藥物分析實驗講義 (供藥學本科用) 皖南醫(yī)學院藥學系 二00六年十二月六日 緒 論 實驗?zāi)康?/B> 藥品是用于診斷、預(yù)防、治療疾病，增強體質(zhì)的一種特殊商品，藥品質(zhì)量好壞直接關(guān)系到用藥的安全、有效，關(guān)系到人的健康與生命安全。因此，為了確保用藥的安全、合理、有效，必須從藥品的研制、生產(chǎn)、供應(yīng)和使用等過程全面控制藥品質(zhì)量。 《藥物分析》是一門綜合性應(yīng)用學科，其實踐性很強。《藥物分析實驗》是運用各種科學方法、分析技術(shù)，研究和檢驗各種藥物(天然藥物、化學合成藥物、抗生素、生化藥物等)及其制劑質(zhì)量的實踐性課程，是《藥物分析》課程教學的重要組成部分。其內(nèi)容主要是各種分析方法在藥物分析中的實際應(yīng)用，此外，還包括藥品質(zhì)量標準的制訂以及分析方法評價等。 《藥物分析實驗》課程旨在培養(yǎng)學生的實際動手能力、書面表達能力以及科學思維能力，培養(yǎng)學生嚴肅認真、實事求是的科學態(tài)度，培養(yǎng)學生獨立開展藥物分析工作的能力。通過《藥物分析實驗》課程的教學，要求學生認真驗證理論課講授的相關(guān)藥物分析理論，加深對藥物分析學科基本理論和專業(yè)知識的認識與理解，熟悉《中國藥典》常用的分析方法和實驗技術(shù)的基本原理，正確掌握各種分析方法的操作技術(shù)，熟悉常用分析儀器的正確使用方法，為從事藥品質(zhì)量研究與檢驗、新藥研究開發(fā)、臨床藥物分析等工作奠定堅實的基礎(chǔ)。 實驗要求 扎實的基本操作技能是進行藥品質(zhì)量控制工作與科學研究的基本條件，學生應(yīng)該珍惜實驗課程的實際訓練機會，實驗過程中仔細、認真，勤動手，在整個藥物分析實驗課教學過程中，應(yīng)該做到： 1.通過實驗驗證藥物分析的基本理論，加深對專業(yè)知識的理解。 2.復習實驗教材中各類代表性藥物的分析方法，熟練掌握各種分析的操作技術(shù)。 3.培養(yǎng)獨立開展藥物分析的能力。 4.養(yǎng)成嚴肅認真的工作作風和實事求是的工作態(tài)度。 5.原始記錄是實驗報告的重要組成部分，養(yǎng)成尊重原始記錄的科學態(tài)度。 具體到每一節(jié)實驗課，參加實驗課教學的學生必須做到： 一、課前做好預(yù)習工作 課前應(yīng)復習理論課上講解過的實驗原理與操作要點，明確該次實驗的目的與要求。 預(yù)先熟悉實驗內(nèi)容、步驟、方法，推導實驗中涉及的計算公式。 盡量找出實驗可能的誤差來源及消除方法，預(yù)估實驗中可能發(fā)生的問題及處理辦法。 二、課中仔細認真操作 1.實驗中一定要確保安全。使用水、火、煤氣及易燃、易爆、有毒、腐蝕性試劑時應(yīng)特別小心。時刻注意防火、防爆。保證實驗室氣流通暢。發(fā)現(xiàn)事故苗頭(如聞到煤氣味、發(fā)現(xiàn)電路線上有火花、異常的焦糊味等)或發(fā)生事故時及時報告，不懂時千萬不要擅自處理。 2.開始實驗操作后，要隨身攜帶一本編有頁碼的實驗記錄本，實驗過程中，應(yīng)及時、準確、完整地記錄原始數(shù)據(jù)、現(xiàn)象及操作。實驗記錄應(yīng)忠于事實，如實地反應(yīng)實驗中的操作、現(xiàn)象、數(shù)據(jù)等，不得編造或篡改。實驗記錄不得用鉛筆書寫，可用鋼筆或圓珠筆書寫，要求字跡清楚。實驗記錄本絕對不準撕頁。實驗記錄本絕對不得涂改，涂改的原始記錄將視為無效，如實驗記錄有誤，以能看清原來寫錯的記錄為基礎(chǔ)，可在寫錯處打上雙橫線，在旁邊空白處寫上正確記錄。原始記錄應(yīng)直接記于實驗記錄本上，決不允許記在紙條上、稱量紙上、濾紙上、手掌上，也不允許記在其他本子上再謄寫，更不允許暫時記在腦子里等有空時一起記錄。 3.實驗中應(yīng)仔細、認真，要嚴格按照實驗規(guī)程操作，認真練習操作技術(shù)，細心觀察實驗現(xiàn)象，如實記錄原始數(shù)據(jù)，出現(xiàn)問題時及時咨詢代教教師。 4.愛護公物，節(jié)約使用，移物歸位。小心使用儀器，損壞儀器應(yīng)及時報損、登記，精密儀器用畢應(yīng)登記簽名。公用儀器、藥品或試劑應(yīng)在指定位置取用，不要拿回自己實驗臺處。殘液應(yīng)倒入指定的廢液缸中，切勿直接倒入水槽�？苫厥绽玫膹U溶劑應(yīng)回收到指定容器中。 5.實驗中注意避免試劑及藥品的污染。取用時仔細觀察標簽，取出的試劑與藥品不要再倒回原瓶，取用完畢應(yīng)隨手加蓋，不要蓋錯瓶蓋。若操作不當，發(fā)生試劑或藥品污染，應(yīng)按規(guī)定及時處理并立即報告老師。 6.實驗課不得曠課，未經(jīng)允許不得私下相互調(diào)課，實驗期間不得擅自離開實驗室；進行講義指定內(nèi)容以外的實驗或重做實驗須經(jīng)老師批準。 三、課后及時清理臺面，總結(jié)實驗 1.實驗完畢應(yīng)立刻清理：電子儀器關(guān)閉，拔去電源插頭，放于指定位置；玻璃儀器按要求洗凈后放回原處；剩余試劑藥品按規(guī)定處理，擦凈實驗臺面，洗液蓋好瓶蓋收放妥當；抹布、刷子洗凈置于原處，幾凳櫥柜整理歸位。經(jīng)老師同意后離開實驗室。 2.值日生應(yīng)負責整理公用試劑臺面及公用試劑，處理廢液缸中的廢液，打掃地面衛(wèi)生，清除垃圾，檢查水、電、煤、門窗等安全事宜，經(jīng)老師同意后離開實驗室。 3.認真總結(jié)實驗結(jié)果，得出相應(yīng)結(jié)論，按指定格式填寫實驗報告并于規(guī)定時間上交。 實驗室安全守則 在藥物分析實驗中，頻繁使用水、電、煤氣，經(jīng)常使用腐蝕性、易燃、易爆或有毒的化學試劑，大量使用易損的玻璃儀器，常常使用電子儀器，有時還會使用高壓氣體鋼瓶，為確保實驗正常進行，保證實驗人員的人身安全，在實驗過程中，必須嚴格遵守以下實驗室安全守則： 1.進入實驗室，應(yīng)著實驗服、戴實驗帽(長發(fā)者應(yīng)將長發(fā)攏于實驗帽內(nèi))，進行具有一定危險性的實驗(如氧瓶燃燒實驗)時，應(yīng)穿戴防護衣物(如防護眼鏡、防護面具、防護口罩、防護手套)。 2.嚴禁在實驗室內(nèi)飲食，吸煙；嚴禁將飲用水、食物帶入實驗室放置；嚴禁以實驗用容器代替水杯、餐具使用；任何試劑、藥品不能觸及皮膚，固體藥品應(yīng)以藥匙取用，不得用手抓取，任何試劑、藥品不能直接聞味，不得入口嘗試；實驗完畢，必須洗凈雙手。 3.進入實驗室后應(yīng)盡快熟悉實驗室環(huán)境，確定水、電、煤氣的閥門位置、掌握其開關(guān)方法。水、電、煤氣一經(jīng)使用完畢，應(yīng)立即關(guān)閉水龍頭、煤氣開關(guān)，拔掉電插頭。遇到停水時應(yīng)立即關(guān)閉水龍頭，以防來水后跑水。冷凝裝置使用完畢后，應(yīng)及時關(guān)閉冷卻水。使用電器設(shè)備時，應(yīng)特別仔細，切不可用潮濕的手或?qū)щ娢锲放鲇|電閘、電器開關(guān)及其他帶電儀器。已經(jīng)確定漏電的電器絕對不得使用，以免觸電。電器或?qū)Ь�著火時，首先應(yīng)立刻切斷電源，再行滅火，滅火可采用沙、二氧化碳滅火器或干粉滅火器，禁止使用水或泡沫滅火器等導電液體滅火。離開實驗室時，應(yīng)再次確認已關(guān)閉水、電、煤氣的開關(guān)。 4.酒精燈應(yīng)以火柴點燃，不得直接接火，以免酒精溢出引燃。點燃的火柴使用后立即熄滅。酒精燈使用完畢后，立刻用燈帽蓋上，不得用口吹滅。用試管加熱藥品時，管口不準朝向任何人，以免藥品噴出傷人。實驗過程中萬一發(fā)生火災(zāi)，不要驚慌，首先盡快切斷電源或燃氣源，再根據(jù)起火原因針對性滅火：①酒精及其他可溶于水的液體著火時，可用水滅火。②有機溶劑或油類著火時，絕對不能用水滅火，這反而會造成火勢蔓延，應(yīng)用沙土隔絕氧氣撲滅火焰。③衣服著火時，切忌奔跑，應(yīng)就地躺下滾動，同時用濕洗衣服在身上抽打滅火。如果發(fā)生燙傷，應(yīng)在實驗室簡單處理后去醫(yī)院醫(yī)治。但嚴重者應(yīng)立刻送醫(yī)院治療。 5.使用濃酸、濃堿及其他具有強烈腐蝕性的試劑時，應(yīng)特別小心，切勿濺在皮膚或衣服上，眼睛更應(yīng)注意保護。 6.一些有機溶劑(如乙醚、乙醇、丙酮、苯、三氯甲烷等)極易引燃，必須遠離明火與熱源(如電爐)。 7.使用玻璃儀器時應(yīng)注意輕拿經(jīng)放，以免破損造成傷害。 實驗一 巴比妥類藥物的鑒別及含量測定 一、目的要求 1.掌握巴比妥類藥物的化學結(jié)構(gòu)與分析方法的關(guān)系，正確鑒別和區(qū)別該類中常用藥物。 2.熟悉巴比妥類藥物的紫外分光光度法的含量測定。 二、儀器及試藥 （一)鑒別試驗 1.試劑：碳酸鈉，硝酸銀，濃硫酸，亞硝酸鈉，巴比妥，蒸餾水。 2.器材：玻棒，燒杯，量筒，標簽紙，藥物天平，稱量瓶，稱量紙，小鋼勺。 （二)巴比妥及含硫巴比妥區(qū)別試驗 1.試劑：硫酸銅，吡啶，巴比妥，蒸餾水。 2.器材：玻璃棒，燒杯，量筒，白口瓶，標簽紙，藥物天平，稱量瓶，稱量紙，小鋼勺。 三、實驗準備 1. 碳酸鈉試液：取一水合碳酸鈉12.5g或無水碳酸鈉10.5g,加水使溶解成100ml,即得。 2.硝酸銀試液：取硝酸銀17.5g，加水適量使溶解成1000ml，搖勻。置玻璃塞的棕色瓶中，密閉保存。 3. 加吡啶溶液（1→10):取吡啶1ml，加水稀釋至10ml，即得。 4. 銅吡啶試液：取硫酸銅4g，加水90ml溶解后，加吡啶30ml，即得。本液應(yīng)臨用新制。 5. 甲醛試液：可取用“甲醛溶液”。 6. 0.1mol/L氯化鉀溶液：取7.45g氯化鉀，加水1000ml,即得。 7. 氫氧化鈉飽和溶液：取氫氧化鈉適量，加水振搖使溶解成飽和溶液，冷卻后，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數(shù)日，澄清后備用。 8. 0.1mol/L氫氧化鈉溶液:取澄清的氫氧化鈉飽和溶液5.6ml，加新沸過的冷水使成1000ml。搖勻。 9. 硼酸－氯化鉀緩52667788.cn沖液(pH9.0):取硼酸3.09g,加0.1mol/L氯化鉀溶液500ml使溶解，再加0.1mol/L氫氧化鈉溶液210ml，即得。 四、實驗原理及方法 (一)鑒別 1．銀鹽反應(yīng) 巴比妥類藥物在適當?shù)膲A性溶液中，遇過量硝酸銀試液，即產(chǎn)生白色的二銀鹽沉淀。
2．銅鹽反應(yīng) 因巴比妥藥物分子中含有－CONHCONHCO－基團，可互變異構(gòu)成烯醇型，與銅鹽在堿性溶液中作用，產(chǎn)生類似雙縮脲的顏色反應(yīng)。與硫酸銅、吡啶的反應(yīng)式如下： 反應(yīng)后，巴比妥類藥物顯紫色或產(chǎn)生紫色沉淀。 (二) 巴比妥的含量測定 實驗原理：巴比妥類藥物如巴比妥在酸性介質(zhì)中幾乎不電離，無明顯的紫外吸收。但在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu)，因而可采用紫外分光光度法測定其含量。 實驗方法：取本品，精密稱定，加pH9.4的磷酸鹽緩沖溶液溶解并定量稀釋制成每1ml 中含10μg的溶液。照分光光度法（附錄Ⅳ A)，在240nm 的波長處測定吸收度，按巴比妥(C8H12N2O3)的吸收系數(shù)（ )為538計算，即得。 五、注意事項 1．注意選用適當儀器進行鑒別反應(yīng)。 2．銅鹽反應(yīng)操作中注意防止過量堿的干擾，供試品溶液中每加硫酸銅試液1 滴后，馬上觀察產(chǎn)生沉淀的顏色變化過程并及時記錄。 六、計算 巴比妥的百分含量： 式中，A為吸收度， 為百分吸收系數(shù)，l為溶液厚度。 七、思考題 1．常用哪些方法鑒別巴比妥類藥物？ 2．用紫外分光光度法分析巴比妥類藥物時，定性、定量的依據(jù)是什么？定量時為什么在不同pH值溶液中測定其吸收度？ 實驗二 藥品的雜質(zhì)檢查 一、目的要求 1.掌握一般雜質(zhì)檢查的目的和原理，熟悉雜質(zhì)檢查的操作方法。 2.了解某些藥物中特殊雜質(zhì)的檢查意義，并掌握其操作方法。 二、儀器及試藥 (一)葡萄糖中一般雜質(zhì)的檢查 （1)酸度及澄清度檢查 1.試劑：酚酞，氫氧化鈉，比色用氯化鈷，比色用硫酸銅，比色用三氯化鐵，蒸餾水。 2.器材：燒杯，藥物天平，標簽紙，稱量瓶，比色管，稱量紙，小鋼勺。 （2)氯化物及硫酸鹽的檢查 1.試劑：硝酸，硝酸銀，標準氯化鈉，鹽酸，氯化鋇，標準硫酸鉀，蒸餾水。 2.器材：燒杯，藥物天平，玻棒，比色管，水浴鍋，稱量紙。 (二)乙酰水楊酸中游離水楊酸的檢查 1.試劑：乙酰水楊酸，95%乙醇，鹽酸，硫酸鐵銨，水楊酸標準品，冰醋酸，蒸餾水。 2.器材：容量瓶，比色管，分析天平，量筒，玻璃棒，燒杯，吸量管，膠頭滴管。 三、實驗準備 1.酚酞指示液：取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，即得。 2.氫氧化鈉液（0.02mol／L)：取氫氧化鈉8.6g，加水使溶解成100ml，即得。 3.標準比色液：精密量取比色用氯化鉆液10ml，比色用三氯化鐵液30ml 與比色用硫酸銅20ml，加水稀釋成100ml 4.稀硝酸：取硝酸105ml，加水稀釋至1000ml，即得。本液含HNO3應(yīng)為9.5％～10.5％。 5.硝酸銀試液：取硝酸銀17.5g，加水適量使溶解成1000ml，搖勻。置玻璃塞的棕色玻璃瓶中，密閉保存。 6.標準氯化鈉溶液的制備:稱取氯化鈉0.165g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml相當于10μg的Cl)。 7.稀鹽酸：取鹽酸234ml，加水稀釋至1000ml，即得。本液含HCl應(yīng)為9.5％～10.5％。 8.25％氯化鋇溶液：取氯化鋇的細粉25g，加水使溶解成100ml，即得。 9.標準硫酸鉀溶液：稱取硫酸鉀0.181g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當于100μg的SO4)。 10.新制的稀硫酸鐵銨溶液：取1mol／L 鹽酸液1ml 加硫酸鐵銨2ml 后，再加水適量使成100ml。 11.水楊酸對照液：精密稱取水楊酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，搖勻，再加水使成1000ml，搖勻。 四、實驗原理及方法 (一)葡萄糖中一般雜質(zhì)的檢查 1．溶液的澄清度與顏色： 取本品25g，加熱水溶解后；放冷，用水稀釋到50ml，溶液應(yīng)澄清無色，如顯色，與對照液（精密量取比色用氯化鉆液10ml，比色用三氯化鐵液30ml 與比色用硫酸銅20ml，加水稀釋成100ml)2.0ml 加水稀釋至50ml 比較，不得更深。 2．氯化物： 取本品0.6g，加水溶解使成25ml（如顯堿性可滴加硝酸使成中性)，再加稀硝酸10ml。溶液如不澄清，濾過，置50ml 納氏比色管中，加水使成約40ml,加硝酸銀試液1ml，用水稀釋成50ml 搖勻，在暗處放置5 分鐘。如發(fā)生混濁，與標準氯化鈉溶液一定量制成的對照液（取標準氯化鈉溶液10μg／ml)6ml 置50ml 的納氏比色管中，加稀硝酸10ml ，用水稀釋成約40ml。加硝酸銀試液1ml，再加水適量使成50ml，搖勻，在暗處放置5 分鐘比較不得更濃（0.01%)。 3．硫酸鹽： 取本品2g，加水溶解使成20ml（如顯堿性，可滴加稀鹽酸使成中牲)，溶液如不澄清濾過置50ml 納氏比色管中，加水適量稀釋使成25ml，再加稀鹽酸1ml 置30～50 ℃水浴中保溫10 分鐘，加25％氯化鋇溶液3ml,搖勻；放置10 分鐘，如發(fā)生混濁，與標準硫酸鉀溶液一定量制成的對照液（取標準硫酸鉀溶液100ug／ml)2ml 置50ml 納氏比色管中，加水稀釋使成25ml，加稀鹽酸lml，置30～50℃ 水浴中保溫10 分鐘，加25％氯化鋇溶液3ml，搖勻，放置10 分鐘比較，不得更濃（0.01％)。 (二)乙酰水楊酸中游離水楊酸的檢查 1.合成工藝及水楊酸的來源 (1)合成工藝： （2)水楊酸的來源：由生產(chǎn)過程中乙酰化不完全或貯藏過程中水解產(chǎn)生。水楊酸對人體有毒性，而且分子中酚羥基在空氣中被逐漸氧化成一系列醌型有色物質(zhì)，如淡黃、紅棕甚至深棕色，使阿司匹林成品變色。 2.檢查原理：利用阿司匹林結(jié)構(gòu)中無酚羥基，不能與高鐵鹽作用，而水楊酸則可與高鐵鹽反應(yīng)生成紫堇色，與一定量水楊酸對照液生成的色澤比較，從而控制游離水楊酸的限量。 3.方法：取本品0.1g．加乙醇1ml 溶解后，加冷水適量使成50ml 立即加新制的稀硫酸鐵銨溶液（取1mol／L 鹽酸液1ml 加硫酸鐵銨2ml 后，再加水適量使成100ml)，搖勻，30 秒鐘內(nèi)。如顯色與對照液（精密稱取水楊酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，搖勻，再加水使成1000ml，搖勻)精密量取lml，加乙醇1ml，水48ml 與上述新制的硫酸鐵銨溶液1ml，搖勻比較。不得更深（0.1%)。 五、注意事項 1.納氏比色管的選擇與洗滌： (1)比色或比濁操作，一般均在納氏比色管中進行，因此在選用比色管時，必須注意使樣品與標準管的體積相等，玻璃色質(zhì)一致，最好不帶任何顏色，管上刻度均勻，如有差別，不得相差2mm。 (2)比色管洗滌時避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁上劃出條痕，影響比色或比濁。 2.平行原則：比色或比濁時，樣品液與標準液的實驗條件應(yīng)盡可能一致，平行操作。 3.嚴格按操作步驟進行試驗，注意各種試劑的加入順序。如氯化物的檢查時，加適量蒸餾水使成約40ml后，再加入AgNO3試液。 4.比色、比濁前應(yīng)使比色管內(nèi)試劑充分混勻，主要是利用手腕轉(zhuǎn)動360。的旋轉(zhuǎn)操作來完成。比色方法是將兩管同置于白色背景上，從側(cè)面觀察。比濁方法是將兩管同置于黑色或白色背景上，自上而下觀察。 六、計算 限量計算： 式中V標準為標準液體積，C標準為標準液濃度，W樣為樣品取樣量 七、思考題 1.本實驗中檢查的雜質(zhì)屬于哪種雜質(zhì)？檢查的目的是什么？ 2.氯化物的檢查中，為什么宜在硝酸酸性溶液中進行？ 3.硫酸鹽檢查法適宜比濁濃度范圍？供試品溶液為何加鹽酸成酸性？ 4.乙酰水楊酸中游離水楊酸檢查的基本原理是什么？ 5.根據(jù)本實驗操作，計算葡萄糖中氯化物、硫酸鹽的雜質(zhì)限量規(guī)定及乙酰水楊酸中水楊酸的限量。 實驗三 鹽酸普魯卡因注射液的鑒別、檢查 一、目的要求 1、掌握鹽酸普魯卡因注射液的鑒別及檢查方法。 2、了解鹽酸普魯卡因鑒別中的各種現(xiàn)象。 二、儀器及試藥 1．試劑：鹽酸普魯卡因注射液，對氨基苯甲酸對照品，二次蒸餾水，紅色石蕊試紙，10%氫氧化鈉溶液，對二甲氨基苯甲醛溶液。 2．器材：電分析天平，錐形瓶，薄層板，薄層色譜展開缸，變色噴霧瓶。 三、實驗準備： 1.10%氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉10g，加水至100ml即得。 2.對氨基苯甲酸對照品：加乙醇制成每1ml 中含30μg 的溶液。 3.展開劑：苯－冰醋酸－丙酮－甲醇（14：1：1：4) 4.對二甲氨基苯甲醛溶液：2%對二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml 制成。 四、實驗原理及方法 （一)鹽酸普魯卡因的鑒別：取本品約0.1g，加水2ml 溶解后，加10％氫氧化鈉溶液1ml,即生成白色沉淀；加熱，變?yōu)橛蜖钗�；繼續(xù)加熱，發(fā)生的蒸氣能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變?yōu)樗{色；熱至油狀物消失后，放冷，加鹽酸酸化，即析出白色沉淀。 (二) 鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸的檢查 精密量取本品，加乙醇稀釋使成每1ml 中含鹽酸普魯卡因25mg 的溶液，作為供試品溶液。另取對氨基苯甲酸對照品，加乙醇制成每1ml 中含30μg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層層析法（2005 版藥典附錄)試驗，吸收上述兩種溶液各lμl, 分別點于合有羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H 薄層板上；用苯－冰醋酸－丙酮－甲醇（14：1：1：4)為展開劑，展開后取出晾干，用對二甲氨基苯甲醛溶液（2%對二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml 制成)噴霧顯色，供試溶液如顯與對照品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點，與對照品溶液的主班點比較，不得更深（1.2%)。 五、注意事項 1.點樣量不宜過多，否則會拖尾分離不好。 2.展開劑不要加得過多，起始線切勿浸入展開劑中。 3.展開槽與薄層板用展開劑蒸氣預(yù)飽和，消除邊緣效應(yīng)。 六、計算 限量計算： 式中V標準為標準液體積，C標準為標準液濃度，W樣為樣品取樣量 七、思考題 1.解釋鹽酸普魯卡因鑒別中產(chǎn)生各種現(xiàn)象的原因。 2.什么叫邊緣效應(yīng)？ 實驗四 水楊酸鈉的含量測定（雙相滴定法) 一、目的要求 掌握雙相滴定法的基本原理操作。 二、儀器及試藥 1．試劑：水楊酸鈉，二次蒸餾水，乙醚，甲基橙指示劑，0.1mol/L鹽酸； 2．器材：電分析天平，分液漏斗，具塞錐形瓶，酸堿滴定裝置，石英二次水蒸餾器。 三、實驗準備 1.甲基橙指示液：取甲基橙0.1g，加水100ml使溶解，即得。 2.鹽酸滴定液(0.1mol/L)：取鹽酸9.0ml， 加水適量使成1000ml，搖勻�！ � 3.鹽酸滴定液(0.1mol/L)的標定：取在270～300℃干燥至恒重的基準無水碳酸鈉約0.15g，精密稱定，加水50ml使溶解，加甲基紅－溴甲酚綠混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色時，煮沸2分鐘,冷卻至室溫，繼續(xù)滴定至溶液由綠色變?yōu)榘底仙�。�?ml鹽酸滴定液(0.1mol/L)相當于5.30mg的無水碳酸鈉。根據(jù)本液的消耗量與無水碳酸鈉的取用量，算出本液的濃度，即得。 4.甲基紅－溴甲酚綠混合指示液:取0.1％甲基紅的乙醇溶液20ml，加0.2％溴甲酚綠的乙醇溶液30ml，搖勻，即得。 四、實驗原理及方法 (一)原理：本品為白色顆粒，粉未或結(jié)晶性粉末，在水中易溶。本實驗采用在水-醚二相中，用標準酸液直接滴定。由于滴定過程中生成的游離酸不溶解于水而妨礙終點的觀察指示劑的顏色變化。因此，將精密稱量的樣品置于分液漏斗中，加水溶解后，以甲基橙為指示劑，加入有機溶劑，例如乙醚等，邊用鹽酸標準溶液滴定，邊強力振搖。這樣，將滴定中產(chǎn)生的水楊酸不斷地萃取入有機溶劑中，同時降低水楊酸的離解。為使滴定完全，最后將有機層分出用水洗滌，使可能混溶于有機層中的鹽洗出，洗液并入水層，再加入有機溶劑，繼續(xù)以鹽酸標準液滴定至水層顯持續(xù)的橙紅色。 (二)方法：取本品約0.3g，精密稱定，置分液漏斗（125ml)中，加水15ml，乙醚30ml與甲基橙指示液3 滴，用鹽酸滴定液(0.1mol/L)滴定，隨滴隨振搖，至水層顯橙紅色，分取水層，置具塞錐形瓶中，乙醚層用水5ml洗滌，洗液并入錐形瓶中，加乙醚20ml，繼續(xù)用鹽酸滴定液(0.1mol/L)滴定，隨滴隨振搖，至水層顯持續(xù)的橙紅色，即得。（每1ml的鹽酸滴定液(0.1mol/L)相當于14.4mg的C7H5O3Na)。 五、注意事項 1.減重法稱量時，樣品傾出后直接置于分液漏斗內(nèi)。而漏斗口小，樣品不易全部轉(zhuǎn)移，可在漏斗口上置一小漏斗，使樣品不受損失。 2.為了防止先加樣品后加入水的操作步驟會使樣品積聚在分液漏斗底部，而不易全部溶解，可以先加入少量水后，再稱量樣品。 3.滴定過程中，振搖要充分。 4.分液漏斗放置至水層與醚層分層后，再分取水層，注意將水層全部分出，以免造成損失。 5.本品使用大量乙醚，注意防災(zāi)等安全，實驗完畢后，廢液進行回收，切勿倒掉。 6.本次實驗在分液漏斗中進行，事先應(yīng)做好檢查，操作小心，以防溶液漏出。 六、計算 本品為原料藥，其含量測定計算公式為： 式中，F為所配制滴定液的濃度校正因數(shù)，T為滴定度，V為供試品消耗滴定液的毫升數(shù)， 為供試品的稱量重量。 七、思考題 1．何謂雙相滴定法？ 2．雙相滴定操作中，有哪些平行原則需要遵循？ 3．雙相滴定法適用于哪些藥物的定量分析？ 4．水楊酸鈉的含量測定，采用鹽酸標準溶液直接滴定時，有什么缺點？ 實驗五 乙酰水楊酸的兩步滴定法 一、目的要求 1．掌握乙酰水楊酸兩步滴定法測定含量的依據(jù) 2．掌握兩步滴定法測定乙酰水楊酸含量的方法 二、儀器和試劑 （一)試劑：乙酰水楊酸、氫氧化鈉、硫酸、酚酞指示劑、乙醇 （二)器材：普通天平、分析天平、錐形瓶、稱量瓶、稱量紙、玻璃棒、酸式滴定管、堿式滴定管。 三、實驗準備 1．0.1mol/LNaOH滴定液的配制 2．0.05mol/LH2SO4標準溶液的配制 3．酚酞指示劑的配制 四、基本原理及方法 （一)基本原理 由于乙酰水楊酸在生產(chǎn)過程中，可能有水解，產(chǎn)生水楊酸和醋酸，另外本品劑中還加入枸櫞酸和酒石酸作為穩(wěn)定劑，為避免這些酸性物質(zhì)的干擾采用兩步滴定法。 第一步：用NaOH中和乙酰水楊酸、水楊酸、醋酸、枸櫞酸、酒石酸。 第二步：用過量的NaOH使乙酰水楊酸鹽水解為水楊酸鈉和醋酸鈉，然后用標準硫酸液滴定剩余的NaOH，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。
（二)試驗方法 取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于阿司匹林0.3g)，置錐形瓶中，加中性乙醇（對酚酞指示液顯中性)20ml，振搖使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3 滴，滴加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)至溶液顯粉紅色，再精密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加熱15分鐘并時時振搖，迅速放冷至室溫，用硫酸滴定液(0.05mol/L) 滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml 氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當于18.02mg 的C9H8O4。 五、注意事項 1．分析天平的正確使用 2．減重法稱量的正確操作 3．滴定管的正確操作 4．為了使乙酰水楊酸易于溶解，以及防止在水溶液中滴定時酯的水解，因而用中性乙醇為溶劑進行滴定。 5．第一步中和時，為了避免樣品的水解，滴定時應(yīng)注意溫度在20℃以下，并在不斷攪拌下（防止局部過大)較快的滴定。 六、含量計算公式 ASA的標示量%= Vo：空白試驗消耗硫酸滴定液體積（ml)；V：樣品測定試驗消耗硫酸滴定液體積(ml)；F：硫酸滴定液濃度校正因數(shù)；T：滴定度；W：供試品片粉取樣量(g)； ：平均片重量（g)。 七、思考題 1．如何配制中性乙醇，為什么要用中性乙醇？ 2．在中和過程中為何要迅速滴定并不斷振搖？ 實驗六 雙波長等吸收點法測定速潔舒洗劑中 醋酸氯己啶的含量 一、目的要求 1. 掌握雙波長分光光度法的基本原理，復方制劑不經(jīng)分離直接測定各組分含量的方法。 2. 熟悉單波長型分光光度計進行雙波長法測定。 二、儀器及試藥 替硝唑、醋酸氯己啶、紫外分光光度計 三、實驗準備 速潔舒洗液：替硝唑(TN)0.2g，醋酸氯已啶(CA)0.2g蒸餾水加至1000ml,混勻，即得。 四、實驗原理及方法 (一)實驗原理： (1)波長的選擇：在待測組分（a)的最大吸收波長（測定波長，l1)處測定待測組分和干擾組分（b)吸收度的總和；另選一適當波長（參比波長，l2)測定吸收度，并使干擾組分在測定波長和參比波長處的吸收度相等，即 ，而待測組分在這兩個波長處吸收度的差值足夠大。 （2)定量依據(jù) 樣品在二波長下吸收度差值（DA)：
即，吸收度差值（DA)僅與待測組分的濃度有關(guān)，而與干擾組分無關(guān)，干擾組分的干擾被消除。 （3)基本條件：① 干擾組分在兩個波長處吸收度相等(ΔA=0)，以消除其干擾。 ② 待測組分在兩個波長的ΔA足夠大，以滿足定量分析的要求。 ③ 波長λ1、λ2應(yīng)選在吸收曲線的平緩處，以減小測定誤差。 (4)速潔舒洗液的紫外光譜：分別配制10mg·L-1的替硝唑，醋酸氯己啶溶液，以蒸餾水為空白進行紫外掃描，結(jié)果顯示，醋酸氯己啶在波長253nm處有吸收峰，替硝唑在此有等吸收點，故可用雙波長等吸收點法測定醋酸氯己啶的含量。 (二) 實驗方法： 1.標準曲線的制作： 精密稱取醋酸氯己啶對照品適量(如：0.0192g)溶于100ml量瓶中并稀釋至刻度，分別量取2.0，3.0，3.5，4.5，5.0，5.5ml于50ml量瓶中并稀釋至刻度，分別在波長253nm、波長273nm處測定吸收度，求ΔA，并計算其回歸方程。 2.樣品的測定：精密量取本品2ml于50ml量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，按分光光度法于波長253nm，273nm處測吸光度。按回歸方程計算含量。 五、注意事項 當吸光度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位時，波長的微小變化可能對測定結(jié)果造成顯著影響，故應(yīng)注意測試條件的一致性。 六、計算 根據(jù)所求得的回歸方程計算醋酸氯己啶的含量。 七、思考題 1、雙波長等吸收點法的基本條件？ 2、雙波長等吸收點法定量的依據(jù)是什么？ 實驗七 硫酸阿托品注射液的含量測定(酸性染料比色法)
一、目的要求 掌握酸性染料比色法測定生物堿制劑的基本原理及操作。 二、試劑與器材 1．試劑：硫酸阿托品、溴甲酚綠、氯仿、蒸餾水。 2．器材：量筒、分析天平、容量瓶(25，50，100ml) 、2ml吸量管、紫外-可見分光光度計。 三、實驗準備 1．對照品溶液的制備：精密稱取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品對照品25mg，置25 ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5.0ml，置100ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，即得（每1ml中含硫酸阿托品約50μg)。 2．供試品溶液的制備：精密量取本品適量（約相當于硫酸阿托品2.5mg)，置50ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得(每1ml中含硫酸阿托品約50μg)。 3．溴甲酚綠：取溴甲酚綠50mg與鄰苯二甲酸氫鉀1.021mg，加0.2mol/L鹽酸溶液1.6ml使溶解后，加水稀釋成100ml，必要時過濾。 四、原理與方法 1．原理：在pH3.6 的緩沖液中，硫酸阿托品的陽離子（BH＋)與溴甲酚綠的陰離子（In)定量結(jié)合成有色絡(luò)全物（BH＋In－)，用氯仿提取，在波長420nm處測定吸收值，并與標準品按同法對比求得其含量。 2．方法：精密量取對照品溶液與供試液各2.0ml，分別置于預(yù)先加入10ml氯仿的25ml 分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液2.0ml，振搖提取2分鐘后，靜置使分層(時間約1小時)，分取澄清氯仿層，移至1cm吸收池，以2ml水按同法操作所得的氯仿液為空白，在420nm的波長處分別測定吸收度，計算并將結(jié)果與1.027相乘(標示量為mg/ml，本品應(yīng)為標示量的90.0～110.0%)。 五、準意事項 1．本實驗所用分液漏斗必須干燥無水。 2．本實驗所需標準溶液、試劑及溶劑等均應(yīng)用吸量管精密量取。 3．標準品與供試品均應(yīng)平行操作，振搖與放置時間應(yīng)一致。 4．分取氯仿層測定時，初濾液應(yīng)棄去（約1ml)。所取氯仿層必須澄清透明不得混有水珠。 六、計算 七、思考題 1．酸性染料比色法的操作要點有哪些？影響測定的主要因素有哪些？ 2．本法在操作過程中為什么要嚴防水分混入有機溶劑中？ 實驗八 鹽酸嗎啉胍的非水堿量法
一、目的要求 1．通過學習鹽酸嗎啉胍的非水堿量法，掌握非水溶液滴定法的原理和操作。 2．掌握生物堿鹽酸鹽進行非水滴定時的計算公式。 二、試劑與器材 1．試劑：鹽酸嗎啉胍，冰醋酸，醋酸汞，結(jié)晶紫，高氯酸。 2．器材：分析天平，酸式滴定管，錐形瓶，量筒，膠頭滴管。 三、實驗準備 1．高氯酸滴定液的標定：取0.75g于105℃ ~110℃電烘箱中干燥至恒重的基準試劑鄰苯二甲酸氫鉀，置于干燥錐形瓶中，加入50mL乙酸，溫熱溶解，加入結(jié)晶紫指示劑（5g/L)，用配制好的高氯酸溶液滴定至溶液由紫色變?yōu)樗{色（微帶紫色)。已知每lml高氯酸滴定液(0.1mol／L)相當于20.42mg的鄰苯二甲酸氫鉀，求高氯酸滴定液的濃度。 2．醋酸汞試液：取醋酸汞5g，研細，加溫熱的冰醋酸使溶解成100ml，即得。 3．結(jié)晶紫指示液：取結(jié)晶紫0.5g，加冰醋酸100ml使溶解，即得。 四、原理與方法 本品為嗎啉胍的鹽酸鹽。按干燥品計算，含C6H13N5O﹒HCl不得少于98.5%。 取本品約0.1g，精密稱定，加冰醋酸20ml，微熱溶解后，放冷，加醋酸汞試液5ml，結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸液(0.1mol/L)滴定，近終點時，劇烈振搖至沉淀析出，再滴定至藍綠色，并將滴定結(jié)果用空白實驗校正，即得，每1ml的高氯酸液(0.1mol/L)相當于10.38mg的C6H13N5O.HCl。 五、計算 公式：嗎啉胍標示量(%)= V-滴定嗎啉胍樣品消耗高氯酸的體積(ml)； V0-空白實驗消耗高氯酸的體積(ml)； m-樣品的質(zhì)量(mg)。 六、注意事項 1．本實驗應(yīng)用10ml滴定管進行滴定，以消耗高氯酸8ml為宜，故需事先估算出最大稱樣量。 2．所用儀器、藥品不應(yīng)含水，水分的存在影響測定結(jié)果的準確度。因此，實驗前應(yīng)將所用儀器洗凈并烘干；實驗方法中，如以較大量的酸酐代替冰醋酸為溶劑時(易氧化的樣品除外)可以提高終點的靈敏度。 3．滴定時，滴定速度不要太快，太快時，粘附在滴定管內(nèi)壁上的溶液還未完全流下，終點的讀數(shù)易產(chǎn)生誤差。 4．高氯酸標準溶液應(yīng)注意其穩(wěn)定性。 由于所用的溶劑為冰醋酸，具有揮發(fā)性，而且膨脹系數(shù)也較大，所以溫度和貯存條件都可影響標準液的濃度。若滴定樣品與標定標準液時的溫度有差別，則需重新標定或按下式將標準溶液的濃度加以校正。 如果上述兩種溫度(t0與t1)相差太大(超過10℃)或貯存時間太久超過30天，則必須在臨用前重新標定。 七、思考題 1．加入醋酸汞的目的是什么？ 2．非水堿量法的基本原理是什么？ 3．非水滴定法的操作要點有哪些？ 4．請闡明本實驗中滴定度的由來。 實驗九 鹽酸嗎啉胍片的紫外分光光度法 一、目的要求 1．掌握紫外分光光度法測定鹽酸嗎啉胍的方法和含量計算方法 2．學習紫外分光光度法的一般操作步驟。 3．掌握紫外分光光度法中工作方程的制備方法。 二、試劑與器材 1．試劑：鹽酸嗎啉胍標準品，鹽酸嗎啉胍片劑。 2．器材：紫外分光光度計，電子天平，容量瓶，吸量管。 三、原理與方法 1．工作方程的繪制 取鹽酸嗎啉胍標準品約0.1g，精密稱定，置500ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度。精密量取1、2、3、4、5、6、7、8ml分置8個100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度。以水為空白，在273nm波長處測定吸光度，以吸光度對濃度進行一元回歸得工作方程。 2．樣品的測定 取本品10片，精密稱定，研細，取本品細粉適量(約相當于鹽酸嗎啉胍50mg)精密稱定，置100ml容量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度。濾過，棄初濾液(約20ml)，取續(xù)濾液1ml置100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。以水為空白，在273nm波長處測定吸光度，代入工作方程計算含量。 四、計算 測定出樣品吸光度值后，將其代入工作方程并計算出濃度C，然后按下式計算嗎啉胍標示量％ C：為計算出的濃度(g/ml) D：稀釋倍數(shù) W樣：為稱取樣品量（g) V：為將W樣(g)樣品溶解成的準確體積（ml) S標：為標示量（g/片) n：為所取片個數(shù) Wn：為n個片的總重量 五、思考題 片粉溶解后應(yīng)過濾，實驗操作過程中可否省略此步驟？為什么？ 實驗十 氨基比林的pH指示劑吸光度比值法
一、目的要求 1. 掌握pH指示劑吸光度比值法測定藥物含量的基本原理。 2. 熟悉測定氨基比林的基本操作方法。 二、試劑與器材 1．試劑：氨基比林，鹽酸標準液，溴酚蘭，無水乙醇。 2．器材：紫外分光光度計，電子天平，燒杯，容量瓶， 三、實驗準備 溴酚蘭試液：取0.05g溴酚蘭, 溶于乙醇, 用乙醇稀釋至100ml。 四、原理與方法 原理：pH指示劑吸光度比值法是中和法與分光光度法相結(jié)合的一種差示定量法，本法不需測得滴定終點時標準溶液的體積，而是一次加入定量標準溶液和指示劑，在pH指示劑堿式色和酸式色最大吸收λ1和λ2處(λ1<λ2)測定吸光度，以簡單的數(shù)字處理計算含量的一種快速分析方法。 在等當點附近，可在指示劑(溴酚蘭)堿式色和酸式色最大吸收波長λ1，λ2處(λ1<λ2)測定吸光度A1、A2。求得吸光度比值r=A1/(A1+A2)；隨著溶液pH值的變化，溴酚蘭在同一波長處的吸光度有很大變化，因此r也有很大變化。從溴酚蘭指示劑r～pH關(guān)系曲線可見，在某一pH區(qū)域內(nèi)r隨著pH值的變化而發(fā)生急劇變化，曲線斜率最大，幾乎成直線關(guān)系。因此，在等當點附近pH很小的變化即可引起r值較大變化。 氨基比林為吡唑酮類藥物，其吡唑酮環(huán)上的C4上的二甲氨基具弱堿性，在水溶液中雖可用標準酸液直接滴定，但突躍不明顯，等當點時pH為2.7。利用pH指示劑吸光度比值法，可進行測定。測定選用溴酚蘭為指示劑，其酸式色與堿式色吸收光譜有顯著差異，前者最大吸收波長在437nm，后者最大吸收波長在519nm，在等當點附近即使X(V等/V)很小的變化，也能引起r[即A2/(A1+A2)]顯著變化。因此可利用r～X之間的關(guān)系，可預(yù)先繪制一系列r～X工作曲線。當進行樣品測定時，只需測出該樣品在一定條件下的r值，再由r～X關(guān)系表中查出對應(yīng)的X值即可按下式計算出樣品的百分含量。 方法：取本品(干燥品)1.1475g·f～1.1710g·f (f為標準溶液的濃度系數(shù))于小燒杯中精密稱定，準確加入0.5mol/L鹽酸標準溶液10ml，溶解后轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，加入溴酚蘭試液(0.05%無水乙醇溶液)1ml，加水稀釋至刻度，混勻，以此液作為供試液，用水作空白液，在437nm測得吸光度為A1，在591nm測得吸光度為A2，根據(jù)r= A1/(A1+A2)求出吸光度比值r。再從r～X曲線中求X值。 T為滴定度：1ml鹽酸液(0.5mol/L)相當于0.1156g氨基比林。 附：r～X關(guān)系表 五、注意事項 1． 六、計算 七、思考題 1． 實驗十一 HPLC法測定雙黃連口服液的含量 一、目的要求 1．掌握高效液相色譜法測定中藥制劑有效成分的原理。 2．了解高效液相色譜法在藥物分析中應(yīng)用的一般方法。 二、試劑與器材 1．試劑：雙黃連口服液，黃芩苷對照品，綠原酸對照品，連翹苷對照品，十八烷基硅烷鍵合硅膠，甲醇，冰醋酸。 2．器材：液相色譜儀，容量瓶。 三、原理與方法 黃芩 照高效液相色譜法測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-冰醋酸（50:50:1)為流動相；檢測波長為274nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于1500。 對照品溶液的制備：精密稱取黃芩苷對照品10mg，置100ml容量瓶中，加50%甲醇適量，置水浴中振搖使溶解，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含黃芩苷0.1mg)。 供試品溶液的制備：精密量取裝量項下的本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理20分鐘，放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。 本品每支含黃芩按黃芩苷(C21H18O11)計，不得少于80mg。 金銀花 照高效液相色譜法測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-冰醋酸（20:80:1)為流動相；檢測波長為324nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于6000。 對照品溶液的制備：取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加水制成每1ml中含40mg的溶液，即得。 供試品溶液的制備：精密量取本品2ml，置50ml棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。 測定法：分別精密吸取對照品溶液10μl與供試品溶液10-20μl，注入液相色譜儀，測定即得。 本品每1ml含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計，不得少于0.60mg。 連翹：照高效液相色譜法測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（25：75)為流動相；檢測波長為278nm，理論板數(shù)按連翹苷峰計算不低于6000。 對照品溶液的制備 取連翹苷對照品適量，精密稱定，加50甲醇制品每1ml含60μg的溶液，即得。 供試品溶液的制備 精密量取本品1μl，置中性氧化鋁柱（100-200目，6g，內(nèi)徑1cm)上，用70％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘渣加50％甲醇適量，溫熱使溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。 本品每1ml含連翹以連翹苷(C29H36O25)計，不得少于0.30mg。 四、計算 每支含黃芩苷(C21H18O11) = ms-黃芩苷標準品的質(zhì)量； Ai-樣品中黃芩苷的峰面積； As-黃芩苷標準品的峰面積； V-雙黃連的裝量。 每1ml含綠原酸(C16H18O9)= Cs-綠原酸標準品的濃度； Ai-樣品中綠原酸的峰面積； As-綠原酸標準品的峰面積； Vs-綠原酸標準品的進樣量； Vi-供試品的進樣量。 每1ml含連翹以連翹苷(C29H36O25)：計算(略) 五、注意事項 1． 六、思考題 實驗十二 葡萄糖注射液的旋光分析法
[C6H12O6·H2O＝198.17] 一、目的要求 1．掌握旋光法測定葡萄糖含量的基本原理和方法。 2．學會正確使用旋光儀。 二、基本原理 本品是葡萄糖的滅菌水溶液。葡萄糖的分子結(jié)構(gòu)中五個碳（C*)都是手性碳原子，具有旋光性。當直線偏振光通過該具有光學活性的化合物溶液時，能引起旋光現(xiàn)象，使偏振光的平面向左或向右旋轉(zhuǎn)。此種旋轉(zhuǎn)在一定條件下，有一定的度數(shù)，稱為旋光度。旋光度（α)與溶液的濃度（c)和偏振光透過溶液的厚度（l)成正比。當偏振光透過厚1dm并每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時，在一定波長與溫度下測定的旋光度稱為比旋度[α]tD，即[α]tD＝α／lc。式中，D為鈉光譜的D線（589.3nm)，t為測定時的溫度。葡萄糖的比旋度[α]tD＝＋52.75度。所以測定待測葡萄糖液旋光度即可求得其含量。 三、實驗方法 精密稱取本品適量（約與葡萄糖10g相當)，置100ml 量瓶中，加氨試液0.2ml[10%或10%（g/ml)以下規(guī)格的本品可直接取樣測定]，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置10分鐘，得供試液。取出旋光計的測定管，用供試液沖洗數(shù)次，緩緩注入供試液適量（注意勿使發(fā)生氣泡)，加蓋密封后，置于旋光計內(nèi)，緩緩旋轉(zhuǎn)檢偏鏡檢視，至視野中均勻明亮，讀取刻度盤上表示的度數(shù)，即得供試液的旋光度，使偏光向右旋轉(zhuǎn)者（順時針方向)為左旋，以“－”符號表示，用同法讀取旋光度三次，取其平均數(shù)按同法測定蒸餾水的讀數(shù)為空白，測得的旋光度（α)與1.0426相乘，即得100ml供試液中含有的C6H12O6·H2O的重量(g)。 藥典規(guī)定含葡萄糖(C6H12O6·H2O)應(yīng)為標示量的95.0~105.0%。 四、操作要點及注意事項 1．配制供試液后，要靜置10分鐘，以達到平衡后才能測定。10％和5％的葡萄糖注射液無需稀釋，可以直接取樣測定。 2．供試液測定時的溫度必須調(diào)節(jié)至25℃，否則影響比旋度，致使測定結(jié)果不準確。 3．測定管兩端的圓玻片，為光學玻璃片，測定前應(yīng)小以用軟紙擦拭，以防磨損。 4．測定管洗凈后，應(yīng)用供試液體蕩洗數(shù)次，以確保濃度的一致。 5．供試液體應(yīng)緩緩加入，不能有氣泡，否則應(yīng)重新加入。加了液體后，兩頭密封時勿忘加墊橡皮圈，以免泄漏。 6．測定時先調(diào)整焦距，俟視野最清楚時，緩慢旋轉(zhuǎn)檢偏鏡，前后多試幾次，直至視中均勻明亮。以同法讀取三次讀數(shù)取其平均值。 7．測定完畢，測定管必須立即洗滌，以避免兩頭襯墊的橡皮圈因接觸溶劑而發(fā)粘。用綢布或擦鏡紙拭凈鏡面的灰塵、油污，以保持清潔，避免沾污，最后用布套將光學系統(tǒng)罩上。 8．鈉光燈有一定使用壽命，連續(xù)使用時間不宜超過2 小時。 二、數(shù)據(jù)處理 據(jù) 式中[α]25D為c=1g/ml、l=1dm時的旋光度（α) 所以 100ml供試液中無水葡萄糖的克數(shù)為 即100ml供試液中含水葡萄糖的克數(shù)為
五、實驗后思考 該旋光法能否適用于葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖的分析？為什么？ 實驗十三 差示分光光度法測定苯巴比妥片的含量 （設(shè)計性實驗) 一、實驗的目的與要求： 掌握差示分光光度法消除干擾的原理和含量測定的方法 熟悉差示分光光度法測定波長選擇的幾種方法 二、實驗設(shè)計性要點： 1．根據(jù)巴比妥類藥物的紫外吸收光譜，設(shè)定對照溶液和待測溶液的濃度。 2．在3種不同pH值的溶液中苯巴比妥的濃度必須相等。 3．根據(jù)原光譜圖有4種組合可供選擇，比較各種組合下的差示光譜圖。選擇其中一種較好的組合進行苯巴比妥片的含量測定。 4．根據(jù)選定的差示光譜圖，選擇測定波長。 5．對照法測定含量。 三、主要實驗儀器設(shè)備： 紫外分光光度計（掃描型、3臺) 托盤天平（感量0.1g、10架)，分析天平（萬分之一、5臺) 四、相關(guān)主要實驗材料和備品： 1．滴定臺（30個)，萬能夾（60個)，容量瓶（50ml、250個)，移液管（1ml、2ml、5ml、10ml各60支)，燒杯（50 ml、100 ml各60個)，研缽（30個)，玻璃棒（60根)，三角漏斗（60個)，定量濾紙（Φ10 cm、200張)。 2．苯巴比妥對照品（100g)，苯巴比妥片（規(guī)格15mg或30mg或100mg、1000片) 3． 氫氧化鈉（500g)，氯化銨（500g)。（均為分析純) 4．甲醇（14, 000 ml)，濃硫酸（1, 000 ml)，氨水（500 ml)（均為分析純) 5．蒸餾水（20 L) 五、實驗內(nèi)容與步驟： 1 溶液配制 1.1 對照液配制 精密稱取苯巴比妥對照品適量，加甲醇溶解并稀釋成適當濃度，作為貯備液。精密吸取一定體積的貯備液3份，分別用0.05 mol/L H2SO4溶液、銨－氯化銨緩沖液（pH 10)，0.1 mol/L NaOH溶液稀釋至50 ml，作為對照液1、2、3。 1.2 測定液配制 取苯巴比妥片20片，精密稱定，研細，精密稱取適量，加甲醇溶解并稀釋至50 ml，過濾，棄去初濾液，精密吸取一定體積的續(xù)濾液3份，分別用0.05 mol/L H2SO4溶液、銨－氯化銨緩沖液（pH 10)，0.1 mol/L NaOH溶液稀釋至50 ml，作為測定液1、2、3。 2 光譜測定 2.1 原光譜掃描 取對照液1、2、3，分別以各自的溶液為空白，于200 nm－400 nm 掃描，測定吸收光譜。 2.2 差示光譜掃描 根據(jù)原光譜圖形（參見教材)，選擇其中兩種溶液，掃描它們的差示光譜，根據(jù)差示光譜圖確定測定波長。 2.3 樣品測定 分別以相應(yīng)的溶液為空白，在選定的波長下測定選定的兩種對照液的吸光度，并計算吸光度差值，記為△A對。另取兩種與對照液相同pH值的樣品測定液，同法測定計算吸光度差值，記為△A樣。用標準品對照法計算樣品溶液的濃度，并計算苯巴比妥片相當于標示量的百分含量。 www.med126.com; 實驗十四 氫溴酸東莨菪堿及其片劑的質(zhì)量分析(綜合性實驗) 一、實驗的目的與要求： 1.了解生物堿的鑒別、檢查的方法與原理 2.掌握氫溴酸東莨菪堿片劑的質(zhì)量分析的方法與原理 二、實驗綜合性要點： 多個環(huán)節(jié)、多種手段、多種方法和技術(shù)實施藥品質(zhì)量的全面控制。 從藥物的外觀性狀、藥品的理化常數(shù)、藥品的真?zhèn)舞b別、藥物的一般雜質(zhì)和特殊雜質(zhì)檢查、藥物的含量測定對藥物的質(zhì)量進行分析。 對小劑量片劑進行含量均勻度檢查，確保用藥的安全和有效。 應(yīng)用旋光儀、酸度計、紅外光譜儀、紙色譜法各種儀器方法。 三、主要實驗儀器設(shè)備： 1.定量毛細管（100支)，溫度計（分浸型250℃、30支)，電熱套（30套) 2.紙色譜法展開室、點樣器（30套)、 3.水浴鍋（10個)、濾紙（10張) 4. 旋光儀及相應(yīng)附件（自動、3臺) 5. 酸度計（雷磁pH-3C型、3臺)，復合電極（3支) 6. 紅外光譜儀（中紅外、2臺) 7. 干燥箱（電熱溫度可調(diào)型、3臺) 8. 紫外分光光度計（掃描型、3臺) 9. 托盤天平（感量0.1g、10個)，分析天平（萬分之一、5臺) 10. 高速離心機（3臺) 四、相關(guān)主要實驗材料和備品： 1．分液漏斗（60ml、90個)，滴定管（酸式、10ml、30個)，試管（硬質(zhì)玻璃、10ml、150個)，移液管（1ml、2ml、5ml、10ml各60支)燒杯（50 ml、100 ml各60個)，離心管（具塞、5ml、30支)，研缽（30個) 2．氫溴酸東莨菪堿(對照品500mg)，氫溴酸東莨菪堿（原料藥500g)、氫溴酸東莨菪堿片(規(guī)格0.3g/片、2000片) 3．蒸餾水（20L)、氯仿（2000ml)，乙醇（1000ml)，硝酸(1000ml),氨水(500ml), 乙醚硅油或液狀石蠟(5000ml) , 高氯酸(1000ml), 冰醋酸(5000ml), 正丁醇(5000ml)，乙醚（500 ml)，鹽酸（500ml)。 4．高錳酸鉀（500g)，醋酸汞（500g),結(jié)晶紫(50g)，碘化鉍鉀（100g)無水磷酸氫二鈉(500g)，無水磷酸二氫鉀（500g),溴甲酚綠(100g), 鄰苯二甲酸氫鉀(500g), 二氯化汞(100g)， 氫氧化鉀（500g),硝酸銀(100g)。注：以上化學試劑均為分析純 五、實驗內(nèi)容與步驟：（詳見中國藥典(二部)2005年版) 1 氫溴酸東莨菪堿原料的分析 1.1 性狀 1.1.1 熔點測定 1.1.2 比旋度測定 1.2 鑒別試驗 1.2.1 沉淀反應(yīng) 1.2.2 紅外光譜對照 1.2.3 溴化物反應(yīng) 1.3 檢查 1.3.1 溶液的澄清度檢查 1.3.2 酸度檢查 1.3.3 其他生物堿的檢查 1.3.4 易氧化物的檢查 1.3.5 干燥失重的檢查 1.4 含量測定（非水滴定法) 2 氫溴酸東莨菪堿片的分析 2.1 性狀 2.2 鑒別（紙色譜法、托烷生物堿的鑒別反應(yīng)、溴化物鑒別反應(yīng)) 2.3 含量均勻度檢查 2.4 含量測定（分光光度法) | 
