實用免疫細胞與核酸:第一節(jié)　神經腫瘤免疫細胞化學

在神經系統(tǒng)腫瘤中，以膠質瘤最多見，次為腦膜瘤、神經鞘膜瘤和垂體腺瘤，再次為孤立性神經纖維瘤、神經纖維瘤病、叢狀神經纖維瘤、節(jié)　細胞瘤、節(jié)　細胞神經母細胞瘤、神經母細胞瘤以及轉移瘤等，其余各類腫瘤均屬少見。這些腫瘤，一般情況下，應用H·E染色，在光鏡下便可作出病理診斷。但是，有時對其細胞起源、細胞學類型、分化程度，特別是各腫瘤間的鑒別，診斷相當困難。近10多年以來，免疫細胞化學的興起，尤其是PAP、ABC、ABPAP、免疫金銀等靈敏性高的染色法，加上特異性很強的單克隆抗體的問世，使得常規(guī)石蠟切片可以被用作免疫細胞化學染色，從而開辟了免疫細胞化學在神經腫瘤領域里廣泛應用的新途徑，往日的一些難題有些已獲得解決，有些正在深入研究并積累了經驗。

腫瘤組織可產生多種多樣的抗原，通過這些抗原成分可以識別各種腫瘤，迄今在石蠟切片上具有診斷價值的抗原已經有100多種，在神經腫瘤診斷和研究中具有重要價值的，有下述幾種，它們可作為標記物供檢測和研究應用。

一、細胞骨架中的中間絲蛋白

在細胞骨架中有三種結構，即微管（microtubules,MT )、微絲（microfilaments,MF)和直徑介于上二者之間的中間絲（intermediate Filaments, IF)。各種細胞的IF都具有相同的結構和不溶于水的特性，但可根據(jù)其組織學分布、生物化學和免疫學特性，將其分為五種類型，即細胞角蛋白細絲（cytokeratin filaments, Ckfilaments)、波形細絲（Vimentin filaments)、結蛋白細絲（desmin fila－ments)、膠質細絲（glial filaments, GF)、神經細絲（neurofilaments NF)，它們分別由細胞角蛋白（CK)、波形細絲蛋白、結蛋白、膠質細絲酸性蛋白和神經細絲蛋白構成。上述五型IF蛋白在組織學分布上具有一定的特性。這種特異性是各種組織在胚胎發(fā)育過程中獲得并一直維持下來的，即使52667788.cn/zhicheng/在腫瘤中瘤細胞仍能基本保持其起源細胞的IF類型，故IF蛋白的免疫組化定位有助于確定腫瘤組織的起源。對神經腫瘤具有診斷和鑒別診斷價值的主要有以下二種：

（一)神經細絲酸性蛋白

神經細絲酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP)可從正常人腦及病人腦中分離獲得，含有豐富的天門冬氨酸和谷氨酸，分子量47000道爾頓。早期，Emg與Bigbee報道，GFAP抗體在星形神經膠質細胞及其腫瘤內呈特異性地定位，其它膠質成分、神經元及其腫瘤均不著色。后來，人們發(fā)現(xiàn)，GFAP不僅在星形神經膠質細胞及其腫瘤中存在，還見于各類型的星形細胞、混合性膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、室管膜瘤、室管膜下巨細胞性星形細胞瘤、含膠質成分的髓母細胞瘤和神經鞘瘤等腫瘤中。目前，人們認為，GFAP在神經腫瘤診斷和研究中的價值在于：①GFAP能確定腫瘤的膠質性質，特別是星形膠質細胞的起源，能清楚顯示在H·E染色下難以辨認的混合性膠質瘤中的星形膠質成分，確定原始神經腫瘤的膠質分化，以及與轉移瘤、腦膜瘤的鑒別。②GFAP與星形細胞瘤的分化程度相關，可根據(jù)免疫組化著色的程度評價腫瘤的惡性程度和細胞分化程度，為臨床提供治療和預后的參考。

GFAP在星形細胞瘤顯示兩種染色類型，一種是泡漿和細胞突起的彌漫性著色，主要見于分化好的星形細胞瘤，例如，纖維性星形細胞瘤和肥胖細胞性星形細胞瘤；另一種是膠質網(wǎng)的著色，在分化好的和間變性星形細胞瘤以及多形性膠質母細胞瘤中都可見到。在分化好的星形細胞瘤，陽性細胞多且免疫組化染色深；在間變性星形細胞瘤，陽性細胞少且染色淺；在肥胖細胞性星形細胞中，胞漿豐富的大瘤細胞陽性，小瘤細胞陰性。

GFAP在少枝膠質細胞瘤、脈絡叢乳頭狀瘤、松果體實質細胞瘤、腦膜瘤和腦膜肉瘤、顱咽管瘤、血管母細胞瘤及黑色素瘤等為陰性。在室管膜瘤的報道中，各家說法不一，有陽性也有陰性的報道。這種情況可能與室管膜上皮的類型不同有關。一種室管膜上皮是立方形，數(shù)量多，胞漿中有8～10nm的中間絲，與星形細胞的不同，GFAP陰性；另一種室管膜上皮是伸張狀細胞，數(shù)量少，散在于立方形細胞之間，GFAP陽性染色。上述二種上皮可各自形成室管膜瘤，GFAP染色各異。

（二)神經細絲

神經細絲（neurofilaments, NF)分布于神經原細胞體和軸突、樹突，副交感神經節(jié)　，腎上腺內外嗜鉻組織等，因此，節(jié)　神經瘤、腎上腺內或外神經母細胞瘤、小腦神經母細胞瘤、副節(jié)　神經瘤均呈NF陽性反應，并且，分化較好的腫瘤的NF陽性瘤細胞數(shù)量要比分化差的多，在兒童的未分化神經母細胞瘤常呈弱陽性反應。NF免疫細胞化學染色有助于神經系統(tǒng)腫瘤的鑒別診斷和預后估計，特別在骨轉移性神經母細胞瘤與原發(fā)性淋巴瘤及尤文氏瘤鑒別診斷中，前者陽性而后二者均為陰性，甚有作用。

二、神經特異性烯醇化酶

烯醇化酶是糖酵解過程中催化2—磷酸甘油酸與磷酸烯醇式丙酮酸互相轉化的水解酶。已知烯醇化酶有多個同工酶，它們是三個基因位點的產物，由α、β和γ三種免疫學上不同的亞單位所組成的二聚體，αα、ββ和γγ三種為純合的烯醇化酶，還有αγ和αβ二種雜合的烯醇化酶。神經烯酶化醇主要是γγ型，其次是αγ型。以前認為只存在于神經元，故命名為神經元特異性烯醇酶（neuron-specific enolase, NSE)，出已證明，除神經元外，它們亦存在于神經纖維和神經內分泌細胞（APUD細胞)，表現(xiàn)為細胞漿陽性染色。在星形膠質細胞瘤、腦室管膜瘤、少枝膠質細胞瘤、腦膜瘤和雪旺氏細胞瘤中，NSE染色為陰性。

對NSE的保存，福爾馬林固定的組織免疫組化反應較弱，而苦味酸、多聚甲醛溶液反應良好。

三、S—100蛋白

1965年，Moor從牛腦浸液中分離出一種高度酸性鈣結合蛋白，富含苯丙氨酸，分子量21kD，它在中性飽和硫酸銨溶液中100%溶解而命名為S—100蛋白（S—100protein)。早期，人們認為S—100蛋白是一種神經系統(tǒng)特異性蛋白，存在于膠質細胞和雪旺氏細胞以及它們的腫瘤中，后來的研究工作證明S—100蛋白也存在于一些非神經源性的正常細胞和腫瘤中。在福爾馬林固定、石蠟包埋組織中，S—100蛋白保存良好，可用兔抗牛S—100蛋白抗血清進行染色，陽性細胞表現(xiàn)為胞漿或同時伴有細胞核彌漫性著色。S—100蛋白染色強度與瘤細胞的分化程度關系不大。

在中樞神經系統(tǒng)，S—100蛋白廣泛分布于星形細胞、少枝膠質細胞、室管膜細胞及其起源的腫瘤中。連錦英等對122例顱內腫瘤作了S—100蛋白和GFAP分布的研究，發(fā)現(xiàn)S—100蛋白在各類型星形細胞www.med126.com瘤、混合性膠質瘤全部陽性，大多數(shù)少枝膠質細胞瘤、多形性膠質母細胞瘤和室管膜瘤陽性，絕大多數(shù)髓母細胞瘤中可見少量S—100蛋白陽性細胞。在部分腦膜瘤、顱咽管瘤、聽神經瘤、血管母細胞瘤等亦可見S—100蛋白陽性。S—100蛋白有助于脈絡從乳頭狀癌與轉移性乳頭狀癌的區(qū)別，前者S—100蛋白陽性，后者為陰性。

在周圍神經系統(tǒng)，S—100蛋白廣泛分布于神經嵴起源的雪旺氏細胞及其腫瘤中。在神經鞘腫瘤和各種神經纖維瘤中，良性神經鞘瘤S—100蛋白含量最高，陽性細胞多，染色也強，An－toni A區(qū)的瘤細胞中S—100蛋白呈均勻地分布于胞漿和核內，而Antoni B區(qū)的瘤細胞排列疏松，S—100蛋白染色不規(guī)則，纖維化區(qū)缺乏S—100蛋白；神經纖維瘤中可見S—100蛋白陽性和陰性兩種細胞，顯示它們的來源可能不同，前者可能是雪旺氏細胞，后者可能是來源于神經周膜和神經內膜細胞。大部分神經源性肉瘤含有S—100蛋白，顯示來自于雪旺氏細胞。這些腫瘤對S—100蛋白的反應一般比良性者弱，而且，在高度間變的腫瘤，由于瘤細胞的反向分化，常喪失合成S—100蛋白的能力。

在神經腫瘤診斷和研究中，除上述三種常用標記物外，還有一些標記物可供選擇或配合應用：①谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase, GS)，其組織中分布與GFAP相同；②髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein, MBP)，用于少枝膠質細胞、雪旺氏細胞及其腫瘤檢測，特別對惡性神經鞘瘤診斷有意義；③髓鞘相關糖蛋白（myelin associated glycoprotein,MAG)，可用于少枝膠質細胞、雪旺氏細胞及其腫瘤檢測，但與多種腫瘤出現(xiàn)交叉反應；④少枝膠質細胞表面抗原，共有4個亞型，O₁和O₂出現(xiàn)在少枝膠質細胞及其腫瘤不成熟或分化低時，O₃和O₄出現(xiàn)于成熟或分化高時，等。

對某種類型的腫瘤來說，不是所有的這種腫瘤都表達相同的抗原；同樣，對某一個腫瘤來說，也不是所有的腫瘤都有一樣的抗原，因此，在神經腫瘤診斷上，二種以上標記物的聯(lián)合應用比用單一標記物更為可靠。