醫(yī)學(xué)免疫學(xué)-授課教案本科理論教案:

免 疫 診 斷

一、抗原或抗體的檢測

（一)抗原抗體反應(yīng)（血清學(xué)反應(yīng))的基本原理

物質(zhì)基礎(chǔ)：抗原決定基與抗體的抗原結(jié)合部位之間結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)。

1．反應(yīng)的特異性：專一性

結(jié)合強(qiáng)度指標(biāo)：

●親和力（affinity)：抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合部位與相應(yīng)抗原決定基之間的結(jié)合強(qiáng)度

●親合力(avidity)：一個(gè)抗體分子與整個(gè)抗原之間的結(jié)合強(qiáng)度。

●結(jié)合強(qiáng)度影響因素：溫度、酸堿度、離子濃度等

2. 反應(yīng)的可見性：抗原抗體比例適當(dāng)。圖

（二)檢測方法

1．凝集反應(yīng)：細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有電解質(zhì)存在的情況下，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊。

（1)直接凝集：圖

玻片法：定性測抗原 。

ABO血型鑒定、細(xì)菌鑒定

試管法：定量測抗體。肥達(dá)氏反應(yīng)

（2)間接凝集：圖，將可溶性抗原包被在載體顆粒（紅細(xì)胞、乳膠等)表面，與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)顆粒沉淀物

間接凝集：包被抗原。如Coombs test，抗球蛋白試驗(yàn)，庫姆斯試驗(yàn) 。

反向間接凝集：包被抗體

間接凝集抑制實(shí)驗(yàn)：圖妊娠乳膠試驗(yàn)

凝集（-)

尿液 + 抗HCG HCG-乳膠

（HCG？)

不凝集（+)

2．沉淀反應(yīng)：血清蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解液或組織浸液等可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物。半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)。

（1)單向免疫擴(kuò)散

方法和原理：圖

抗原擴(kuò)散、沉淀環(huán)的直徑與抗原含量成正相關(guān)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。

應(yīng)用：Ig和C3的定量測定。

（2)雙向免疫擴(kuò)散

方法和原理：圖 抗原和抗體擴(kuò)散。有兩 種以上的抗原抗體系統(tǒng)，兩孔間可出現(xiàn)多條沉淀線。

應(yīng)用：抗原或抗體的定性或定量檢測、抗原抗體系統(tǒng)組成、抗原相關(guān)性分析。

（3)對(duì)流免疫電泳

方法和原理：圖。雙擴(kuò)+電泳

應(yīng)用：AFP（甲胎蛋白)檢測

（4)免疫電泳

方法和原理：圖。電泳后雙擴(kuò)

應(yīng)用：血清蛋白種類分析

（5)免疫比濁
原理：在一定量抗體中加入遞增的抗原，用濁度計(jì)測量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，推算樣品抗原含量。
應(yīng)用：取代單擴(kuò)測定Ig含量。

3．補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

原理：抗體與紅細(xì)胞上的抗原結(jié)合，激活反應(yīng)體系中的補(bǔ)體，引起紅細(xì) 胞的溶解。

方法：

檢測系統(tǒng)：已知抗體或抗原+待檢抗原或抗體

指示系統(tǒng)：SRBC+抗SRBC

補(bǔ)體

不溶血（+)

檢測系統(tǒng)和補(bǔ)體 溫育 加指示系統(tǒng)

溶血（-)

4．免疫標(biāo)記技術(shù)：

標(biāo)記物：熒光素、酶、放射性核素

特點(diǎn)：敏感性高，定性、定位、定量。

（1)免疫熒光法：

標(biāo)記物：異硫氰酸熒光素（FITC) 圖

藻紅蛋白（PE)

方法：直接法和間接法：圖

應(yīng)用：傳染病診斷、測定CD分子、自身免疫病診斷

（2)酶免疫測定：辣根過氧化物酶（HRP)、堿性磷酸酶（AP)

酶免疫組化法：測定細(xì)胞表面或組織中的抗原

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)：測定可溶性抗原/抗體。

ELISA原理：將已知抗原或抗體吸附于固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板)表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌液將游離成分洗去。

方法：

●雙抗體夾心法：檢測抗原

●間接法：檢測抗體 圖

●競爭法：

●生物素-親和素系統(tǒng)ELISA：

應(yīng)用：檢測病原體的抗原或抗體、微量蛋白、 細(xì)胞因子

（3)放射免疫測定法（RIA)：常用131I、125I標(biāo)記，用于微量物質(zhì)測定。

（4)免疫印跡 圖

二、淋巴細(xì)胞的測定：

（一)數(shù)量測定：淋巴細(xì)胞分離技術(shù)

1、E花結(jié)實(shí)驗(yàn)：

2．免疫熒光法：

T細(xì)胞—CD3、CD4、CD8

B細(xì)胞—mIgD、mIgM

3．流式細(xì)胞術(shù)：

4、磁珠分離法：

（二)功能測定

1．淋巴細(xì)胞增殖或轉(zhuǎn)化試驗(yàn)：

原理：有絲分裂原等非特異性刺激T、B細(xì)胞向

淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖。

方法：

3H-TdR摻入法

MTT法

2．細(xì)胞毒試驗(yàn)：Tc NK

3．細(xì)胞因子檢測：ELISA法

4．皮膚實(shí)驗(yàn)：誘導(dǎo)局部遲發(fā)型超敏反應(yīng)

5．溶血空斑實(shí)驗(yàn)：檢測B細(xì)胞的抗體產(chǎn)生功能 圖