第二章 血液一般檢驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)一 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)
實(shí)驗(yàn)三 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)
實(shí)驗(yàn)四 紅細(xì)胞沉降率測(cè)定
實(shí)驗(yàn)五白細(xì)胞計(jì)數(shù)
實(shí)驗(yàn)六白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)
實(shí)驗(yàn)七 白細(xì)胞形態(tài)檢查
實(shí)驗(yàn)八 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)
第三章 血栓與止血一般檢驗(yàn)
第四章 尿液檢驗(yàn)
葡萄糖定性檢查"style="color:#FF0000" >實(shí)驗(yàn)五 尿葡萄糖定性檢查
第四章 腦脊液檢驗(yàn)
第六章 生殖系統(tǒng)分泌物檢驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)一 精子活動(dòng)率和活動(dòng)力檢查
一、毛細(xì)血管采血法
[目的]掌握毛細(xì)胞血管采血法，了解不同部位采血對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響。
[原理]采血針刺破毛細(xì)血管后血液自然流出，用微量吸管吸取一定量的血液。
[器材]一次性消毒采血針、20ul吸管、75%乙醇棉球、無(wú)菌干棉球。
[試劑]洗滌液3管、生理鹽水。
[標(biāo)本]外周血
[操作]
1、準(zhǔn)備 取試管1支，加入2ml生理鹽水。取微量吸管和乳膠吸頭相連，檢查連接是否漏氣，或取一次性微量吸管備用。
2、按摩 輕輕按摩左手中指或無(wú)名指指尖內(nèi)側(cè)，使局部組織自然充血。
3、消毒 用75%乙醇棉球擦拭采血部位皮膚，待干。
4、針刺 用左手拇指和示指固定采血部位使其皮膚和皮下組織繃緊，左手持一次性消毒采血針自指尖腹內(nèi)側(cè)迅速刺入，深度2～3mm，立即出針。
5、拭血 待血液自然流出后，用無(wú)菌干棉球擦去第1滴血。
6、吸血 血液自然流出時(shí)，用一次性微量吸管吸血到10ul刻度，然后用無(wú)菌干棉球壓住傷口止血。如血流不暢，可以用左手自采血部位遠(yuǎn)端向指尖稍施壓使血液流出。
7、稀釋 用無(wú)菌干棉球擦凈微量吸管外部后，將吸管伸入裝有生理鹽水的試管底部，慢慢排出吸管內(nèi)的血液，并用上清液沖洗管內(nèi)余血2～3次，最后將試管內(nèi)的液體混勻。
[注意事項(xiàng)]
1、所選擇采血部位的皮膚應(yīng)完整，無(wú)燒傷、凍瘡、發(fā)紺、水腫或炎癥等。除特殊情況外，不要在耳垂采血。半歲以下嬰幼兒由于手指小，可自拇指、腳趾或足跟內(nèi)、外側(cè)緣采血；嚴(yán)重?zé)齻呖蛇x皮膚完整處采血。
2、本試驗(yàn)具有創(chuàng)傷性，必須嚴(yán)格控?zé)o菌技術(shù)操作，防止采血部位感染；做到一人一針一管，避免交叉感染，最好用一次性采血管。
3、皮膚消毒后，應(yīng)待乙醇揮發(fā)后采血，否則流出的血液擴(kuò)散而不成滴。
4、進(jìn)出針?biāo)俣纫杆�，且傷口要有足夠的深度�?/p>
5、因第1滴血混有組織液，應(yīng)擦去。如血流不暢切勿用力擠壓，以免造成組織液混入，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。
實(shí)驗(yàn)一 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)
[目的]掌握顯微鏡紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法。
[原理]用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，充入計(jì)數(shù)池后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)量，經(jīng)換算求出每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)量。
[器材]顯微鏡、改良Neubauer計(jì)數(shù)板、試管、微量吸管、玻璃棒。
[試劑]紅細(xì)胞稀釋液
[標(biāo)本]外周血或抗凝血（EDTA抗凝)。
[操作]
1、加稀釋液 取小試管1支，加紅細(xì)胞稀釋液2ml。
2、加血 用清潔干燥微量吸管采集末稍血或抗凝血10ul擦去管外余血，輕輕加至紅細(xì)胞稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸管2～3次，立即混勻。
3、充池 混勻后用微量吸管或玻璃棒將紅細(xì)胞懸液充入計(jì)數(shù)池，室溫下平放3～5min，待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計(jì)數(shù)。
4、計(jì)數(shù) 用高倍鏡依次計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)4角和正中5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。
5、計(jì)算
25 N
紅細(xì)胞/L=N×5×10×106×200=N×1010=100 ×1012
N：表示5個(gè)中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)數(shù)。
25
× 5 ：將五個(gè)中方格紅細(xì)胞數(shù)換算成1個(gè)大方格紅細(xì)胞數(shù)。
×10：將1個(gè)大方格紅細(xì)胞數(shù)換1ul血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)。
×106：1L=106ul
200：為血液的稀釋倍數(shù)。
[注意事項(xiàng)]
1、采血時(shí)不能過(guò)分?jǐn)D壓采血部位，針刺激深度必須適當(dāng)。
2、采血應(yīng)順利、準(zhǔn)確，采血部位不得有水腫、發(fā)紺、凍瘡、炎癥等。紅細(xì)胞數(shù)量明顯增高時(shí)可適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)。
3、大小方格內(nèi)壓線細(xì)胞的計(jì)數(shù)遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則，避免多數(shù)或漏數(shù)。
4、將細(xì)胞懸液充入計(jì)數(shù)池時(shí)要一次完成，不能產(chǎn)生滿溢、氣泡或充池不足的現(xiàn)象。
實(shí)驗(yàn)二 血紅蛋白測(cè)定
[目的]掌握氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定方法。
[原理]在血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中，除硫化血紅蛋白外，其余血紅蛋白均可被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白，再與氰離子結(jié)合，生成穩(wěn)定的復(fù)合物氰化高鐵血紅蛋白。棕紅色的氰化高鐵血紅蛋白在波長(zhǎng)540nm處有吸收峰，可用校準(zhǔn)的高精度分光光度計(jì)進(jìn)行直接定量測(cè)定，或用HiCN參考液進(jìn)行比色法測(cè)定，根據(jù)標(biāo)本的吸光度即可求出血紅蛋白濃度。
[器材]一次消毒采血針，微量吸管，試管，5ml移液管，75%乙醇棉球，無(wú)菌干棉球，分光光度計(jì)
[試劑]HiCN轉(zhuǎn)化液（文齊液)
[標(biāo)本]外周血
[操作]
1、直接定量測(cè)定
（1)加轉(zhuǎn)化液：試管內(nèi)加5mlHiCN轉(zhuǎn)化液。
（2)采血與轉(zhuǎn)化：取全血20ul，加到盛有轉(zhuǎn)化液的試管底部，用上清液反復(fù)沖洗吸管3次，充分混合，靜置5min。
（3)測(cè)定：以符合WHO標(biāo)準(zhǔn)的分光光度計(jì)，波長(zhǎng)540nm處，光徑1.000cm，HiCN轉(zhuǎn)化液或蒸餾水調(diào)零，測(cè)定吸光度。
（4)計(jì)算：根據(jù)標(biāo)本的吸光度直接計(jì)算出血紅蛋白濃度（g/L)
64458
血紅蛋白（g/L)=A×44000×251=A×367.7
A：540nm處測(cè)定管吸光度
64458：目前國(guó)際公認(rèn)的血紅蛋白平均相對(duì)分子質(zhì)量。
44000：1965年國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH)公認(rèn)的血紅蛋白摩爾消化系數(shù)。
251：稀釋倍數(shù)。
2、HiCN標(biāo)準(zhǔn)液比色法測(cè)定
（1)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和K值計(jì)算。用HiCN標(biāo)準(zhǔn)液倍比稀釋后（50g/L、100g/L、150g/L、200g/L)，在所用的分光光度計(jì)上分別測(cè)事實(shí)上各稀釋度的吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)品血紅蛋白含量為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線索。或求出換算常數(shù)K。
（2)標(biāo)本的血紅蛋白轉(zhuǎn)化和比色同直接定量測(cè)定，得到標(biāo)本的吸光度（A)
（3)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出待測(cè)樣本的血紅蛋白濃度或用K值來(lái)計(jì)算血紅蛋白濃度，即Hb（g/L)=K×A。
[注意事項(xiàng)]
1、血紅蛋白測(cè)定方法很多。但無(wú)論采用何種方法，都必須以HiCN法為標(biāo)準(zhǔn)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線或K值應(yīng)定期檢查，并與分光光度計(jì)相配。
2、標(biāo)準(zhǔn)微量吸管必須經(jīng)過(guò)水銀稱重法校正。加液量必須準(zhǔn)確，血液與轉(zhuǎn)化液充分混勻�？捎醚t蛋白液代替抗凝血進(jìn)行鑒定。
3、HiCN轉(zhuǎn)化液不能貯存在塑料瓶中，否則會(huì)使CN—丟失，測(cè)事實(shí)上結(jié)果偏低。HiCN轉(zhuǎn)化液應(yīng)貯存在棕色有塞玻璃瓶中，4℃冰箱保存一般可用數(shù)月，但不能在0℃以下保存，因?yàn)榻Y(jié)冰可引起高鐵氰化鉀還原，使轉(zhuǎn)化液褪色失效。
[目的] 掌握網(wǎng)織紅細(xì)胞手工計(jì)數(shù)的操作方法
[原理] 網(wǎng)織紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)殘存的少量核蛋白體和核糖核酸等嗜堿性物質(zhì)，在活體染色時(shí)可被煌焦油藍(lán)染成藍(lán)色網(wǎng)狀或顆粒狀，可與完全成熟的紅細(xì)胞區(qū)別。
[器材]顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液、試管、玻片
[試劑]10g/L煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液
[標(biāo)本]新鮮全血
[操作]
1、加染液 于小試管中加入10g/L煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液2滴，再加入新鮮全血2滴，立即混勻，置室溫下15～20min。
2、制備涂片 取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。
3、觀察 在低倍鏡下選擇紅細(xì)胞分布均勻的部位進(jìn)行觀察。
4、計(jì)數(shù) 在油鏡下計(jì)數(shù)至少1000個(gè)紅細(xì)胞中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。
5、計(jì)算
計(jì)數(shù)的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)
網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)數(shù)= 1000
網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值（網(wǎng)織紅細(xì)胞/L)=紅細(xì)胞/L×網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)數(shù)
[目的]掌握魏氏法紅細(xì)胞沉降率測(cè)定的原理及操作方法。
[原理]將一定量的枸櫞酸鈉抗凝全血置于特制血沉管中，直立于特制血沉架上1h后讀取紅細(xì)胞下沉后血漿的高度。
[器材]Westergren血沉管、血沉架、吸管、試管。
[試劑]109mmol/L枸櫞酸鈉溶液
[標(biāo)本]新鮮全血
[操作]
1、加抗凝劑 吸取濃度為109mmol/L的枸櫞酸鈉0.4ml于試管中。
2、采靜脈血 取靜脈血1.6ml，加入含抗凝劑的試管中，混勻。
3、裝血沉管 用血沉管吸入混勻全血至刻度“0”處，拭去管外殘留余血。
4、立血沉管 將血沉管直立于血沉架上。
[注意事項(xiàng)]
1、使用分析純枸櫞酸鈉抗凝劑，配制時(shí)濃度應(yīng)準(zhǔn)確，配成后液體不渾濁、無(wú)沉淀，保存期為2周。
2、嚴(yán)格控制采血量，使抗凝劑與血液比例為1︰4。
3、血沉管內(nèi)徑要標(biāo)準(zhǔn)，放置要垂直，不得傾斜。
[目的]掌握顯微鏡法白細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理及方法。
[原理]用白細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定的倍數(shù)，同時(shí)破壞溶解紅細(xì)胞。將稀釋的血液注入血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算即可求出每升血液中的白細(xì)胞數(shù)量。
[器材]顯微鏡、改良Neubauer計(jì)數(shù)板、試管、吸管、微量吸管、滴棒。
[試劑]白細(xì)胞稀釋液
[標(biāo)本]新鮮全血或末稍血
[操作]
1、加稀釋液 用吸管吸取白細(xì)胞稀釋液0.38ml于小試管中。
2、吸取血液 用微量吸管吸取新鮮全血或末稍血20ul， 擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管中白細(xì)胞稀釋液的底部，輕輕放出血液，并吸取上層白細(xì)胞稀釋液清洗吸管2～3次。
3、混勻 將試管中血液與稀釋液混勻，待細(xì)胞懸液完全變?yōu)樽睾稚?/p>
4、充池 再次將小試管中的細(xì)胞懸液混勻。用滴棒蘸取細(xì)胞懸液1滴，充入改良Neubauer計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池中，室溫靜置2～3min，待白細(xì)胞完全下沉。
5、計(jì)數(shù) 在低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。
6、計(jì)算
4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)（N) N
白細(xì)胞= 4 ×10×20×106=20×109/L
[注意事項(xiàng)]
1、稀釋用吸管、微量吸血管、血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)板均為計(jì)量工具，使用前需經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的校正，否則將直接影響計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確。
2、使用標(biāo)本可為由靜脈搏穿刺采取的新鮮全血，也可為靜脈末梢血。采集末梢血時(shí)，應(yīng)注意采血部位不得有凍瘡、水腫、發(fā)紺、炎癥等，以免標(biāo)本失去代表性；同時(shí)也應(yīng)注意不能過(guò)度擠壓，以免組織液混入引起血液凝因或造成計(jì)數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確。
3、在充池時(shí)，如充液不足、液體外溢、斷續(xù)充液，或產(chǎn)生氣泡、充液后移動(dòng)蓋玻片等，均會(huì)使細(xì)胞分布不均勻，造成計(jì)數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確。
4、計(jì)數(shù)池內(nèi)的細(xì)胞分布應(yīng)均勻，一般情況下各大方格間的細(xì)胞數(shù)相差不超過(guò)10%，若相差太大，應(yīng)重新充池。
5、計(jì)數(shù)大小方格內(nèi)的壓線細(xì)胞時(shí)，遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則。52667788.cn/wszg/
6、白細(xì)胞數(shù)量過(guò)多時(shí)，可采用加大稀釋倍數(shù)的方法。
[目的]掌握顯微鏡外周血白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法及各種白細(xì)胞的正常形態(tài)。
[原理]將血液制成細(xì)胞分布均勻的血涂片，用瑞氏染液染色，根據(jù)各類細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)和顏色差異將白細(xì)胞進(jìn)行分類并計(jì)數(shù)。通常分類100個(gè)白細(xì)胞，計(jì)算得出各種白細(xì)胞所占的百分率。
[器材]顯微鏡、分類計(jì)數(shù)器、香柏油、拭鏡紙、清潔液。
[試劑]瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液
[標(biāo)本]制備良好的血涂片
[操作]
1、染色 將血涂片用瑞氏染液染色，沖洗干凈，自然干燥后待用。
2、低倍鏡觀察 低倍鏡下觀察白細(xì)胞分布和染色情況。
3、油鏡觀察 選擇血涂片體尾交界處細(xì)胞分布均勻、著色良好的區(qū)域，按一定的方向順序?qū)λ姷拿?個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行分類，并用白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)器作好記錄，共計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞。
4、計(jì)算 求出各類細(xì)胞所占的百分率
[注意事項(xiàng)]
1、由于各種白細(xì)胞體積大小不等，體積較小的淋巴細(xì)胞在血涂片的頭、體部較多，而尾部和兩側(cè)以中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞較多，因此分類最佳區(qū)域?yàn)轶w、尾交界處。
2、分類時(shí)要有秩序地、沒(méi)一定方向連續(xù)地進(jìn)行，既不重復(fù)亦不遺漏，避免主觀選擇視野。
3、分類計(jì)數(shù)結(jié)果的記錄也可采用手工畫“正”或“++++”的方法。
[目的]掌握各種白細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)改變。
[原理]用普通光學(xué)顯微鏡，直鏡觀察經(jīng)瑞氏染色后血涂片上的白細(xì)胞。從細(xì)胞大小、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)等多方面觀察細(xì)胞形態(tài)。
[器材]顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液。
[試劑]瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液
[標(biāo)本]制備良好的血涂片
[操作]
1、染色 將血涂片用瑞氏染液染色，沖洗干凈，自然干燥后待用。
2、低倍鏡觀察 低倍鏡觀察細(xì)胞分布、數(shù)量、染色情況。
3、油鏡觀察 滴加香柏油1滴，在油鏡下對(duì)白細(xì)胞從細(xì)胞大小、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)等多方面做認(rèn)真仔細(xì)地觀察。
4、計(jì)算毒性指數(shù) 觀察100或200個(gè)中性粒細(xì)胞，記錄有病理變化的中性粒細(xì)胞數(shù)量，計(jì)數(shù)毒性指數(shù)。
有中毒顆粒的中性粒細(xì)胞數(shù)
毒性指數(shù)= 計(jì)數(shù)的中性粒細(xì)胞數(shù)
[注意事項(xiàng)]
1、含中毒顆粒的中性粒細(xì)胞應(yīng)與嗜堿性粒細(xì)胞相區(qū)別，其區(qū)別要點(diǎn)是嗜堿性粒細(xì)胞核較少分葉，染色較淺，嗜堿性顆粒著色更深，較大且不均勻，細(xì)胞邊緣常分布較多，也可覆蓋分布于細(xì)胞核上。
2、在血涂片染色偏堿或染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，可將中性顆粒誤認(rèn)為中毒顆粒。應(yīng)注意全片各種細(xì)胞的染色情況。
[目的]掌握嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)的方法。
[原理]用嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，使大部分的紅細(xì)胞和其他白細(xì)胞被破壞并使嗜酸性粒細(xì)胞著色。將稀釋的細(xì)胞懸液滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量，經(jīng)過(guò)換算得出每升血液中的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量。
[器材]顯微鏡、改良Neubauber計(jì)數(shù)板、試管、吸管、微量吸管、滴棒。
[試劑]
1、伊紅丙酮稀釋液。
2、Hinkelman稀釋液。
3、乙醇-伊紅稀釋液。
4、皂素-甘油稀釋液。
5、溴甲酚紫稀釋液。
6、固綠稀釋液。
[標(biāo)本]新鮮全血或末梢血
[操作]
1、加稀釋液 吸取嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液0.38ml于小試管中。
2、采血 用微量吸管采血20ul，擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管稀釋液的底部，輕輕放出血認(rèn)，并吸取上層稀釋液清洗吸管2～3次。
3、混勻 將試管中的血液與稀釋液混勻，待細(xì)胞完全溶解。
4、充池 再次將小試管中的細(xì)胞懸液混勻。用滴棒蘸取細(xì)胞懸液1滴，充入改良Neubauer計(jì)數(shù)板的2個(gè)計(jì)數(shù)池中，室溫下靜置3～5min。
5、計(jì)數(shù) 低倍鏡下計(jì)數(shù)2個(gè)計(jì)數(shù)池共10個(gè)大方格內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量。
6、計(jì)算
10個(gè)大方格內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞
嗜酸性粒細(xì)胞/L= 10×10×20×106
[注意事項(xiàng)]
1、凡能引起白細(xì)胞計(jì)數(shù)誤差的因素，嗜酸性業(yè)細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)均勻應(yīng)注意。
2、計(jì)數(shù)應(yīng)在60min內(nèi)完成，因時(shí)間太長(zhǎng)，嗜酸性粒細(xì)胞會(huì)被逐漸溶解，造成結(jié)果偏低。
3、血液加入稀釋液后應(yīng)立即混勻，否則易致血液凝固和細(xì)胞聚集。因嗜酸性粒細(xì)胞易于破碎，振蕩不宜太猛烈。若使用含甘油的稀釋液，因甘油造成液體粘稠度增加，可增加振蕩次數(shù)、延長(zhǎng)振蕩混勻時(shí)間。
[目的]掌握血小板的顯微鏡目視計(jì)數(shù)方法。
[原理]血液經(jīng)稀釋液按一定比例稀釋和破壞紅細(xì)胞后，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的血小板數(shù)量，經(jīng)過(guò)換算求出每升血液中血小板的數(shù)量。
[器材]顯微鏡，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，采血針，血紅蛋白吸管，試管。
[試劑]10g/L草酸銨稀釋液。
[標(biāo)本]外周血
[操作]
1、吸取稀釋液 準(zhǔn)確吸取10g/L 草酸銨稀釋液0.38ml，置于清潔小試管中。
2、采血 常規(guī)消毒無(wú)名指，穿刺后，讓血液自然流出，準(zhǔn)確采血20ul，置于含有草酸銨的稀釋液中，立即充分混勻。
3、稀釋靜置 待完全溶血后再混勻1min，置室溫10min。
4、充液靜置 取混勻的血小板懸液1滴充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)，靜置10～15min，使血小板充分下沉�？諝飧稍锏募竟�(jié)應(yīng)將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板置濕盒內(nèi)。
5、計(jì)數(shù) 用高倍鏡計(jì)數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板中央大方格內(nèi)的四角和中央共5個(gè)中方格內(nèi)血小板數(shù)量。
6、計(jì)算 每升血小板數(shù)=5個(gè)中方格內(nèi)血小板數(shù)×109/L
[注意事項(xiàng)]
1、草酸銨稀釋液要清潔，無(wú)細(xì)菌、塵埃等污染。存放時(shí)間較長(zhǎng)后應(yīng)過(guò)濾后再使用。
2、毛細(xì)血管采血時(shí)，針刺應(yīng)達(dá)3mm深，使血液流暢。拭去第1滴血后立即采血，以防血小板聚集和破壞。如果同時(shí)做白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)先采血做血小板計(jì)數(shù)。
3、血液加入血小板稀釋液內(nèi)要充分混勻，但不可過(guò)度振蕩，以免導(dǎo)致血小板破壞和聚集。
4、血小板懸液充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)需要靜置10～15min，使血小板完全下沉后再計(jì)數(shù)。但應(yīng)注意保持濕度，避免水分蒸發(fā)而影響計(jì)數(shù)結(jié)果。
5、計(jì)數(shù)時(shí)光線不可太強(qiáng)，注意微有折光性的血小板與塵埃等的鑒別，附著在血紅細(xì)胞旁的血小板也要注意，不要漏數(shù)。
6、應(yīng)在1h內(nèi)計(jì)數(shù)完畢，否則結(jié)果偏低。
7、所用計(jì)量器材必須標(biāo)準(zhǔn)化。
8、檢查前，患者應(yīng)避免服用含有阿司匹林及其他抗血小板藥物。
[目的]掌握尿量的測(cè)定方法及注意事項(xiàng)。
[原理]采用有刻度的容器測(cè)定24h尿量。
[器材]量杯或量筒、潔凈容器。
[標(biāo)本]24h尿液。
[操作]清晨將尿液排空后棄去，用潔凈容器留取隨后的24h尿液，混合后準(zhǔn)確測(cè)定尿量。
[注意事項(xiàng)]每次留取標(biāo)本必須排空膀胱，尿量測(cè)定精確至毫升。氣溫過(guò)高時(shí)注意防腐。
[參考值]①成年人：1000～2000ml/24h。②1～6歲：300～1000ml/24h。③7～12歲：500～1500ml/24h。
[目的]了解常用干化學(xué)試帶測(cè)定尿液酸堿度的方法、原理及注意事項(xiàng)。
[原理]干化學(xué)試帶的測(cè)試模塊區(qū)含有甲基紅和溴麝香草酚藍(lán)，兩種酸堿指示劑適量配合可測(cè)試尿液酸堿度。
[器材]潔凈試管或尿標(biāo)。
[試劑]尿多聯(lián)化試帶與標(biāo)準(zhǔn)色板。
[標(biāo)本]新鮮尿液。
[操作]將試帶用尿液浸濕后與標(biāo)準(zhǔn)色板比色，1min內(nèi)讀取pH。
[注意事項(xiàng)]
1、試帶應(yīng)在干燥、避光處保存，注意保質(zhì)期，定期內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控液進(jìn)行檢測(cè)。
2、按說(shuō)明書操作，1min內(nèi)讀取結(jié)果。
3、標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)新鮮，否則細(xì)菌繁殖會(huì)使pH增高�；蛞騿适]發(fā)性酸而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4、尿液pH還可作為其他檢查項(xiàng)目的質(zhì)控指標(biāo)，若pH＜3或pH＞9均會(huì)影響其他檢測(cè)結(jié)果。
[目的]掌握尿蛋白定性的磺基水楊酸法。
[原理]磺基水楊酸是一種生物堿，在酸性條件下，磺基水楊酸的磺酸根離子與蛋白質(zhì)氨基酸陽(yáng)離子結(jié)合，形成不溶性的蛋白鹽沉淀，沉淀生成的程度可反映蛋白質(zhì)含量。
[器材]小試管、滴管、吸管、黑色襯紙及pH廣泛試紙。
[試劑]200g/L磺基水楊酸溶液。
[標(biāo)本]新鮮尿液或人工蛋白尿標(biāo)本。
[操作]
1、加尿液 取小試管2支，各加清晰尿液1ml。
2、加試劑 于第1支試管內(nèi)滴加磺基水楊酸溶液2滴，輕輕混勻；另1支試管不加試劑作空白對(duì)照，1min內(nèi)觀察結(jié)果。
3、判斷結(jié)果 按表判斷陽(yáng)性程度及蛋白質(zhì)的含量
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結(jié)果 報(bào)告方式 相當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)含量（g/L)
清晰透明 — ＜0.05
在黑色背景上可見輕度渾濁 極微量 0.05～0.1
不需黑色背景即見輕度渾濁± 0.1～0.5
白色渾濁，但無(wú)顆粒出現(xiàn) + 0.5～1.0
渾濁并出現(xiàn)顆粒 ++ 1.0～2.0
明顯渾濁呈現(xiàn)絮狀 +++ 2.0～5.0
渾濁，有大凝塊++++ ＞5.0
[注意事項(xiàng)]
1、該法靈敏，極輕微反應(yīng)無(wú)意義。判斷結(jié)果應(yīng)及時(shí)，否則會(huì)使陽(yáng)性增高。
2、尿內(nèi)含尿酸或尿酸鹽過(guò)多。可出現(xiàn)假陽(yáng)性，但反應(yīng)較為緩慢，15s后出現(xiàn)渾濁，由弱漸強(qiáng)；或于加試劑1min后漸呈蛛絲狀渾濁，緩慢擴(kuò)散，覆蓋于尿液的表面，加熱或加堿可消失。
3、含碘造影劑、大劑量青霉素等也可使反應(yīng)呈假陽(yáng)性，但其反應(yīng)與蛋白尿不同。應(yīng)仔細(xì)觀察并結(jié)合用藥情況綜合分析。
[目的]了解尿液蛋白質(zhì)定量雙縮脲法的反應(yīng)原理、檢測(cè)方法。
[原理]鎢酸可沉淀尿中的蛋白質(zhì)，后者復(fù)溶于雙縮脲試劑中，其堿性的Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵形成紫色復(fù)合物，呈色深淺與尿蛋白質(zhì)含量成正比。
[器材]試管、滴管、分光光度計(jì)、離心機(jī)等
[試劑]
1、200g/L磺基水楊酸溶液。
2、15g/L鎢酸鈉溶液。
3、0.075mol/L硫酸。
4、雙縮脲試劑。
5、蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。
6、生理鹽水。
[標(biāo)本]新鮮尿液
[操作]
1、測(cè)定尿量 準(zhǔn)確測(cè)定患者24h尿量，反復(fù)混勻后取10ml離心沉淀留取上清液備用。
2、尿蛋白定性 采用磺基水楊酸法定性尿蛋白，陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行下列測(cè)定。
3、加標(biāo)本處理
①加尿液：根據(jù)蛋白質(zhì)半定量的結(jié)果決定標(biāo)本的加入量。尿蛋白定性（+)～（++)，于10ml離心管中加尿液5ml，如定性（++)～（+++)，則取1ml尿液加4ml蒸餾水稀釋。
②加沉淀劑：向離心管加入0.075mol/L硫酸2.5ml，混勻后再加15g/L鎢酸鈉溶液2.5ml，充分混勻后靜置10min。
③離心：1500r/min離心5min后，傾盡上清液，將離心管倒置于干燥濾紙上吸干水分，保留沉淀待測(cè)。
④復(fù)溶：向沉淀中加生理鹽水至1ml刻度，振搖以使蛋白質(zhì)溶解，作為測(cè)定管。
4、雙縮脲反應(yīng) 按表測(cè)定，混勻后37℃水浴30min
尿52667788.cn/yaoshi/蛋白定量雙縮脲法
試劑 測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
生理鹽水 1.0 __
2.5g/L蛋白標(biāo)準(zhǔn)液 _ 1.0_
雙縮脲試劑4.0 4.0 4.0
5、比色和計(jì)算 波長(zhǎng)540nm，空白管調(diào)零分別讀取A標(biāo)A測(cè)。
A測(cè) 24h尿量（ml)
24尿蛋白總量（g)= A標(biāo) ×2.5× 1000（ml)
[注意事項(xiàng)] 24h尿標(biāo)本最好不加防腐劑，冷藏保存，測(cè)定前充分混勻。
[目的]掌握尿葡萄糖定性的班氏法。
[原理]葡萄糖或其他還原性糖的醛基在熱堿性溶液中，能將班氏試劑的藍(lán)色硫酸銅還原為黃色的氫氧化亞銅，進(jìn)而形成紅色氧化亞銅沉淀。
[器材]試管架、中試管、滴管、試管夾、酒精燈。
[試劑]
1、甲液 枸櫞酸鈉，無(wú)水碳酸鈉，蒸餾水加熱助溶。
2、乙液 硫酸銅，蒸餾水加熱助溶。冷卻后，將乙液緩慢加入甲液中，不斷混勻，冷卻至室溫后補(bǔ)充蒸餾水至1000ml。如溶液不透明則需要過(guò)濾，煮沸后出現(xiàn)沉淀或變色則不能應(yīng)用。
[標(biāo)本]新鮮尿液
[操作]
1、鑒定班氏試劑質(zhì)量 取中號(hào)試管1支，加入班氏試劑2.0ml，搖動(dòng)試管徐徐加熱至沸騰，觀察試劑有無(wú)顏色及性狀變化，若試劑仍為透明藍(lán)色，可進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。
2、加尿液 向班氏試劑中加離心后的尿液0.2ml，混勻。
3、加熱煮沸 繼續(xù)煮沸1～2min，或置沸水浴5min，自然冷卻。
4、判斷結(jié)果 判斷結(jié)果見表
糖定性試驗(yàn)結(jié)果判斷
反應(yīng)現(xiàn)象 報(bào)告方式 葡萄糖含量（mmol/L)
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藍(lán)色不變 — ＜5.6
藍(lán)色中略帶綠色,但無(wú)沉淀 ± 5.6～11.2
綠色,伴少許黃綠色沉淀 +＜28
較多黃綠色沉淀,以黃為 ++ 28～56
土黃色渾濁,有大量沉淀+++ 57～112
大量棕紅色或磚紅色沉淀 ++++ ＞112
[注意事項(xiàng)]
1、試劑與尿液的比例為10︰1。
2、煮混時(shí)應(yīng)不時(shí)搖動(dòng)試管以防爆沸噴出，出可在沸水浴中實(shí)驗(yàn)。
3、檢驗(yàn)糖尿病患者尿液中葡萄糖，應(yīng)空腹或餐后2h留取尿標(biāo)本。
4、尿液中有大量尿酸鹽存在時(shí)，煮沸后也呈渾濁并帶綠色，但久置后并不變黃色而呈灰藍(lán)色，故必須于冷卻后觀察結(jié)果。尿中含大量銨鹽時(shí)可抑制氧化亞銅沉淀的生成，應(yīng)加堿煮沸除去。蛋白含量較高時(shí)也影響銅鹽的沉淀，可用加熱乙酸法除去。
5、一些非糖還原性物質(zhì)，如水合氯醛、氨基比林、PAS、阿匹林、青霉素、鏈霉素、VitC、異煙肼等，當(dāng)基在尿中含量過(guò)高時(shí)亦呈陽(yáng)性反應(yīng)，應(yīng)停藥3d后再進(jìn)行檢查。對(duì)靜脈輸注大劑量VitC者5d內(nèi)不宜做尿糖定性，或定性時(shí)先將尿液煮沸使之分解破壞。
[目的]掌握尿沉渣非染色法顯微鏡檢查的內(nèi)容和方法。
[原理]采用顯微鏡觀察的方法，根據(jù)尿液細(xì)胞、管型等有形成分的形態(tài)特征，識(shí)別并記錄其在顯微鏡一定視野內(nèi)的數(shù)量。
[器材]載玻片、離心機(jī)、刻度離心管、蓋玻片、滴管、普通顯微鏡、定量尿沉渣分析板。
[標(biāo)本]新鮮尿液
[操作]
1、未離心直接涂片法
（1)混勻：充分混勻尿液。
（2)制備涂片：取混勻的尿液1滴于載玻上，加蓋玻片，注意避免產(chǎn)生氣泡。
（3)觀察計(jì)數(shù)：①先用低倍觀察全片細(xì)胞、管型等成分的分布情況，然后用高倍鏡確認(rèn)。注意使用暗視野觀察尿液有形成分，特別是透明管型。②管型在低倍鏡下觀察，至少計(jì)數(shù)20個(gè)視野；細(xì)胞在高倍鏡下觀察至少計(jì)數(shù)10個(gè)視野，取其平均值報(bào)告；結(jié)晶按高倍鏡視野中分布范圍報(bào)告。計(jì)數(shù)時(shí)要注意細(xì)胞的完整性，還要注意有無(wú)其他異常巨大細(xì)胞、寄生蟲蟲卵、滴蟲、細(xì)菌、粘液絲等，男性尿液標(biāo)本還要注意有無(wú)精子及卵磷脂小體。
2、離心沉淀涂片法
（1)離心尿液：透用于尿外觀非明顯渾濁的尿標(biāo)本，是尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化推行的方法。取尿液10ml離心5min，要求相對(duì)離心力為400g。
（2)提取尿沉渣：手持離心管傾斜45°～90°，用滴管吸去上層尿液，保留下層0.2ml尿沉渣。
（3)涂片：輕輕混勻尿沉渣后，取1滴置載玻片上，用18mm×18mm或22mm×22mm的蓋玻片覆蓋后顯微鏡檢查。
（4)觀察計(jì)數(shù)：與未離心尿直接涂片法相同。
3、定量尿沉渣分析法 定量尿沉渣分析板由1塊硬質(zhì)塑料板制成，每塊板內(nèi)分為10個(gè)統(tǒng)一深度的計(jì)數(shù)池，每1個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)的計(jì)數(shù)區(qū)為1.0ul計(jì)數(shù)區(qū)分為10個(gè)大方格，每個(gè)大方格又分為9個(gè)小方格。
（1)未離心法：直接取充分混勻的尿液1滴充入定量尿沉渣分析計(jì)數(shù)池內(nèi)，在低倍鏡下計(jì)數(shù)10個(gè)大方格內(nèi)管型總數(shù)，在高倍鏡下計(jì)數(shù)10個(gè)大方格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)，此即每微升尿液某種細(xì)胞或管型的數(shù)量。
（2)離心法：尿液標(biāo)本處理同離心尿沉淀涂片法，然后充池計(jì)數(shù)，方法同上。
4、報(bào)告結(jié)果
（1)涂片法：細(xì)胞以最低數(shù)～最高數(shù)/HP、管型以最低數(shù)～最高數(shù)/低倍鏡視野報(bào)告。結(jié)晶以所占視野面報(bào)告，無(wú)結(jié)晶為（—)；結(jié)晶占1/4視野（+)；結(jié)晶占1/2視野為（++)；結(jié)晶占3/4視野為（+++)；結(jié)晶滿視野為（++++)。如果細(xì)胞、管理的數(shù)量過(guò)多難以計(jì)算，也可按結(jié)晶的報(bào)告方式報(bào)告結(jié)果。
（2)定量尿沉渣分析板法：以每微升某種細(xì)胞或管型數(shù)報(bào)告。
[目的]掌握腦脊液顯微鏡檢查的內(nèi)容、方法。
[器材]顯微鏡、改良牛鮑計(jì)數(shù)板、微量吸管、刻度吸管、小試管。
[試劑]生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液，冰乙酸，白細(xì)胞稀釋液，瑞氏染液或瑞-吉染液。
[標(biāo)本]新鮮腦脊液。
[操作]
（1)充池：直接用微量吸管吸取混勻的腦脊液，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的上下2個(gè)計(jì)數(shù)池。
（2)計(jì)數(shù)：靜置2～3min后，低倍鏡下計(jì)數(shù)2個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)四角和中央大方格共10個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。
（3)計(jì)算：10個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)即為每微升腦脊液細(xì)胞總數(shù)，再換算成每升腦脊液細(xì)胞總數(shù)。
[注意事項(xiàng)]
1、直接白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，也可用微量吸管吸取冰乙酸后盡可能全部吹出，僅使吸管內(nèi)壁粘附少許冰乙酸，再吸以少量混勻的腦脊液于吸管中，數(shù)分鐘后吸管內(nèi)紅細(xì)胞溶解，然后再充池計(jì)數(shù)。
2、細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，如發(fā)現(xiàn)較多細(xì)胞有皺縮或腫脹等異�，F(xiàn)象，應(yīng)如實(shí)報(bào)告，以協(xié)助臨床醫(yī)學(xué)鑒別是陳舊性出血或新鮮出血。
3、血性腦脊液中的白細(xì)胞必須校正后才有價(jià)值，校正方法是分別計(jì)數(shù)血液紅細(xì)胞、白細(xì)胞數(shù)和腦脊液細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞數(shù)，扣除因出血而帶進(jìn)腦脊液的白細(xì)胞數(shù)。
腦脊液紅細(xì)胞數(shù)×血液白細(xì)胞數(shù)
白細(xì)胞校正數(shù)腦脊液白細(xì)胞未校正數(shù)— 血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)
4、細(xì)胞涂片時(shí)，為了使細(xì)胞容易粘在玻片上，可取沉淀的細(xì)胞懸液2滴，加血清1滴，混勻后涂片。
5、涂片染色分類時(shí)，如見內(nèi)皮細(xì)胞或異常細(xì)胞，則另行描述報(bào)告，必要時(shí)用巴氏或HE染色查找腫瘤細(xì)胞。
6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果后，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板用0.75%乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸泡，以免損壞計(jì)數(shù)板。
[目的]掌握腦脊液蛋白質(zhì)定性試驗(yàn)的方法。
[原理]腦脊液中球蛋白與苯酚結(jié)合，形成不溶性蛋白鹽而產(chǎn)生白色渾濁或沉淀。
[器材]小試管、刻度吸管、尖滴管。
[試劑]飽和苯酚溶解。
[標(biāo)本]新鮮腦脊液。
[操作]
1、加試劑 取試劑2ml于小試管中。
2、加標(biāo)本 用尖滴管垂直滴加腦脊液標(biāo)本1～2滴。
3、觀察結(jié)果 在黑暗背景下立即用肉眼觀察結(jié)果。
4、判斷結(jié)果
（1)清晰透明，不呈現(xiàn)云霧狀為（—)。
（2)呈微白霧狀，對(duì)光不易看見，黑色背景下才能見到（±)。
（3)灰白色云霧狀為（+)。
（4)白色渾濁或白色薄云狀沉淀為（++)。
（5)白色絮狀沉淀或白色濃云塊狀為（+++)。
（6)立即形成白色凝塊為（++++)。
[注意事項(xiàng)]
1、當(dāng)室溫在10℃以下時(shí)，應(yīng)將試劑保存在37℃溫箱中，否則飽和度降低，可致假陽(yáng)性。
2、試管內(nèi)徑以小為佳，一般為（13±1)mm，加入試劑后立即觀察結(jié)果。
3、標(biāo)本中如紅細(xì)胞過(guò)多，應(yīng)離心沉淀取上清液檢測(cè)。
[目的]掌握漿膜腔積液顯微鏡檢查的內(nèi)容、方法。
[器材]顯微鏡、改良牛鮑計(jì)數(shù)板、微量吸管、小試管。
[試劑]生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液，冰乙酸，白細(xì)胞稀釋液，瑞氏染液或瑞-吉染液。
[標(biāo)本]漿膜腔穿刺液。
[操作]
（一)有核細(xì)胞計(jì)數(shù)
1、直接計(jì)數(shù)法
（1)去除紅細(xì)胞：在小試管內(nèi)放入冰乙酸1～2滴，轉(zhuǎn)動(dòng)試管，使內(nèi)壁粘附少許冰乙酸后傾去，滴加混勻漿膜腔積液3～4滴，混勻，放置數(shù)分鐘，破壞紅細(xì)胞。
（2)充池：用微量吸管取混勻破壞紅細(xì)胞后的漿膜腔積液充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的2個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)。
（3)計(jì)數(shù)：靜置2～3min后，低倍鏡計(jì)數(shù)2個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)四周和中央大方格共10個(gè)大方格內(nèi)的有核細(xì)胞數(shù)。
（4)計(jì)算：10個(gè)大方格有核細(xì)胞總數(shù)即每微升漿膜腔積液的有核細(xì)胞總數(shù)，再換算成每升漿膜腔積液的有核細(xì)胞數(shù)。
2、稀釋計(jì)數(shù)法
（1)稀釋破壞紅細(xì)胞：根據(jù)標(biāo)本內(nèi)有核細(xì)胞多少，用白細(xì)胞稀釋液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行一定倍數(shù)稀釋，混勻，放置數(shù)分鐘，破壞紅細(xì)胞。
（2)充池：用微量吸管取混勻稀釋后的漿膜腔液充入1個(gè)計(jì)數(shù)池。
（3)計(jì)數(shù)：靜置2～3min后，低倍鏡計(jì)數(shù)1個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)的四角和中央大方格共5個(gè)大方格內(nèi)的有核細(xì)胞總數(shù)。
（4)計(jì)算：根據(jù)5個(gè)大方格內(nèi)的有核細(xì)胞總數(shù)稀釋倍數(shù)，計(jì)算每升漿膜腔積液的有核細(xì)胞數(shù)。
（二)有核細(xì)胞分類
1、直接分類法 有核細(xì)胞計(jì)數(shù)后，將低倍鏡轉(zhuǎn)為高倍鏡，直接在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞核形態(tài)進(jìn)行分類，共分類計(jì)數(shù)100個(gè)有核細(xì)胞，分別計(jì)數(shù)單個(gè)核細(xì)胞（包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及間皮細(xì)胞)和多個(gè)核細(xì)胞（粒細(xì)胞)的百分率。
2、涂片染色分類法 在抽出穿刺液后，立即以1000r/min離心5min，取沉淀物制成均勻的薄片，置于室溫下或37℃恒溫箱內(nèi)盡快干燥，瑞氏或瑞-吉染色后油鏡分類計(jì)數(shù)100個(gè)有核細(xì)胞。一般標(biāo)本中可見到淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、間皮細(xì)胞等。
[注意事項(xiàng)]
1、有核細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)包括間皮細(xì)胞。
2、必要時(shí)可采用細(xì)胞玻片離心沉淀儀收集細(xì)胞，以提高白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。
3、有核細(xì)胞分類計(jì)數(shù)誤差大，尤其是陳舊性、細(xì)胞變形的標(biāo)本，故推薦采用涂片染色分類計(jì)數(shù)。
4、染色分類計(jì)數(shù)過(guò)程中，若發(fā)現(xiàn)間皮細(xì)胞和不能分類的異常細(xì)胞應(yīng)中外描述或作HE、巴氏染色查找腫瘤細(xì)胞。
[目的]掌握漿膜腔液粘蛋白定性（李凡他試驗(yàn))的方法。
[原理]漿膜腔上皮細(xì)胞在炎癥刺激下分泌粘蛋白。粘蛋白是一種酸性糖蛋白，其等電點(diǎn)pH為3～5，因此，可在稀乙酸中出現(xiàn)白色沉淀。
[器材]100ml量筒，滴管。
[試劑]冰乙酸、蒸餾水。
[標(biāo)本]漿膜腔穿刺液
[操作]
1、加試劑 加2～3滴冰乙酸于100ml量筒中，再加大約100ml蒸餾水，混勻，此時(shí)溶液的pH為3～5，靜置數(shù)分鐘。
2、加標(biāo)本 垂直滴加待測(cè)標(biāo)本1滴于量筒中。
3、觀察結(jié)果 立即在黑色背景下觀察有無(wú)白色云霧狀沉淀生成及其下降程度。
4、判斷結(jié)果
（1)陰性、陽(yáng)性結(jié)果的判斷。
1)陰性：清晰，不顯霧狀或有輕微白色霧狀渾濁，但在下降過(guò)程中消失。
2)陽(yáng)性：出現(xiàn)白色霧狀渾濁并逐漸下沉至量筒底部不消失。
（2)陽(yáng)性程度的判斷
1)漸呈白霧狀為（±)
2)可見灰白色霧狀為（+)
3)白色薄云狀為（++)
4)白色濃云狀（++++)
[注意事項(xiàng)]
1、血性漿膜腔積液經(jīng)離心沉淀后，用上清液進(jìn)行檢查。
2、量筒的高度與蒸餾水的量要足夠。
3、加入標(biāo)本后立即在黑色背景下仔細(xì)觀察結(jié)果。如渾濁不明顯，下沉緩慢，中途消失者為陰性。
[目的]掌握精子活動(dòng)率和活動(dòng)力的檢查方法。
[原理]精液液化后，將精液滴于載玻片上，顯微鏡下觀察精子的活動(dòng)情況，計(jì)算活動(dòng)率和活動(dòng)力。
[器材]顯微鏡，載玻片，蓋玻片。
[試劑]5g/L伊紅Y染液
[標(biāo)本]新鮮液化精液。
[操作]
1、計(jì)算精子活動(dòng)率 取液化精液1滴于載玻片上，加蓋玻片，高倍鏡下觀察100個(gè)精子，計(jì)數(shù)有尾部活動(dòng)精子數(shù)，計(jì)算其百分率，即精子活動(dòng)率。
2、觀察精子活動(dòng)力 在觀察活動(dòng)率的同時(shí)，觀察精子活動(dòng)的強(qiáng)度，將精子活動(dòng)分為a、b、c、d四個(gè)級(jí)別，即精子活動(dòng)力。a級(jí)：精子呈前向快速運(yùn)動(dòng)；b級(jí)：緩慢或呆滯的前向運(yùn)動(dòng)；c級(jí)：非前向運(yùn)動(dòng)；d級(jí)：死精子。
3、染色 若不活動(dòng)精子大于50%，可進(jìn)行體外活體染色，以鑒別其死活。取新鮮液化精液和伊紅Y染液1滴于載玻片上，混勻，1min后推成薄片，自然干燥后于顯微鏡（高倍鏡)下觀察。死精子呈紅色，活精子不著色。觀察100個(gè)精子，以不著色精子的百分率報(bào)告精子活率。
[注意事項(xiàng)]
1、排精后1h內(nèi)送檢，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，精子活動(dòng)率和活動(dòng)力減低。
2、檢查時(shí)注意保溫，溫度過(guò)低，精子活動(dòng)率、活動(dòng)力下降。
[目的]掌握精子計(jì)數(shù)的方法
[原理]采用碳酸氫鈉破壞精液的粘稠度，甲醛固定精子，然后充計(jì)數(shù)池，顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的精子數(shù)，換算成每升精液中的精子數(shù)。
[器材]顯微鏡，血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)板，小試管。
[試劑]精子稀釋液。
[標(biāo)本]新鮮精液化精液。
[操作]
1、取稀釋液 取精子稀釋液0.38ml于小試管內(nèi)。
2、加精液 加入混勻的液化精液20ul，充分混勻。
3、充池 取1滴精子懸液充入計(jì)數(shù)池內(nèi)，靜置3～5min。
4、觀察 高倍鏡下計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)四角及中央5個(gè)中方格內(nèi)的精子數(shù)。
5、計(jì)算
精子計(jì)數(shù)=5個(gè)中方格內(nèi)精子數(shù)×109/L
精子總數(shù)=精子數(shù)/L×精液量（ml)×10-3
[注意事項(xiàng)]
1、精子數(shù)量變異較大，較準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)應(yīng)在2～3個(gè)月內(nèi)分別取3份或更多的精液標(biāo)本檢查。出現(xiàn)1次異常結(jié)果，應(yīng)間隔7d后再?gòu)?fù)查，反復(fù)查2～3次后方能得出較準(zhǔn)確結(jié)果。
2、如常規(guī)檢查未發(fā)現(xiàn)精子，應(yīng)離心后取沉淀物檢查，若仍無(wú)精子才能確定為精子癥。
[目的]掌握精子正常形態(tài)及其檢查方法。
[原理]正常精子形似蝌蚪，分頭、體、尾三部分，長(zhǎng)約50～60um。頭部呈橢圓形，尾長(zhǎng)可彎曲，經(jīng)過(guò)瑞特染色后，顯微鏡下觀察100～200個(gè)精子，觀察形態(tài)正常和異常精子數(shù)及其所占的比例。
[器材]顯微鏡，載玻片，香柏油。
[試劑]Wright染液。
[標(biāo)本]新鮮液化精液。
[操作]
1、涂片并染色 取液化精液1滴于載玻片上，直接涂片，自然干燥后行Wright染色。
2、觀察結(jié)果 油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)精子，觀察有無(wú)異形精子，同時(shí)計(jì)數(shù)精子凝集情況。
3、結(jié)果判斷
（1)頭部異常：有大頭、小頭、尖頭、雙頭、梨形頭、無(wú)定形頭及頭部邊緣不齊等。
（2)體部異常：有分支、雙支、體部腫脹甚至消失。
（3)尾部異常：有雙尾、卷曲尾、斷尾、尾部消失等。
[注意事項(xiàng)]
1、觀察精子形態(tài)的同時(shí)也要注意有無(wú)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等。
2、注意觀察有無(wú)未成熟的生殖細(xì)胞，如發(fā)現(xiàn)未成熟生殖細(xì)胞，應(yīng)計(jì)數(shù)200個(gè)生殖細(xì)胞（包括精子)，計(jì)算其未成熟生殖細(xì)胞百分率。
3、如果精子數(shù)＞10×109/L，可直接涂片檢查；如果＜10×109/L，則應(yīng)將精液離心15～20min后，取沉淀物涂片檢查。
4、衰老的精子體部也可膨大并有被膜，不宜列入異形精子。
一、陰道分泌物理學(xué)檢查
[目的]掌握陰道分泌物的理學(xué)檢查的方法及內(nèi)容。
[原理]通過(guò)理學(xué)檢查方法對(duì)新鮮陰道分泌物進(jìn)行檢查，以觀察其顏色和pH變化。
[器材]消毒棉拭子，pH試紙。
[標(biāo)本]新鮮陰道分泌物。
[操作]
1、觀察外觀 肉眼仔細(xì)觀察陰道分泌物的顏色。
2、測(cè)定酸堿度 用pH試紙檢測(cè)其酸堿度。
二、陰道分泌物顯微鏡檢查
[目的]掌握陰道分泌物顯微鏡檢查的方法及內(nèi)容。
[原理]利用顯微鏡對(duì)陰道分泌物濕片和染色涂片檢查，觀察其清潔度和有無(wú)特殊細(xì)菌及細(xì)胞等。
[器材]顯微鏡，載玻片。
[試劑]
1、2.5mol/L KOH溶液。
2、生理鹽水。
3、革蘭染液。
[標(biāo)本]新鮮陰道分泌物
[操作]
1、濕片檢查
（1)取陰道分泌物后滴加1滴生理鹽水，制成涂片。
（2)低倍鏡觀察后，再用高倍鏡檢查，根據(jù)上皮細(xì)胞、白細(xì)胞（或膿細(xì)胞)、桿菌、球菌的多少，判斷陰道清潔度。
（3)檢查清潔度的同時(shí)，高倍鏡觀察有無(wú)陰道毛滴蟲。
（4)于陰道分泌物涂片上加1滴2.5mol/LKOH，混勻后加蓋玻片，先用低倍鏡觀察言觀色，若發(fā)現(xiàn)有菌絲樣物，再換高倍鏡，檢查有無(wú)真菌。
2、染色涂片檢查
（1)取陰道分泌物涂片，自然干燥后，行革蘭染色。
（2)顯微鏡下檢查有無(wú)致病菌。
3、結(jié)果判斷 陰道分泌物清潔度結(jié)果判斷
[注意事項(xiàng)]
1、取材要準(zhǔn)確，并及時(shí)送檢。否則會(huì)導(dǎo)致陰道毛滴蟲死亡、淋病奈瑟菌自溶。
2、陰道清潔度檢查時(shí)，標(biāo)本必須新鮮，防止污染。
3、檢查陰道毛滴蟲時(shí)應(yīng)注意保溫。
4、濕片檢查陰性時(shí)，應(yīng)再用Wright染色或革蘭染色，一次陰性不能排除診斷。
