021g，加0.2mol/L)鹽酸溶液1.6ml使溶解后，加水稀釋成100ml ，必要時(shí)濾過〕4.0ml,振搖提取后，靜置使分層；分取氯仿液，照分光光度法（附錄Ⅳ B)，在420nm 的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，計(jì)算，并將結(jié)果與1.141 相乘，即得供試量中含有C17H21NO4.HBr.3H2O 的重量。}

注：此法測(cè)定結(jié)果偏低，因片劑所含賦形劑有不同程度的干擾吸附。

課間休息十分鐘

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

利用吩噻嗪類藥物，在適當(dāng)pH值溶液中可與金屬鈀離子形成有色絡(luò)合物，借以進(jìn)行比色測(cè)定。

注：本法可選擇性地用于未被氧化的吩噻嗪類藥物的測(cè)定。因?yàn)殁Z離子只與未被氧化的硫共價(jià)，當(dāng)硫原子已被氧化為亞砜或砜時(shí)，則不與鈀離子呈色，因此可利用空白試驗(yàn)對(duì)照方法，消除本類藥物中的氯化物的干擾。

如：鹽酸氯丙嗪的含量測(cè)定(此法藥典未收載)

四、紫外分光光度法

(一)直接分光光度法

供試品不需分離，溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲屑纯蛇M(jìn)行含量測(cè)定。

1、奧沙西泮的測(cè)定

對(duì)照品法

2、鹽酸異丙嗪片的測(cè)定

百分吸收系數(shù)法

3、鹽酸異丙嗪注射液的測(cè)定

百分吸收系數(shù)法

(二)萃取后分光光度法

優(yōu)點(diǎn)：消除注射液中添加的亞硫酸鈉和維生素C抗氧劑的干擾。

不足：被測(cè)組分兩次提取易損失，致使測(cè)定精密度不高，準(zhǔn)確度較差。

如：鹽酸氯丙嗪的測(cè)定

鈀離子比色法自學(xué)。

2min

3min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

   兩次萃取，分離其他組分，消除干擾。

2測(cè)定方法  精密量取本品適量(約相當(dāng)于鹽酸氯丙嗪100mg)，以鹽酸液(0.1mol/L)稀釋至500ml。分取上述溶液5ml，置分液漏斗中，加水20ml，加氨水呈堿性，用乙醚振搖提取4次，每次25ml。合并乙醚液，用水洗滌2次，每次10ml，合并洗液，用乙醚20ml提取，棄去洗液。合并前后兩次得到的乙醚液，分四次用鹽酸液(0.1mol/L)萃取，每次25ml。合并酸液，并稀釋成0.0005%濃度的溶液。以鹽酸液(0.1mol/L)作空白，用分光光度計(jì)在254±1nm波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定，以鹽酸氯丙嗪為915，計(jì)算供試品中鹽酸氯丙嗪的量，即得。

(三)萃取-雙波長(zhǎng)分光光度法

USP(24)用于鹽酸氯丙嗪注射液的含量測(cè)定，主要用來校正樣品中氧化物對(duì)測(cè)定的干擾。

優(yōu)點(diǎn)：消除注射液中添加的亞硫酸鈉和維生素C抗氧劑的干擾。

不足：被測(cè)組分兩次提取易損失，使測(cè)定精密度不高，準(zhǔn)確度較差。

1、測(cè)定原理

由兩波長(zhǎng)處測(cè)得的吸收度之差計(jì)算氯丙嗪的含量。

2、測(cè)定方法

   精密量取鹽酸氯丙嗪注射液適量，鹽酸液(0.1mol/L)稀釋至500ml，精密量取10ml，濃氨溶液堿化游離，乙醚提取，鹽酸提取，合并酸提取液于250ml量瓶中，作為供試液。另取定量對(duì)照品，用鹽酸液(0.1mol/L)溶解并稀釋制成8μg/ml的對(duì)照品溶液，分別于254nm及277nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。

  鹽酸氯丙嗪含量(mg/ml)=12.5C(A₂₅₄－A₂₇₇)_U / V(A₂₅₄－A₂₇₇)_S

12.5為稀釋體積及濃度單位換算因數(shù)，C為對(duì)照品溶液濃度，V為取樣量(ml)，U表示供試品溶液，S表示對(duì)照品溶液。()

說明：因?qū)φ掌窛舛葹棣蘥，所以再除以1000，得mg/ml。

15min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

優(yōu)點(diǎn)：消除抗氧劑的干擾，提高了測(cè)定的精密度和準(zhǔn)確度。

導(dǎo)數(shù)光譜是將常規(guī)的測(cè)量吸光度變?yōu)闇y(cè)量吸光度對(duì)波長(zhǎng)的變化率，也就是測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度分布的斜率(數(shù)學(xué)上稱為導(dǎo)數(shù))，其實(shí)質(zhì)可視為一種數(shù)學(xué)變換。通過這種變換，光強(qiáng)度信號(hào)對(duì)波長(zhǎng)的函數(shù)(吸收光譜)變成了光強(qiáng)度信號(hào)的變化率對(duì)波長(zhǎng)的函數(shù)(導(dǎo)數(shù)光譜)。導(dǎo)數(shù)光譜是經(jīng)過數(shù)學(xué)變換處理后排除共存物質(zhì)吸收干擾，實(shí)現(xiàn)選擇測(cè)定的一種分光光度法。

導(dǎo)數(shù)光譜曲線是在零階吸收光譜曲線(即常規(guī)的吸收曲線)的基礎(chǔ)上求得的。將零階吸收光譜的各波長(zhǎng)點(diǎn)的吸光度對(duì)波長(zhǎng)求導(dǎo)后，將各導(dǎo)數(shù)值連接而成的新的曲線即導(dǎo)數(shù)光譜曲線。即以吸光度對(duì)波長(zhǎng)的導(dǎo)數(shù)值。

1、光譜繪制  繪制待測(cè)組分和干擾組分的零階、一階和二階導(dǎo)數(shù)光譜。

2、線性關(guān)系  以振幅為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制。

3、供試品測(cè)定

五、氣醫(yī)學(xué).全在線52667788.cn相色譜法

注：氣相色譜主要用于分析氣體、揮發(fā)性和半揮發(fā)性液體，以及能夠產(chǎn)生足夠蒸氣壓的固體或者沸點(diǎn)在500℃以下、相對(duì)分子質(zhì)量400以下的物質(zhì)。

(一)硫酸阿托品片的含量測(cè)定

USP(24)采有此法。

1、測(cè)定原理及方法

  以后馬托品為內(nèi)標(biāo)物(外插參照峰)，采用對(duì)照品法進(jìn)行測(cè)量。

(二)、人血漿中硝苯地平的氣相色譜法測(cè)定及藥代動(dòng)力學(xué)研究

課后查閱與此相關(guān)資料，自學(xué)。

六、高效液相色譜法

  地西泮注射液(Ch.P)

  (一)、反相高效液相色譜法

適合于共存組分極性差異較大樣品的分析。

RP的概念：指流動(dòng)相極性大于固定相極性的色譜方法。

固定相：ODS，即十八烷基硅烷鍵合硅膠。

5min

5min

10min,結(jié)合多媒體課件，通過多媒體模型，重點(diǎn)講解離子對(duì)色譜法的原理、分離機(jī)制

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

流動(dòng)相：pH值為2～8。過高，可使化學(xué)鍵合的固定相水解。

 用于堿性雜環(huán)類藥物分析時(shí)，流動(dòng)相中常加入二乙胺、三乙胺等堿性試劑。原因：硅醇基部分硅烷化，裸露的硅醇基與堿性藥物發(fā)生吸附或離子交換，而使堿性藥物色譜峰產(chǎn)生拖尾，分離效能下降，保留時(shí)間，甚至不能被洗脫。因此加入堿性試劑，抑制堿性藥物電離，使其以非電離的形式存在，增加脂溶性，改善分離效能。

例1：地西泮注射液的反相HPLC法 Ch.P(2005)

^{【含量測(cè)定】  照高效液相色譜法（附錄Ⅴ D)測(cè)定。}  

^{色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)  用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇－水(70:30)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm 。理論板數(shù)按地西泮峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，地西泮峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。}

^{內(nèi)標(biāo)溶液的制備  取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。}  

^{測(cè)定法  取地西泮對(duì)照品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5ml ，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，吸取5～10μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取本品適量（約相當(dāng)于地西泮5mg)，同法測(cè)定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。} 

 例2：HPLC法測(cè)定硫酸阿托品片的含量

 例3：HPLC法測(cè)定血漿中地西泮濃度

(二)離子對(duì)高效液相色譜法(paired ion chromatogramphy，PIC或ion pair chromatogramphy，IPC)

常用反相離子對(duì)色譜法(RPIC)

反相離子對(duì)色譜法是把離子對(duì)試劑加入極性流動(dòng)相中，被分析的樣品離子在流動(dòng)相中與離子對(duì)試劑的反離子生成不荷電的中性離子對(duì)，從而增加了樣品離子在非極性固定相中的溶解度，使分配系數(shù)增加，改善分離效果。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時(shí)間分配)

分析堿類：用烷基磺酸鹽為離子對(duì)試劑。如：戊烷磺酸鈉(C₅H₁₁SO₃Na)及庚烷磺酸鈉(C₇H₁₅SO₃Na)等。

分析酸類：用四丁基季銨鹽(PIC-A)。如：四丁基胺磷酸鹽(TBA)。

2、分離機(jī)制

以離子對(duì)模式說明分離機(jī)制

上圖中B為堿分子，遇H⁺生成BH⁺正離子，在流動(dòng)相中與離子對(duì)試劑的反離子生成不荷電的中性離子對(duì)而溶入非極性固定相中。

3、應(yīng)用

1)RPIC法定人血清中異煙肼濃度  HPLC法前處理復(fù)雜、繁瑣、費(fèi)時(shí)。改用離子對(duì)色譜法。

離子對(duì)試劑：庚烷磺酸鈉

內(nèi)標(biāo)物：煙酰胺

(1)色譜條件：pH2.5有利于生物堿離解。

(2)血清樣品的預(yù)處理：沉淀蛋白。

(3)線性關(guān)系：配制含不同量異煙肼的人血清，計(jì)算異煙肼與內(nèi)標(biāo)物色譜峰之比，以比值與異煙肼濃度進(jìn)行線性回歸。求回歸方程。

(4)回收率試驗(yàn)  加樣回收法

(5)精密度試驗(yàn)

(6)干擾試驗(yàn)  內(nèi)源性物質(zhì)、其他抗結(jié)核藥物有無干擾。

(7)血藥濃度監(jiān)測(cè)

(8)結(jié)果與討論  簡(jiǎn)化了前處理過程。

2)HPLC法測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星血藥濃度及其藥動(dòng)力學(xué)研究 

問題討論(5min)

作業(yè)和習(xí)題布置(2min)

歸納總結(jié)(3min)

小 結(jié)

通過學(xué)習(xí)使學(xué)生掌握非水溶液滴定法、鈰量法、比色法、紫外分光光度法、氣相色譜法和高效液相色譜法測(cè)定本類藥物的原理和應(yīng)用。特別是非水溶液滴定法的基本原理，方法，問題討論及應(yīng)用；酸性染料比色法的原理，影響因素及應(yīng)用示例。

復(fù)習(xí)思考題

或

作 業(yè) 題

1、非水溶液滴定適用的范圍？

2、在非水溶液滴定法中何時(shí)需加醋酸汞？為什么？

3、酸性染料比色法的影響因素？

教 學(xué) 效 果

與 分 析

多媒體教學(xué)和板書相結(jié)合，并結(jié)合一定的實(shí)例，加深學(xué)生對(duì)知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)和了解。特別是通過問題討論，讓大家對(duì)所學(xué)知識(shí)進(jìn)行回故、討論，建立一個(gè)互動(dòng)的教學(xué)氛圍。效果較好。