二、雙鏈DNA抗體（Double strand DNA antibody, dsDNA)的檢測方法和應(yīng)用
目前的研究指出，用免疫細(xì)胞化學(xué)檢查病人血清中的dsDNA抗體為作為系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷依據(jù)之一。佐佐木毅等和徐世玉等發(fā)現(xiàn)一些臨床癥狀和血清學(xué)檢查不典型的紅斑狼瘡病人，在發(fā)病早期就出現(xiàn)抗dsDNA抗體，認(rèn)為這可能有助于早期診斷。
1．用馬疫錐蟲抗原檢測抗dsDNA抗體方法
�。�1)底物制備：用馬疫錐蟲感染小鼠2～4天后，取小鼠的外周血，按血液細(xì)胞計數(shù)法作馬疫錐蟲計數(shù)，達(dá)到4.3×106～5.6×106時即采尾血涂片，空氣干燥后直接使用或4℃保存?zhèn)溆谩?/P>
�。�2)方法和結(jié)果：血涂片加入少量水溶去紅細(xì)胞，待干。加入一滴被檢血清于其上，移濕盒中，在室溫中30～40min，用0.01mol/l pH7.4PBS洗5～10min，取出吸干，加兔抗人IgG熒光抗體，在濕盒中染色30～45min，再按上法洗片，待干，熒光顯微鏡檢查。陽性者可見錐蟲的核及動基體發(fā)出明亮綠色熒光。
2．用短膜蟲抗原檢測抗dsDNA抗體方法
�。�1)底物制備：用北京生物制品研究所制備的短膜蟲涂片標(biāo)本作抗原。
�。�2)方法和結(jié)果：用上述馬疫錐蟲抗原的間接免疫熒光染色法。短膜蟲是一種血鞭毛蟲，動基體中含純凈的dsDNA可作為抗原，陽性結(jié)果可見蟲體近尾或中部有一致密熒光亮點，為動基體，近頭部有一淡綠色亮點，為細(xì)胞核。陰性結(jié)果動基體上無熒光。陽性血清自1：5稀釋，測定效價。
3．用酸洗脫鼠肝細(xì)胞抗原檢測抗dsDNA抗體方法（參考Ta的方法)
�。�1)底物準(zhǔn)備：將6個月小白鼠剪斷上腔靜脈，立即用0.01mol/l pH7.4 的PBS從門靜脈灌洗至鼠肝發(fā)白，取出肝組織剪成接觸面為0.15cm×0.5cm的小塊，印片，空氣中干燥后用丙酮固定10min，再空氣干燥。浸入0.1mol/l HCl中洗脫30min，并輕輕的搖動，隨后，再用0.15mol/l PBS pH7.4洗2次，每次10min，再用0.01mol/l pH7.6的PBS洗5min，空氣干燥。即可用或在4℃中貯存。
（2)方法和結(jié)果：用間接免疫熒光法檢測，陽性結(jié)果可見細(xì)胞核呈黃綠色熒光。用酸洗脫鼠肝細(xì)胞標(biāo)本作抗原與馬疫錐蟲、短膜蟲法比較結(jié)果，和馬疫錐蟲法符合率達(dá)93%，其中馬疫錐蟲法4例陽性，為系統(tǒng)性硬皮病，而此法為陰性，說明此法較馬疫錐蟲法更特異。此法與短膜蟲法比較，符合率為95%，P>0.05，說明二法無顯著差別。其中此法陽性而短膜蟲法陰性的3例，均符合系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷，并均有腎損害。短膜蟲法陽性而此法陰性的6例均為待查病例，不能證實為系統(tǒng)紅斑狼瘡診斷，說明此法在特異性方面更佳。
三、抗核仁抗體的檢測法
用HEP-2細(xì)胞或大鼠肝細(xì)胞作抗原，作間接免疫熒光染色。結(jié)果可見細(xì)胞核核仁呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。抗核仁抗體在硬皮病、皮肌炎、系統(tǒng)性硬化癥等中最多見。
四、抗組蛋白抗體的檢測方法
1．組蛋白的提取方法取大白鼠肝40g 加入160ml0.01mol/l Ph7.4 Tris HCl緩沖液，制成勻漿后進行濃度梯度離心（27000rpm×60min)，沉淀物中加入蒸餾水90ml，再以超聲粉碎儀將細(xì)胞打碎，離心（3000rpm×15min)取上清液，再加入一定量的1mol/l 硫酸，使硫酸的最終濃度為0.2mol/L,混勻后，離心（3000rpm×15min)，取上清液，加入4～5倍體積的無水乙醇，置于-20℃冰箱3天后，離心（3000rpm×15min)以乙醚洗滌沉淀，真空干燥，儲存于-20℃冰箱中備用。醫(yī)學(xué).全在.線www.med126.com
2．酸處理的鼠腎底物 鼠腎冰凍切片（厚度4μm)，以丙酮固定后吹干，密封，在-20℃冰箱中儲存?zhèn)溆谩Ｓ们霸儆?.1mol/L鹽酸中浸泡30min，然后再置于0.01mol/l pH7.4PBS中浸泡2次。
3．組蛋白重建的鼠腎底物在上述酸處理的鼠腎底物上加入30μl乙制備好的組蛋白，稀釋濃度為25μl/ml，在室溫中濕盒內(nèi)孵育30min后，以0.01mol/l p7.4PBS浸2次。
4．檢測方法用組蛋白重建的鼠腎底物，做間接免疫熒光測定。
5．結(jié)果1960年Kunkle首先在SLE中發(fā)現(xiàn)抗組蛋白抗體（Antihistone antibody ,AHA)，是診斷藥物性SLE的一項較好的指標(biāo)。在活動期SLE中AHA可達(dá)90%。
