病毒感染的實(shí)驗(yàn)室檢查診斷

　　（二)直接檢測(cè)病毒抗原

　　1．免疫熒光（IF)技術(shù) 如前所述IF可用于細(xì)胞培養(yǎng)病毒的鑒定，也適用檢測(cè)臨床標(biāo)本中病毒抗原，具有快速、特異的優(yōu)點(diǎn)。直接免疫熒光技術(shù)是用熒光素直接標(biāo)記特異性抗體，檢測(cè)病毒抗原；間接免疫熒光技術(shù)是先用特異性抗體與標(biāo)本中抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的抗體與特異性抗體結(jié)合，從而間接識(shí)別抗原�？扇⊙屎砻撀浼�(xì)胞，檢測(cè)呼吸道合胞病毒、流感及副流感病毒抗原；取病灶刮片或腦活檢標(biāo)本，檢測(cè)單純皰疹病毒抗原；取尿沉渣檢測(cè)巨細(xì)胞病毒抗原等。近年來(lái)使用單克隆抗體大大提高了檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。

　　2．免疫酶法（IEA)原理與應(yīng)用范圍同免疫熒光技術(shù)，IEA是用酶（通常是過(guò)氧化物酶)取代熒光素標(biāo)記抗體，酶催化底物形成有色產(chǎn)物，在普通光學(xué)顯微鏡下清晰可見(jiàn)，不需熒光顯微鏡，便于推廣使用。

　　3．放射免疫測(cè)定法（RIA) 有競(jìng)爭(zhēng)RIA和因相RNA二種方法。競(jìng)急RIA是同位素標(biāo)記的已知抗原與標(biāo)本中未標(biāo)記的待檢抗原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合特異性抗體的試驗(yàn)，將形成的復(fù)合物分離出來(lái)，用放射免疫檢測(cè)儀測(cè)定放射活性，同時(shí)與系列稀釋的標(biāo)準(zhǔn)抗原測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，確定出待檢抗原的濃度。因相RIA是用特異性抗體包被因相以捕獲標(biāo)本中的抗原，然后加入放射性標(biāo)記的特異性抗體與抗原結(jié)合，測(cè)定放射活性，得知抗原的量。RIA是最敏感的方法，已用于測(cè)定糞便中甲肝病毒、輪狀病毒抗原及血液中乙肝病毒抗原。

　　4．酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)先將特異性抗體包被（吸附)到塑料微培板孔中以捕捉標(biāo)本中相應(yīng)抗原，然后加入酶標(biāo)特異性抗體，相應(yīng)抗原被夾在抗體之間，當(dāng)加入酶的底物后顯色，顯色程度直接反映了標(biāo)本中病毒抗原的量。因其敏感性接近RIA，又不接觸放射性物質(zhì)，已被多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用。

　　此外，對(duì)難以分離培養(yǎng)，形態(tài)特殊且病毒數(shù)量較多的標(biāo)本，可用電鏡或免疫電鏡法直接觀察，是一種快速診斷與鑒定病毒的方法，如輪狀病毒、乙肝病毒。

　　四、特異性抗體的檢測(cè)特異性抗體的檢測(cè)

　　病毒感染后通常誘發(fā)針對(duì)病毒一種或多種抗原免疫應(yīng)答，特異性抗體效價(jià)升高或lgM抗體出現(xiàn)有輔助臨床診斷的價(jià)值。

　�。ㄒ�)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CF) CF分二個(gè)階段：1.抗原與抗體（一個(gè)為已知，一個(gè)為待檢)混合，加入定量補(bǔ)體，若抗原與抗體相對(duì)應(yīng)，則補(bǔ)體被消耗；2.在上述混合物中加入溶血素致敏的綿羊紅細(xì)胞，若補(bǔ)本已與抗原抗體復(fù)合物完全結(jié)合，沒(méi)有剩補(bǔ)體存在，那么綿羊紅細(xì)胞不會(huì)溶血，結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明待檢標(biāo)本中有特異性存在，出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)血清標(biāo)本最高稀釋度為抗體的效價(jià)。反之為陰性結(jié)果。由于補(bǔ)體結(jié)合抗體產(chǎn)生早，消失快，適于診斷病毒近期感染。（表23-5)。醫(yī).學(xué).全.在線.網(wǎng).站.提供

*此例的抗體效價(jià)升高4倍，有診斷意義。

　�。ǘ�)中和試驗(yàn)（NT)在活體或活細(xì)胞內(nèi)測(cè)定病毒被特異性抗體中和、而失去致病力的試驗(yàn)。試驗(yàn)時(shí)：①須先測(cè)出病毒的半數(shù)致死量（LD50)或半數(shù)感染量（ID50)；②隨即取活病毒與被試血清按不同比例混合，放置1～2小時(shí)讓其充分中和；③將病毒與血清混合液注入各組動(dòng)物、雞胚或組織細(xì)胞培養(yǎng)管內(nèi)培養(yǎng)；④根據(jù)動(dòng)物、雞胚死亡數(shù)或細(xì)胞病變的管數(shù)，計(jì)算出百分比（%)，然后再計(jì)算這些試驗(yàn)對(duì)象中的半數(shù)免于死亡或免于致病所需要的最少量血清（或最大量的病毒)，就是該血清的中和抗體效價(jià)（稱為50%終點(diǎn)的中和效價(jià))。診斷病毒性疾病時(shí)，須取病人雙份血清同時(shí)做對(duì)比試驗(yàn)，病后血清的中和抗體效價(jià)也必須超過(guò)病初血清4倍以上，才能確診（表23-6)。用此法鑒定病毒時(shí)，須將病毒分別與免疫血清及血清正常血清（對(duì)照)混合做對(duì)比試驗(yàn)，免疫血清比正常血清多中和50～100倍劑量的病毒，才能斷定是該病毒。、

表23－6　病人雙份血清的病毒中和試驗(yàn)結(jié)果（組織細(xì)胞培養(yǎng)的中和試驗(yàn))

　說(shuō)明：①TCID50=組織培養(yǎng)半數(shù)感染劑量。

　�、诿糠N稀釋度接種4支組織細(xì)胞培養(yǎng)管；0=未出現(xiàn)細(xì)胞致病作用；+=出現(xiàn)細(xì)胞致病作用。

　�、鄞死�的病后血清中和抗體效價(jià)比病初血清增高8倍，有診斷意義。

　　病毒中和抗體的特異性高，持續(xù)時(shí)間久，以往受顯性或隱性感染后，血中可長(zhǎng)期存在中和抗體，所以適用于流行病學(xué)調(diào)查或人群免疫水平研究，但因試驗(yàn)方法繁雜，耗用動(dòng)物、雞胚或細(xì)胞培養(yǎng)較多，故一般不作常規(guī)使用。

　　（三)血凝抑制試驗(yàn)（Hemagglutination inhibition test,HIT)某些病毒（流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、腦炎病毒等)能凝集紅細(xì)胞，而抗體與這些病毒結(jié)合后卻能阻止它們的凝集，若雙份血清有≥4倍以上滴度增高，也可用于診斷這類病毒感染。本法簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、特異性高，常用于流行病學(xué)調(diào)查等。

　�。ㄋ�)lgM捕捉ELISA 特異性lgM出現(xiàn)于病毒感染的早期或病毒感染的活動(dòng)期，因此可從急性期病人單份血清中檢出特異性lgM，這是病毒感染實(shí)驗(yàn)室早期診斷的可靠方法。實(shí)驗(yàn)中先用u鏈血清包被微培板孔，用以捕捉血清標(biāo)本中的lgM類抗體，再加入特異性病毒抗原及酶標(biāo)抗體以證實(shí)特異性lgM的存在�，F(xiàn)已廣泛用于病毒病的早期診斷。在先天性感染中，lgM檢測(cè)有特殊意義，因lgM不能通過(guò)胎盤(pán)，新生兒血清中發(fā)現(xiàn)抗病毒lgM提示為宮內(nèi)感染。

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