| 公開(公告)號 | CN1243010C |
| 公開(公告)日 | 2006.02.22 |
| 申請(專利)號 | CN02139817.8 |
| 申請日期 | 2002.12.11 |
| 專利名稱 | 采用氨基化二氧化硅納米顆�？焖俪樘峒兓疍NA的方法 |
| 主分類號 | C07H21/04(2006.01)I |
| 分類號 | C07H21/04(2006.01)I;C07H1/08(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 湖南大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 王柯敏;何曉曉;李 杜;譚蔚泓;黃杉生;陳小洪 |
| 地址 | 410082湖南省長沙市河西岳麓山湖南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 湖南兆弘專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 趙 洪 |
| 國省代碼 | 湖南;43 |
| 主權(quán)項 | 一種采用氨基化二氧化硅納米顆�？焖俪樘峒兓疍NA的方法，以帶正電荷的氨基化二氧化硅納米顆粒為載體，直接與組織裂解液或細胞裂解液相互作用，帶正電荷的氨基化二氧化硅納米顆粒與組織裂解液或細胞裂解液中帶負電荷的DNA通過靜電作用形成納米顆粒-DNA復(fù)合物，通過離心作用實現(xiàn)納米顆粒-DNA復(fù)合物與組織裂解液或細胞裂解液的分離，再通過解離液將結(jié)合在納米顆粒表面的DNA解離下來，從而實現(xiàn)對DNA的快速純化；其特征在于：具體工藝步驟為：(1)裂解組織或細胞，取適量組織或細胞，加入適量抽提裂解液于冰上快速磨碎成組織液或細胞液后裂解3-5小時；(2)形成氨基化二氧化硅納米顆粒-DNA的復(fù)合物：利用氨基化二氧化硅納米顆粒在pH中性的常溫介質(zhì)中，氨基化二氧化硅納米顆粒表面的氨基質(zhì)子化可有效地產(chǎn)生凈正電，且電動電位高達30mv這一特性，在裂解后的組織或細胞液中加入適量經(jīng)高溫滅菌的氨基化二氧化硅納米顆粒，振蕩混勻，于15-25℃的室溫下充分結(jié)合5-30分鐘，形成氨基化二氧化硅納米顆粒-DNA的復(fù)合物；(3)分離收集氨基化二氧化硅納米顆粒-DNA復(fù)合物：利用氨基化二氧化硅納米顆粒-DNA復(fù)合物和裂解組織液之間的密度差異，對氨基化二氧化硅納米顆粒進行離心處理，使氨基化二氧化硅納米顆粒-DNA復(fù)合物充分沉淀，收集氨基化二氧化硅納米顆粒-DNA復(fù)合物；(4)解離氨基化二氧化硅納米顆粒-DNA復(fù)合物上的DNA.：在氨基化二氧化硅納米顆粒-DNA復(fù)合物中加入解離液，所述解離液為2-3mol/L的氯化鈉溶液或pH10-12的緩沖溶液，室溫下放置5-30分鐘，讓DNA充分洗脫下來；然后對氨基化二氧化硅納米顆粒于4℃離心10-15分鐘，使氨基化二氧化硅納米顆粒充分沉淀，DNA分布在上層澄清溶液中，收集上層澄清溶液于另一離心管中，重復(fù)此步驟2-3次，確保氨基化二氧化硅納米顆粒表面的DNA全部解離下來；(5)濃縮DNA產(chǎn)物：利用DNA在異丙醇中能夠沉降析出的特性，往收集到的內(nèi)含DNA的上層澄清溶液中加入適量的異丙醇，讓其充分混合，于0℃到-20℃下放置10-15分鐘，然后于4℃下12000-15000g離心15-30分鐘，使DNA從溶液中沉淀出來；(6)收集DNA：倒掉上層澄清溶液，用乙醇洗滌DNA沉淀，再次離心，倒掉上層乙醇溶液，讓殘留的乙醇自然揮發(fā)干凈，加入50微升pH為8.0的TE緩沖液溶解DNA沉淀，得到適合濃度的DNA溶液，于4℃下保存。 |
| 摘要 | 采用氨基化二氧化硅納米顆�？焖俪樘峒兓疍NA的方法，以帶正電荷的氨基化二氧化硅納米顆粒為載體，直接與組織裂解液或細胞裂解液相互作用，帶正電荷的氨基化二氧化硅納米顆粒與組織裂解液或細胞裂解液中帶負電荷的DNA通過靜電作用形成納米顆粒-DNA復(fù)合物，通過離心作用實現(xiàn)納米顆粒-DNA復(fù)合物與組織裂解液或細胞裂解液的分離，再通過解離液將結(jié)合在納米顆粒表面的DNA解離下來，從而實現(xiàn)對DNA的快速純化。該方法不需采用酚/氯仿抽提法除去核酸溶液中的蛋白質(zhì)，縮短了時間、提高了效率，同時免去了酚/氯仿對環(huán)境的污染和對人體的毒害作用；該方法為基因轉(zhuǎn)導(dǎo)、突變檢測、基因診斷和治療等研究和應(yīng)用中DNA的抽提純化提供了一種新手段。 |
| 國際公布 |
