1．細(xì)胞培養(yǎng) 用分散的活細(xì)胞培養(yǎng)稱細(xì)胞培養(yǎng)（Cell culture)。所用培養(yǎng)液是含血清（通常為胎牛血清)、葡萄糖、氨基酸、維生素的平衡溶液，pH7.2～7.4。細(xì)胞培養(yǎng)適于絕大多數(shù)病毒生長(zhǎng)，是病毒實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)技術(shù)。
原代細(xì)胞培養(yǎng)(Primary cell culture)用胰蛋白酶將人胚（或動(dòng)物)組織分散成單細(xì)胞，加一定培養(yǎng)液，37℃孵育1-2天后逐漸在培養(yǎng)瓶底部長(zhǎng)成單層細(xì)胞，如人胚腎細(xì)胞、兔腎細(xì)胞。原代細(xì)胞均為二倍體細(xì)胞，可用于產(chǎn)生病毒疫苗，如兔腎細(xì)胞生產(chǎn)風(fēng)疹疫苗，雞成纖維細(xì)胞產(chǎn)生麻疹疫苗，猴腎細(xì)胞生產(chǎn)脊液灰質(zhì)炎疫苗。因原代細(xì)胞不能持續(xù)傳代培養(yǎng)，故不便用于診斷工作。
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)(Diploid cell cultune)原代細(xì)胞只能傳2-3代細(xì)胞就退化，在多數(shù)細(xì)胞退化時(shí)，少數(shù)細(xì)胞能繼續(xù)傳下來(lái)，且保持染色體數(shù)為二倍體，稱為二倍體細(xì)胞。二倍體細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，并可傳50代保持二倍體特征，通常是胚胎組織的成纖維細(xì)胞（如WI-38細(xì)胞系)。二倍體細(xì)胞一經(jīng)建立，應(yīng)盡早將細(xì)胞懸浮于10%二甲基亞砜中，大量分裝安瓿貯存于液氮（-196℃)內(nèi)，做為“種子”，供以后傳代用。目前多用二倍體細(xì)胞系制備病毒疫苗，也用于病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷工作。
傳代細(xì)胞培養(yǎng) (Continous cell culture)通常是由癌細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而來(lái)（如 Hela 、Hep-2、 Vero細(xì)胞系等)，染色體數(shù)為非整倍體，細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，可無(wú)限傳代，在液氮中能長(zhǎng)期保存。目前廣泛用于病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷工作，根據(jù)病毒對(duì)細(xì)胞的親嗜性，選擇敏感的細(xì)胞系使用。
表23-3 病毒增殖用部分細(xì)胞系及來(lái)源
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細(xì)胞系名稱 |
來(lái)源 |
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二倍體細(xì)胞系 HDCS MRC-9 WI-38 傳代細(xì)胞系 Hela Hep-2 Vero BHK |
人胚肺細(xì)胞 人宮頸癌細(xì)胞 人上皮細(xì)胞 猴腎細(xì)胞 地鼠腎細(xì)胞 |
淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（Lymphocyte culture)正常成熟的淋巴細(xì)胞不經(jīng)特殊處理不能在體外傳代培養(yǎng)。然而EBV感染的B淋巴細(xì)胞卻能在體外持續(xù)傳代，這是病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞的例證，也是分離出EBV的標(biāo)志。T淋巴細(xì)胞在加入T細(xì)胞生長(zhǎng)因子（IL-2)后可在體外培養(yǎng)，為研究人類逆轉(zhuǎn)錄病毒（HIV、HTLV)提供了條件，HIV在T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物中增殖形成多核巨細(xì)胞。
2．動(dòng)物試驗(yàn)這是最原始的病毒分離培養(yǎng)方法。常用小白鼠、田鼠、豚鼠、家兔及猴等。接種途徑根據(jù)各病毒對(duì)組織的親嗜性而定，可接種鼻內(nèi)、皮內(nèi)、腦內(nèi)、皮下、腹腔或靜脈，例如嗜神經(jīng)病毒（腦炎病毒)接種鼠腦內(nèi)，柯薩奇病毒接種乳鼠（一周齡)腹腔或腦內(nèi)。接種后逐日觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)病情況，如有死亡，則取病變組織剪碎，研磨均勻，制成懸液，繼續(xù)傳代，并作鑒定。醫(yī)學(xué)全在線網(wǎng)站www.med126.com
3．雞胚培養(yǎng)用受精孵化的活雞胚培養(yǎng)病毒比用動(dòng)物更加經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便。根據(jù)病毒的特性可分別接種在雞胚絨毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔、卵黃囊、腦內(nèi)或靜脈內(nèi)，如有病毒增殖，則雞胚發(fā)生異常變化或羊水、尿囊液出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，常用于流感病毒及腮腺炎病毒等的分離培養(yǎng)；但很多病毒在雞胚中不生長(zhǎng)。
