有關(guān)細(xì)胞和組織學(xué)技術(shù)

一、細(xì)胞和組織　　免疫組織化學(xué)技術(shù)是用標(biāo)記物或顯色物標(biāo)記的抗體檢測細(xì)胞和組織內(nèi)的抗原，從而達(dá)到診斷和研究疾病的目的�？乖臏�(zhǔn)確顯示和定位與制備的細(xì)胞和組織標(biāo)本質(zhì)量的好壞有著密切的聯(lián)系。由于各種抗原的生化、物理性質(zhì)不同，如溫度高低、酸堿度強弱及各種化學(xué)試劑的作用均可影響抗原的免疫學(xué)活性，良好的細(xì)胞和組[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:47

抗原的制備

除完整的細(xì)胞可作為抗原外，各種不同的細(xì)胞內(nèi)存在的各種分子量不同的物質(zhì)，也都具有全抗原或半抗原的性質(zhì)，某種抗原物質(zhì)可能是某一類細(xì)胞所特有的，可作為這種細(xì)胞的一個標(biāo)志。由于細(xì)胞存在著許多性質(zhì)不同的抗原物質(zhì)，有時要從這眾多的物質(zhì)中提取、純化某種抗原物質(zhì)，以供科學(xué)研究之用�！　∫�、抗原的提取　　抗原的制備是[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:47

抗體的制備

一、抗血清的制備　　有了質(zhì)量好的抗原，還必須選擇適當(dāng)?shù)拿庖咄緩�，才能產(chǎn)生質(zhì)量好（特異性強和效價高）的抗體�！　。ㄒ唬┯糜诿庖叩膭游铩　∽髅庖哂玫膭游镉胁溉轭惡颓蓊�，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據(jù)抗原的生物學(xué)特性和所要獲得抗血清數(shù)量，如[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:46

抗體的提取與純化

精制免疫球蛋白的方法很多。一般采用綜合技術(shù)，避免蛋白變性。如分離IgG時，多結(jié)合使用鹽析法與離子交換法，以求純化。提取IgM的方法也很多，如應(yīng)用凝膠過濾與制備電泳法，或離子交換與凝膠過濾等。　　一、鹽析法　　取x ml血清加x ml生理鹽水，于攪拌下逐滴加入2x ml飽和硫酸銨，硫酸銨的終飽和度為5[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:46

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一，是由Coons等（1950）建立，經(jīng)過近43年的發(fā)展，免疫熒光技術(shù)與形態(tài)學(xué)技術(shù)相結(jié)合發(fā)展成免疫熒光細(xì)胞（或組織）化學(xué)。它與親合化學(xué)技術(shù)如葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素與卵白素、植物血凝素（ConA等）相結(jié)合拓寬了領(lǐng)域；與激光技術(shù)、電子計算機和[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:46

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的原理

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:43

熒光抗體的制備

熒光抗體是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的重要技術(shù)之一，制備高特異性和高效價的熒光抗體必須選用高質(zhì)量的熒光素和高特異性高效價的免疫血清�！　∫弧晒馑亍　晒馐侵敢粋�分子或原子吸收了給予的能量后即刻引起發(fā)光，停止能量供給，發(fā)光也瞬時停止（一般持續(xù)10-7～10-8s）�？梢援a(chǎn)生明亮熒光的染料物質(zhì)，稱熒光色素。目前[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:40

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色方法

一、標(biāo)本制作　　可制作涂片、印片、細(xì)胞單層培養(yǎng)物、組織切片，經(jīng)適當(dāng)固定或不固定，作免疫熒光染色用�！　《�、熒光抗體染色方法　　（一）直接法　　1．染色 切片經(jīng)固定后，滴加經(jīng)稀釋至染色效價如1：8或1：16的熒光抗體（如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體或兔抗人IgG或IgA熒光抗體等），在室溫或37℃染色30[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:40

熒光顯微鏡檢查法

一、熒光顯微鏡　　熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具。它是由光源、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像（圖3-15）。圖3-15　熒光顯微鏡的結(jié)構(gòu)和主要部件　�。ㄒ唬┕庠础　‖F(xiàn)在多采用200W的超高壓汞燈作光源，它是用石[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:40

非特異性染色的消除方法

一、非特異性染色的主要因素　　組織的非特異性染色的機理很復(fù)雜，其產(chǎn)生的原因主要可分為以下幾點：　　（1）一部分熒光素未與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去�！　。�2）抗體以外的血清蛋白與熒光素結(jié)合形成熒光素脲蛋白，可與組織成分結(jié)合�！　。�3）除去檢查的抗原以外，組織中還可能存在類屬抗[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:40

免疫酶細(xì)胞化學(xué)

免疫酶細(xì)胞化學(xué)是免疫細(xì)胞化學(xué)（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗體特異反應(yīng)存在的前提條件下，借助于酶細(xì)胞化學(xué)的手段，檢測某種物質(zhì)（抗原/抗體）在組織細(xì)胞內(nèi)存在部位的一門新技術(shù)：即預(yù)先將抗體與酶連結(jié)，再使其與組織內(nèi)特異抗原反應(yīng)，經(jīng)細(xì)胞化學(xué)染色后，于光鏡或電[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:36

固定和切片

一、固定　　若想得到理想的ICC染色結(jié)果、正確地判斷抗原物質(zhì)在組織細(xì)胞內(nèi)的位置，除需有良好酶和抗體外，保持組織細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的不動性（Immobility）和免疫活性也是至關(guān)重要的。換言之，如果抗原物質(zhì)在組織細(xì)胞間彌散、丟失或失去免疫活性，無論如何努力染色都是徒勞的，所以說固定是ICC染色中非常重要[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:36

染色方法

一、本科標(biāo)抗體法　　酶標(biāo)抗體技術(shù)是通過共價鍵將酶連結(jié)在抗體上，制成酶標(biāo)抗體，再借酶對底物的特異催化作用，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，于光鏡或電鏡下進(jìn)行細(xì)胞表面及細(xì)胞內(nèi)各種抗原成分的定位�！　。ㄒ唬┟傅姆N類及特點　　從理論上講，用細(xì)胞化學(xué)方法能顯示的酶，均可用于標(biāo)記抗體，進(jìn)行ICC染[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:35

結(jié)果分析

ICC染色結(jié)果判斷與其它組織化學(xué)相似，應(yīng)在熟悉所應(yīng)用方法、抗體的優(yōu)點和局限性的基礎(chǔ)上，避免主觀意識，進(jìn)行客觀判斷。一般認(rèn)為在嚴(yán)格操作、控制染色的條件，選擇特異性抗體等條件下，所得結(jié)果是陽性時才有積極意義。而陰性時，不一定意味著該物質(zhì)或抗原不存在，即不能排除實驗過程所致的抗原丟失或抗體選擇不當(dāng)?shù)纫鹑?font style="color:#FF6600">[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:34

免疫細(xì)胞化學(xué)的幾種特殊應(yīng)用

近年免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在下述方面的應(yīng)用令人注目，有著廣闊的前景�，F(xiàn)介紹如下：　　　一、ICC在鋪片中應(yīng)用　　鋪片（Whole Mount Stretch Preparation） 是研究神經(jīng)分布應(yīng)用較早、較廣的方法。19世紀(jì)末，Dogiel和Cajal等利用鋪片技術(shù)，結(jié)合鍍銀及甲基藍(lán)染色，觀察腸道神經(jīng)[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:34

免疫金技術(shù)發(fā)展史

早在一個世紀(jì)以前，化學(xué)家就對膠體金進(jìn)行了研究，當(dāng)時只是研究它的結(jié)構(gòu)和金屬性質(zhì)。在1939年Kausche和Ruska把煙草花葉病毒吸附到金顆粒上在電子顯微鏡下觀察見金離子呈高電子密度。然而膠體金技術(shù)作為標(biāo)記物應(yīng)用于免疫組織化學(xué)研究是在1971年，F(xiàn)aulk 和Taylor首先將兔抗沙門氏菌抗血清與膠[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:31

溶膠的基本概念

一、膠體金　　即金的水溶液，它也具有一般溶膠的特性。分散體系的分類：體系就是一定空間范圍內(nèi)作為我們研究對象的物質(zhì)，某一種或幾種物質(zhì)分散到另一種物質(zhì)中所組成的體系叫做分散體系。被分散相質(zhì)點的大小而改變，因此，按分散相質(zhì)點的大小不同，可將分散體系分為三類。　�。ㄒ唬╇x子分散體系　　指分?jǐn)?shù)散相以小分子或離[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:31

膠體金的制備方法

膠體金溶液的制備有許多種方法，其中最常用的是化學(xué)還原法，基本的原理是向一定濃度的金溶液內(nèi)加入一定量的還原劑使金離子變成金原子。目前常用的還原劑有：白磷、乙醇、過氧化氫、硼氫化鈉、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等，下面分別介紹制備不同大小顆粒的膠體金溶液�！　∫�、制備膠體金的準(zhǔn)備　�。ㄒ唬┎Ａ髅蟮那鍧崱　�[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:31

膠體金的質(zhì)量鑒定

膠體金制備完畢后須經(jīng)電鏡下質(zhì)量鑒定才能應(yīng)用�！　∫弧⒛z體金顆粒直徑測定　　用預(yù)先處理好的覆有Formvar膜的鎳網(wǎng)浸入膠體金溶液內(nèi)，取現(xiàn)放在空氣中干燥或37℃烤箱烤干。然后在透射電鏡下觀察，主要觀察金顆粒的大小，符合不符合所需要的顆粒直徑，金顆粒是否均勻一致，有無橢圓形及多角形金顆粒存在。理想的金顆[詳細(xì)]

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膠體金標(biāo)記物的制備

膠體金標(biāo)記蛋白質(zhì)的原理，一般認(rèn)為是由于pH值等于或稍偏堿于蛋白質(zhì)等電點時，蛋白質(zhì)呈電中性，此時蛋白質(zhì)分子與膠體金顆粒相互間的靜電作用較小，但蛋白質(zhì)分子的表面張力卻最大，處于一種微弱的水化狀態(tài)，較易吸附于金顆粒的表面，由于蛋白質(zhì)分子牢固地結(jié)合在金顆粒的表面，形成一個蛋白層，阻止了膠體金顆粒的相互接觸，[詳細(xì)]

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